肖俊輝，周玉生（1.南華大學附屬第二醫(yī)院藥劑科，湖南 衡陽 421001；2.南華大學藥物藥理研究所，湖南 衡陽 421001）

目前，膠囊已經成為除片劑外的主要口服固體制劑劑型，制備膠囊的主要原料是藥用明膠。市場上劣質明膠主要是鞣制過含鉻的皮革廢料生產的工業(yè)明膠[1]，其含有六價鉻離子易被人體吸收，從而引起皮膚濕疹、黏膜炎、喘息性氣管炎等疾病，對肝臟、腎臟等器官產生危害，破壞血液系統及細胞，導致骨骼方面的疾病發(fā)生，且有致癌的隱患，甚至影響人的遺傳基因DNA。

2010年3月，我國重新修訂了空心膠囊明膠的質量標準，相比2000年版的標準，增加了鉻檢查，規(guī)定鉻含量不得大于百萬分之二。2010年版《中國藥典》（二部）采用原子吸收光譜法測定藥用膠囊中鉻含量。此法雖具有精確靈敏等優(yōu)點，但檢測時間長、前處理方法復雜[2]、需要大型儀器、不能實現現場檢測等缺點，給檢測帶來諸多不便[3]。為此，筆者利用干法灰化法處理膠囊，采用二苯碳酰二肼顯色后以紫外-可見分光光度法測定鉻的含量，其使用設備簡單、操作方便、結果準確。

1 材料

UV2550紫外-可見分光光度儀、AA6800型原子吸收分光光度儀、AY220型電子分析天平（日本島津公司）；XT-9900型智能微波消解儀（上海新拓分析儀器科技有限公司）。

鉻標準液（濟南眾標科技有限公司，標準編號:GBWE081001，質量濃度:1.000 mg/ml）；磷酸鹽緩沖液、1 mol/L氯化鈉溶液、0.5%高錳酸鉀溶液、10%尿素溶液、10%亞硝酸鈉溶液、0.5%焦磷酸鈉溶液、二苯碳酰二肼的丙酮溶液均為試驗時自配；所用試劑均為分析純，試驗用水為去離子水。

膠囊來源:市面隨機購買10種藥品膠囊，清空內容物，用少量水清洗3次，標記為樣品1～10，其詳情見表1。

表1 膠囊樣品詳情Tab 1 Details of capsule sample

2 方法與結果

2.1 波長選擇

取標準鉻溶液適量，加入1 mol/L硫酸10 ml、1 mol/L氯化鈉溶液10 ml、去離子水10 ml，過濾加熱煮沸，滴加0.5%高錳酸鉀至溶液不褪色，加入10%尿素溶液10 ml，劇烈振搖下滴加10%亞硝酸鈉溶液至溶液褪色，加0.5%焦磷酸鈉溶液2.0 ml、二苯碳酰二肼的丙酮溶液0.5 ml；同時做空白對照。于380～700 nm測其吸光度，結果表明其在540 nm波長處有最大吸收，光譜見圖1。

圖1 紫外-可見吸收光譜Fig 1 UV-visible absorption spectrum

2.2 線性關系考察

取標準鉻溶液0、0.20、0.40、0.60、1.00 ml，分別相當于含鉻0、4.0、8.0、12.0、20.0 μg，按“2.1”項下方法于540 nm波長處測其吸光度，以吸光度（y）對質量濃度（x）繪制工作曲線。結果，線性回歸方程為y＝0.01833x－0.0022（r＝0.9997），表明鉻檢測質量濃度線性范圍為0.2～1.0 μg/ml。

2.3 溶液穩(wěn)定性考察

在試驗中，筆者發(fā)現吸光度隨時間延長而增大，15 min后趨于穩(wěn)定。因此試驗必須在定容15 min后開始測定，以保證結果的準確性。精密吸取標準鉻溶液1.00 ml，依法配制后于2、4、6、12、24 h內測定含量，結果其RSD為0.64%，表明本試驗溶液在24 h內穩(wěn)定性良好。

2.4 精密度試驗

精密吸取標準鉻溶液1.00 ml，按“2.1”項下方法重復測定7次，RSD＝0.78%，表明本試驗方法精密度良好。

2.5 重復性試驗

精密吸取標準鉻溶液7份，每份1.00 ml，按“2.1”項下方法測定，結果含量的RSD＝0.94%，表明本試驗方法重復性良好。

2.6 回收率試驗

在不同膠囊樣本中分別加入不同量的鉻進行加樣回收試驗，測得鉻的平均回收率為100.03%，RSD＝0.05%，詳見表2。

表2 回收率試驗結果（n＝5）Tab 2 Results of recovery tests（n＝5）

2.7 共存離子的影響

本試驗考察了一些共存離子對方法的影響。結果顯示在測定的相對誤差小于5%的情況下，500倍的K+、Na+、Mg2+、Zn2+、Mn2+、Ca2+、Ni2+、Fe2+，200倍的Ba2+、Al3+、Cu2+，100倍的Pb2+均對試驗無干擾；10倍的V5+會生成棕黃色絡合物，200 mg/L的Mo6+會生成紫紅色絡合物，其絡活物均不穩(wěn)定，在10 min內消失成無色；Fe3+會生成黃棕色絡合物，因此，本試驗通過加入焦磷酸鈉溶液屏蔽Fe3+排除干擾；Ag+會生成紫紅色絡合物，因此，本試驗通過加入氯化鈉溶液沉淀Ag+，排除試驗干擾。

2.8 樣品中鉻含量測定

將樣品膠囊剪碎，精密稱取樣品0.500 g，于坩堝中緩慢加熱，碳化后，加濃硝酸數滴，觀察到氣體停止逸出，放入高溫爐中，600℃加熱2 h，取出冷卻，加入1 mol/L硫酸10 ml、去離子水10 ml，溶解殘渣，按“2.1”方法于540 nm波長處測其吸光度，通過線性回歸方程測得其中鉻含量，結果見表3。

表3 樣品膠囊中鉻含量測定結果（mg/kg，n＝3）Tab 3 Results of content determination of chromium in the capsule samples（mg/kg，n＝3）

2.9 與原子吸收光譜法測定結果比較

參照2010年版《中國藥典》“明膠空心膠囊”[4]項下規(guī)定，按程序微波消解樣品，采用原子吸收光譜法測定鉻含量[5]，并與本試驗測定結果比較。結果表明，兩種測定方法結果比較無顯著差異（n＝10，t＝1.894，P＞0.05）。微波消解樣品程序見表4，兩種測定方法結果比較見表5。

表4 微波消解程序Tab 4 Working conditions of the microwave

表5 兩種方法測定結果比較（mg/kg）Tab 5 Comparison of results between 2 kinds of methods（mg/kg）

3 討論

周濤[6]報道了膠囊經預處理后加顯色劑后與標準鉻溶液對照液比較，檢測空心膠囊鉻限量的方法。該法雖然操作簡便，但其檢測結果不能定量，而且人為主觀因素對結果影響很大，適用范圍窄。而本試驗檢測結果客觀準確，能滿足不同情況下的定量檢測。

本試驗采用《食品添加劑》明膠GB6783-1994國家標準[7]中干法灰化法對膠囊樣品進行前處理。王彩艷等[8]對干法灰化法與微波消解法的效果進行了比較研究，發(fā)現干法灰化法無鉻元素丟失、使用儀器簡單、處理效果良好，故本試驗采用此法進行樣品前處理。

綜上，本試驗操作簡便快捷，無需昂貴儀器，精密度、回收率及重復性均較好，結果可靠準確；與《中國藥典》規(guī)定的原子光譜法測定結果比較，兩者無顯著性差異，可為膠囊中的鉻提供了一種簡便有效的含量檢測方法。

[1]姚龍坤.藥用明膠質量對膠囊安全性的影響[J].明膠科學與技術，2006，26（4）:204.

[2]黃輝，李本濤，邵鴻飛.微波消解-石墨爐原子吸收光譜法測定膠囊中的痕量鉻[J].化學分析計量，2011，20（3）:30.

[3]謝秀紅，李勇勤.藥用明膠硬膠囊殼中重金屬含量的研究[J].今日藥學，2010，20（1）:28.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:二部[S].2010年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:1204-1205.

[5]韓麗琴，董順福，劉建華.金銀花中金屬元素與總黃酮含量的測定[J].中國藥房，2007，18（33）:2596.

[6]周濤.檢測空心膠囊鉻限量的簡便方法[J].明膠科學與技術，2009，29（3）:139.

[7]國家技術監(jiān)督局.GB6783-1994中華人民共和國國家標準:食用添加劑明膠[S].1994-01-02.

[8]王彩艷，牛艷.干法灰化法與微波消解法測定枸杞中鉻[J].農業(yè)機械，2012（3）:126.