肖俊輝，周玉生（1.南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院藥劑科，湖南 衡陽(yáng) 421001；2.南華大學(xué)藥物藥理研究所，湖南 衡陽(yáng) 421001）

目前，膠囊已經(jīng)成為除片劑外的主要口服固體制劑劑型，制備膠囊的主要原料是藥用明膠。市場(chǎng)上劣質(zhì)明膠主要是鞣制過(guò)含鉻的皮革廢料生產(chǎn)的工業(yè)明膠[1]，其含有六價(jià)鉻離子易被人體吸收，從而引起皮膚濕疹、黏膜炎、喘息性氣管炎等疾病，對(duì)肝臟、腎臟等器官產(chǎn)生危害，破壞血液系統(tǒng)及細(xì)胞，導(dǎo)致骨骼方面的疾病發(fā)生，且有致癌的隱患，甚至影響人的遺傳基因DNA。

2010年3月，我國(guó)重新修訂了空心膠囊明膠的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，相比2000年版的標(biāo)準(zhǔn)，增加了鉻檢查，規(guī)定鉻含量不得大于百萬(wàn)分之二。2010年版《中國(guó)藥典》（二部）采用原子吸收光譜法測(cè)定藥用膠囊中鉻含量。此法雖具有精確靈敏等優(yōu)點(diǎn)，但檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、前處理方法復(fù)雜[2]、需要大型儀器、不能實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)等缺點(diǎn)，給檢測(cè)帶來(lái)諸多不便[3]。為此，筆者利用干法灰化法處理膠囊，采用二苯碳酰二肼顯色后以紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定鉻的含量，其使用設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、結(jié)果準(zhǔn)確。

1 材料

UV2550紫外-可見(jiàn)分光光度儀、AA6800型原子吸收分光光度儀、AY220型電子分析天平（日本島津公司）；XT-9900型智能微波消解儀（上海新拓分析儀器科技有限公司）。

鉻標(biāo)準(zhǔn)液（濟(jì)南眾標(biāo)科技有限公司，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào):GBWE081001，質(zhì)量濃度:1.000 mg/ml）；磷酸鹽緩沖液、1 mol/L氯化鈉溶液、0.5%高錳酸鉀溶液、10%尿素溶液、10%亞硝酸鈉溶液、0.5%焦磷酸鈉溶液、二苯碳酰二肼的丙酮溶液均為試驗(yàn)時(shí)自配；所用試劑均為分析純，試驗(yàn)用水為去離子水。

膠囊來(lái)源:市面隨機(jī)購(gòu)買10種藥品膠囊，清空內(nèi)容物，用少量水清洗3次，標(biāo)記為樣品1～10，其詳情見(jiàn)表1。

表1 膠囊樣品詳情Tab 1 Details of capsule sample

2 方法與結(jié)果

2.1 波長(zhǎng)選擇

取標(biāo)準(zhǔn)鉻溶液適量，加入1 mol/L硫酸10 ml、1 mol/L氯化鈉溶液10 ml、去離子水10 ml，過(guò)濾加熱煮沸，滴加0.5%高錳酸鉀至溶液不褪色，加入10%尿素溶液10 ml，劇烈振搖下滴加10%亞硝酸鈉溶液至溶液褪色，加0.5%焦磷酸鈉溶液2.0 ml、二苯碳酰二肼的丙酮溶液0.5 ml；同時(shí)做空白對(duì)照。于380～700 nm測(cè)其吸光度，結(jié)果表明其在540 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，光譜見(jiàn)圖1。

圖1 紫外-可見(jiàn)吸收光譜Fig 1 UV-visible absorption spectrum

2.2 線性關(guān)系考察

取標(biāo)準(zhǔn)鉻溶液0、0.20、0.40、0.60、1.00 ml，分別相當(dāng)于含鉻0、4.0、8.0、12.0、20.0 μg，按“2.1”項(xiàng)下方法于540 nm波長(zhǎng)處測(cè)其吸光度，以吸光度（y）對(duì)質(zhì)量濃度（x）繪制工作曲線。結(jié)果，線性回歸方程為y＝0.01833x－0.0022（r＝0.9997），表明鉻檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為0.2～1.0 μg/ml。

2.3 溶液穩(wěn)定性考察

在試驗(yàn)中，筆者發(fā)現(xiàn)吸光度隨時(shí)間延長(zhǎng)而增大，15 min后趨于穩(wěn)定。因此試驗(yàn)必須在定容15 min后開(kāi)始測(cè)定，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)鉻溶液1.00 ml，依法配制后于2、4、6、12、24 h內(nèi)測(cè)定含量，結(jié)果其RSD為0.64%，表明本試驗(yàn)溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取標(biāo)準(zhǔn)鉻溶液1.00 ml，按“2.1”項(xiàng)下方法重復(fù)測(cè)定7次，RSD＝0.78%，表明本試驗(yàn)方法精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

精密吸取標(biāo)準(zhǔn)鉻溶液7份，每份1.00 ml，按“2.1”項(xiàng)下方法測(cè)定，結(jié)果含量的RSD＝0.94%，表明本試驗(yàn)方法重復(fù)性良好。

2.6 回收率試驗(yàn)

在不同膠囊樣本中分別加入不同量的鉻進(jìn)行加樣回收試驗(yàn)，測(cè)得鉻的平均回收率為100.03%，RSD＝0.05%，詳見(jiàn)表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝5）Tab 2 Results of recovery tests（n＝5）

2.7 共存離子的影響

本試驗(yàn)考察了一些共存離子對(duì)方法的影響。結(jié)果顯示在測(cè)定的相對(duì)誤差小于5%的情況下，500倍的K+、Na+、Mg2+、Zn2+、Mn2+、Ca2+、Ni2+、Fe2+，200倍的Ba2+、Al3+、Cu2+，100倍的Pb2+均對(duì)試驗(yàn)無(wú)干擾；10倍的V5+會(huì)生成棕黃色絡(luò)合物，200 mg/L的Mo6+會(huì)生成紫紅色絡(luò)合物，其絡(luò)活物均不穩(wěn)定，在10 min內(nèi)消失成無(wú)色；Fe3+會(huì)生成黃棕色絡(luò)合物，因此，本試驗(yàn)通過(guò)加入焦磷酸鈉溶液屏蔽Fe3+排除干擾；Ag+會(huì)生成紫紅色絡(luò)合物，因此，本試驗(yàn)通過(guò)加入氯化鈉溶液沉淀Ag+，排除試驗(yàn)干擾。

2.8 樣品中鉻含量測(cè)定

將樣品膠囊剪碎，精密稱取樣品0.500 g，于坩堝中緩慢加熱，碳化后，加濃硝酸數(shù)滴，觀察到氣體停止逸出，放入高溫爐中，600℃加熱2 h，取出冷卻，加入1 mol/L硫酸10 ml、去離子水10 ml，溶解殘?jiān)?，按?.1”方法于540 nm波長(zhǎng)處測(cè)其吸光度，通過(guò)線性回歸方程測(cè)得其中鉻含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品膠囊中鉻含量測(cè)定結(jié)果（mg/kg，n＝3）Tab 3 Results of content determination of chromium in the capsule samples（mg/kg，n＝3）

2.9 與原子吸收光譜法測(cè)定結(jié)果比較

參照2010年版《中國(guó)藥典》“明膠空心膠囊”[4]項(xiàng)下規(guī)定，按程序微波消解樣品，采用原子吸收光譜法測(cè)定鉻含量[5]，并與本試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果比較。結(jié)果表明，兩種測(cè)定方法結(jié)果比較無(wú)顯著差異（n＝10，t＝1.894，P＞0.05）。微波消解樣品程序見(jiàn)表4，兩種測(cè)定方法結(jié)果比較見(jiàn)表5。

表4 微波消解程序Tab 4 Working conditions of the microwave

表5 兩種方法測(cè)定結(jié)果比較（mg/kg）Tab 5 Comparison of results between 2 kinds of methods（mg/kg）

3 討論

周濤[6]報(bào)道了膠囊經(jīng)預(yù)處理后加顯色劑后與標(biāo)準(zhǔn)鉻溶液對(duì)照液比較，檢測(cè)空心膠囊鉻限量的方法。該法雖然操作簡(jiǎn)便，但其檢測(cè)結(jié)果不能定量，而且人為主觀因素對(duì)結(jié)果影響很大，適用范圍窄。而本試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果客觀準(zhǔn)確，能滿足不同情況下的定量檢測(cè)。

本試驗(yàn)采用《食品添加劑》明膠GB6783-1994國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[7]中干法灰化法對(duì)膠囊樣品進(jìn)行前處理。王彩艷等[8]對(duì)干法灰化法與微波消解法的效果進(jìn)行了比較研究，發(fā)現(xiàn)干法灰化法無(wú)鉻元素丟失、使用儀器簡(jiǎn)單、處理效果良好，故本試驗(yàn)采用此法進(jìn)行樣品前處理。

綜上，本試驗(yàn)操作簡(jiǎn)便快捷，無(wú)需昂貴儀器，精密度、回收率及重復(fù)性均較好，結(jié)果可靠準(zhǔn)確；與《中國(guó)藥典》規(guī)定的原子光譜法測(cè)定結(jié)果比較，兩者無(wú)顯著性差異，可為膠囊中的鉻提供了一種簡(jiǎn)便有效的含量檢測(cè)方法。

[1]姚龍坤.藥用明膠質(zhì)量對(duì)膠囊安全性的影響[J].明膠科學(xué)與技術(shù)，2006，26（4）:204.

[2]黃輝，李本濤，邵鴻飛.微波消解-石墨爐原子吸收光譜法測(cè)定膠囊中的痕量鉻[J].化學(xué)分析計(jì)量，2011，20（3）:30.

[3]謝秀紅，李勇勤.藥用明膠硬膠囊殼中重金屬含量的研究[J].今日藥學(xué)，2010，20（1）:28.

[4]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:二部[S].2010年版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:1204-1205.

[5]韓麗琴，董順福，劉建華.金銀花中金屬元素與總黃酮含量的測(cè)定[J].中國(guó)藥房，2007，18（33）:2596.

[6]周濤.檢測(cè)空心膠囊鉻限量的簡(jiǎn)便方法[J].明膠科學(xué)與技術(shù)，2009，29（3）:139.

[7]國(guó)家技術(shù)監(jiān)督局.GB6783-1994中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn):食用添加劑明膠[S].1994-01-02.

[8]王彩艷，牛艷.干法灰化法與微波消解法測(cè)定枸杞中鉻[J].農(nóng)業(yè)機(jī)械，2012（3）:126.