谷 娜，郭勝才

復(fù)方樟腦搽劑為醫(yī)院制劑，用于夏季皮炎、痱子、瘙癢等癥。其主要成分為樟腦、苯酚等。苯酚在常溫下不穩(wěn)定(易氧化和揮發(fā))，為保證制劑的質(zhì)量和療效，有必要在制備和儲(chǔ)存過程中控制其含量。該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無含量測定項(xiàng)，且文獻(xiàn)中苯酚的鑒別檢驗(yàn)方法不靈敏、操作不方便，難以得出呈正反應(yīng)的結(jié)果［1-2］。本文參考有關(guān)文獻(xiàn)［3］，利用高效液相色譜法測定制劑中苯酚的含量，該方法簡單、操作方便，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，重現(xiàn)性好，可作為該制劑的含量測定方法和質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 惠普1100系列高效液相色譜儀(包括脫氣機(jī)、四元泵、光電二極管陣列檢測器和色譜工作站);FA(N)/JA(N)電子天平(上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司)。

1.2 試藥 苯酚對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào):200902，含量99.90%)，甲醇為一級(jí)色譜純，水為純凈水，復(fù)方樟腦搽劑為本院自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:ZORBAX Eclips XDB-C18(4.6 mm ×200 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇-水(70∶30);流速:0.8 mL/min;柱溫:室溫;檢測波長:270 nm，進(jìn)樣量:20 μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取苯酚對(duì)照品45.12 mg，置100 mL量瓶中，用無水甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取儲(chǔ)備液1 mL，置10 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，制得45.12 μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取樣品溶液1 mL，置 50 mL 量瓶中，用甲醇-水(70∶30)溶液稀釋至刻度，再精密量取此稀釋液1 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇-水(70∶30)溶液稀釋至刻度，作為供試品溶液。

2.3 專屬性考察 按所測樣品的處方組成配制不含苯酚的空白溶液，按文中所述含量測定方法操作，結(jié)果空白溶液色譜圖中與苯酚對(duì)照品相同保留時(shí)間處，未出現(xiàn)相應(yīng)的色譜峰，表明樣品中其他成分對(duì)苯酚測定無干擾。分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀測定。結(jié)果表明，理論塔板數(shù)以苯酚計(jì)大于11 500，色譜峰峰形良好，保留時(shí)間適中。液相色譜圖見圖1。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 精密量取對(duì)照品溶液0.10、0.25、0.5、1.0、1.5、2.5 mL，分別置10 mL 量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，制備成苯酚系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述條件進(jìn)樣，測定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)、苯酚濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。結(jié)果顯示，苯酚在4.51～112.8 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，其回歸方程為:A=19.786 7 C+0.063 2，r=0.999 9。

2.5 精密度試驗(yàn) 取濃度均為0.045 mg/mL的苯酚對(duì)照品的混合溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差，苯酚的RSD為0.53%(n=5)。

圖1 空白溶液(A)、苯酚(B)和樣品(C)的色譜圖注:1.苯酚(phenol)

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密量取同一批供試品溶液(批號(hào):20110323)5份，按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備，依法測定，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差，結(jié)果苯酚的RSD為0.65%，表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批供試品溶液(批號(hào):20110323)，按供試品溶液制備方法制備，室溫放置，分別于 0、2、4、6、8 h 時(shí)取 20 μL 進(jìn)樣，測定苯酚的峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差，結(jié)果苯酚的RSD為0.88%(n=5)，表明主藥成分在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收試驗(yàn) 精密量取已知含量的供試品(批號(hào):20110323)溶液1 mL，置50 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，再精密量取此稀釋液1.0 mL，置 20mL量瓶中，分別精密加入0.451 2 mg/mL苯酚對(duì)照品溶液 0.7、0.9、1.1 mL，加流動(dòng)相至刻度，照樣品測定項(xiàng)下測定，每個(gè)濃度水平平行做3次。結(jié)果平均加樣回收率(n=3)為99.93%，RSD為0.89%。苯酚的3個(gè)濃度水平的平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差見表1。

表1 回收率測定結(jié)果(n=9)

2.9 樣品含量測定 按“2.2”項(xiàng)配制對(duì)照品溶液及復(fù)方樟腦搽劑的供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測定，外標(biāo)法以色譜峰面積計(jì)算含量，即得。測定了3批復(fù)方樟腦搽劑溶液樣品，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 對(duì)苯酚的對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外光譜掃描，結(jié)果表明，苯酚在270 nm波長處有最大吸收，且無其他物質(zhì)對(duì)測定的干擾。故選用270 nm作為色譜實(shí)驗(yàn)的檢測波長。

3.2 流動(dòng)相的選擇 在實(shí)驗(yàn)中考察了流動(dòng)相組成及配比對(duì)苯酚的分離度、色譜峰形和出峰時(shí)間的影響，發(fā)現(xiàn)甲醇-水比例為 70∶30，流速為0.8 mL/min時(shí)苯酚的色譜峰形良好，保留時(shí)間適宜，經(jīng)對(duì)流動(dòng)相中甲醇和水的不同比例的考察，發(fā)現(xiàn)在此配比下保留時(shí)間最為適宜，故選用此流動(dòng)相配比和流速。

高效液相色譜法測定制劑中的苯酚含量，一些文獻(xiàn)采用甲醇-醋酸鹽緩沖液系統(tǒng)［4-5］。用鹽類緩沖溶液作流動(dòng)相，易引起色譜系統(tǒng)堵塞，色譜柱壽命下降。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用甲醇與水混合作流動(dòng)相，不加緩沖溶液，完全能滿足對(duì)樣品的分析測試要求，而且操作簡單。本方法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，靈敏度高，重現(xiàn)性好，已應(yīng)用于復(fù)方樟腦搽劑的含量測定、穩(wěn)定性考察和質(zhì)量控制，結(jié)果滿意。

［1］ 中國人民解放軍總后勤部衛(wèi)生部.中國人民解放軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范［S］.北京:人民軍醫(yī)出版社，2002:130，133.

［2］ 陳新善，姜春來，車慧.復(fù)方樟腦搽劑中苯酚鑒別方法改進(jìn)［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2005，21(6):480.

［3］ 荊凡波，程顯隆，馬雙成，等.高效液相色譜法測定復(fù)方硼砂溶液中苯酚的含量［J］.藥物分析雜志，2010，30(1):155-156.

［4］ 毛桂福.HPLC法測定水楊酸苯酚洗劑中苯酚和水楊酸的含量［J］.藥學(xué)實(shí)踐雜志，2005，23(4):226-227.

［5］ 劉道平，金克寧，葛新.HPLC測定水楊酸苯酚搽劑中水楊酸及苯酚的含量［J］.華西藥學(xué)雜志，2005，20(4):355-356.