唐姣玉　袁自強　何理平

摘要：為研究黃芪多糖對仔兔免疫功能的影響，試驗選取30日齡斷奶仔兔80只，隨機分為4組，每組20只。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗組，分別在基礎(chǔ)日糧中加入100、200 和400 mg/kg的黃芪多糖，試驗期為28 d。結(jié)果表明，試驗各組免疫器官指數(shù)、T淋巴細胞陽性率極顯著高于對照組（P<0.01），IgA和IgG含量顯著高于對照組（P<0.05）。結(jié)果提示，在飼料中添加黃芪多糖可以增強仔兔的免疫功能。

關(guān)鍵詞：黃芪多糖；斷奶仔兔；生長性能；免疫功能

中圖分類號：S829.1 文獻標識碼：A 文章編號：1007-273X（2013）05-0007-02

黃芪屬豆科多年生草本植物，是一種常用中藥，味甘、性溫，具有補氣升陽、固表止汗、托毒排膿和生肌等功效[1]。黃芪多糖（Astragalus polysacharin，APS）是黃芪重要的天然有效成分，其主要成分為葡萄糖和阿拉伯糖的多聚糖，具有增強免疫功能、提高巨噬細胞活性、雙向調(diào)節(jié)血糖的作用[2]，用其制成的靜脈注射液適用于化療后的滋補，可提高人體的免疫力[3]。斷奶仔兔生長發(fā)育快，抗病性差，在生產(chǎn)中農(nóng)戶散養(yǎng)較多、管理粗放，普遍存在死亡率較高現(xiàn)象[4]。本研究用黃芪多糖作為斷奶仔兔飼料添加劑代替抗生素類藥物，研究仔兔在斷奶應(yīng)激和飼料配制較粗情況下，黃芪多糖對斷奶仔兔免疫功能的影響，旨在為開發(fā)家畜飼料綠色添加劑提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 基礎(chǔ)日糧

肉兔全價顆粒料在南華大學實驗動物中心購買。配方比例為：玉米 30%、高粱2%、麩皮12%、豆粕23%、草粉30%、骨粉2.5%、食鹽0.5%。其營養(yǎng)水平為：粗蛋白18.08%，消化能 11.02 MJ/kg，粗纖維0.9%，鈣0.86%，磷 0.69%。

1.2 試驗動物與材料

試驗用仔兔購于南華大學實驗動物中心。所使用的黃芪多糖為實驗室提取，純度60%。

1.3 試驗設(shè)計

試驗期從2012年10月12日至2012年11月16日，預試期為7 d，正試期為28 d，在衡陽師范學院生物科學實驗室進行。將80只30日齡斷奶仔兔按體重隨機分為4組，每組20只。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗1組、試驗2組、試驗3組分別在基礎(chǔ)日糧中加入100、200和400 mg/kg黃芪多糖。

1.4 樣品的采集與處理

試驗結(jié)束前禁食12 h，頸靜脈采血5 mL緩慢注入潔凈離心管內(nèi)，靜置3 h，3 000 r/min離心10 min，制備血清，并將血清分裝到1mL離心管中冷凍保存?zhèn)溆谩Ｔ賹⒉裳幚砗蟮耐米宇i動脈放血致死，取其胸腺和脾臟，并剔除脂肪。

1.5 指標的測定

1.5.1 免疫器官指數(shù)的測定 迅速稱取已剔除脂肪的脾臟和胸腺的鮮重，并計算脾臟和胸腺指數(shù)。

免疫器官指數(shù)=器官重/活體重

1.5.2 T淋巴細胞陽性率的測定 采用α-醋酸萘酯酶（ANAE）法[5]。制備淋巴細胞懸液，涂片，自然風干后，浸入 37 ℃孵育液中孵育40～60 min，自來水沖洗片刻，濾紙吸干；2%甲基綠溶液染色 1～5 min，自來水沖洗，濾紙吸干，鏡檢。凡胞漿內(nèi)出現(xiàn)大小、數(shù)量不等深紅色顆粒的為 ANAE陽性細胞（T淋巴細胞），計算 200個淋巴細胞中的ANAE陽性細胞率。

1.5.3 免疫球蛋白的測定 采用間接酶聯(lián)免疫吸附法測定免疫球蛋白IgA、IgG的含量。

1.6 數(shù)據(jù)處理及分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS15.0軟件進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃芪多糖對仔兔免疫器官指數(shù)的影響

由表2可以看出，試驗2組仔兔脾臟指數(shù)最高，極顯著高于試驗1組、試驗3組和對照組（P<0.01）；試驗1組和試驗3組脾臟指數(shù)次之，均極顯著高于對照組（P<0.01），試驗1組和試驗3組之間差異不顯著（P>0.05）。對于胸腺指數(shù)，試驗2組顯著高于試驗1組和試驗3組（P<0.05）， 試驗1組和試驗3組又顯著高于對照組（P<0.05），試驗1組和試驗3組之間差異不顯著（P>0.05）。

2.2 黃芪多糖對仔兔T淋巴細胞數(shù)量的影響

試驗結(jié)束時，對照組、試驗1組、試驗2組和試驗3組的T淋巴細胞陽性率分別為（62.35±6.30）%、（78.64±6.20）%、（98.32±5.57）%和（96.21±6.15）%，試驗2組與試驗3組之間差異不顯著（P>0.05），但都極顯著高于試驗1組（P<0.01），3個試驗組極其顯著高于對照組（P<0.01）。

2.3 黃芪多糖對仔兔免疫球蛋白的影響

由表3可知，免疫球蛋白IgA含量試驗2組顯著高于試驗1組和試驗3組（P<0.05），試驗1組和試驗3組顯著高于對照組（P<0.05），試驗1組和試驗3組之間差異不顯著（P>0.05）。而免疫球蛋白IgG的含量各試驗組顯著均高于對照組（P<0.05），試驗組之間差異不顯著（P>0.05）。

3 小結(jié)與討論

脾臟和胸腺是兔的重要的免疫器官。一般認為，免疫器官重量減少是免疫抑制所致，免疫器官重量增加是免疫增強的表現(xiàn)[6，7]。本研究發(fā)現(xiàn)，在仔兔飼料中添加黃芪多糖可以顯著提高仔兔脾臟和胸腺指數(shù)，說明黃芪多糖可以促進仔兔免疫器官綜合發(fā)育，提高機體的免疫功能。

ANAE陽性淋巴細胞率反映了成熟T淋巴細胞的含量，代表了機體細胞免疫水平。本研究中，黃芪多糖添加100、20和400 mg/kg可分別增加ANAE陽性淋巴細胞率26.13%、57.69%和54.31%。說明添加黃芪多糖可以顯著提高仔兔細胞免疫水平。

免疫球蛋白是動物受到抗原刺激后，體內(nèi)產(chǎn)生的能與抗原特異性相互作用的一類球蛋白。IgG和IgA是仔兔體內(nèi)兩種重要的免疫球蛋白，IgG是生物體液內(nèi)主要的免疫球蛋白，約占血液中總免疫球蛋白含的75%，是機體抗感染免疫的主力抗體[8]。IgA在血清中的含量僅次于IgG，占血清免疫球蛋白總量的10%～20%，在抵抗病原入侵方面極其重要[9]。

本研究中在仔兔飼料中添加免疫球蛋白，能顯著提高仔兔的IgG和IgA的含量，說明仔兔的體液免疫功能顯著增強。

參考文獻：

[1] 苗明三，李振國.現(xiàn)代實用中藥質(zhì)量控制技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2003.

[2] 劉明研.黃芪多糖對犬免疫指標的影響[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2011，（13）：142-144.

[3] 楊金蘭，武 正.應(yīng)用150-CALC/GPC色譜儀測試黃芪多糖的分子量及其分布[J].太原工業(yè)大學學報，1994，25（4）：77-84.

[4] 王鳳霞，王紅芹.黃芪莖葉粉對肉兔生長性能及免疫功能的影響[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學，2012，（5）：162-163.

[5] 曹澎澤.獸醫(yī)微生物學與免疫學試驗[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1985.

[6] 駱先虎，倪以祥. 黃芪多糖對斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響[J].中國飼料，2012（3）：22-24.

[7] 劉可園，劉郝佳，劉誠剛，等.大蒜莖稈對肉兔生產(chǎn)性能和免疫功能的影響[J].東北農(nóng)業(yè)大學學報，2012（6）：41-45.

[8] 杜念興.獸醫(yī)免疫學[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1995.

[9] 于 船.中獸醫(yī)學[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1987.