蔡正鳳

(青海省交通醫(yī)院病理科，青海西寧810008)

幽門螺桿菌檢測胃黏膜活檢的幾種染色方法比較

蔡正鳳

(青海省交通醫(yī)院病理科，青海西寧810008)

幽門螺桿菌；染色；甲苯胺藍；胃黏膜；脫蠟

幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)是一種革蘭陰性桿菌，人群中Hp的感染率較高，幽門螺桿菌的感染與多種疾病有關(guān)，尤其是消化系統(tǒng)疾病，如與慢性活動性胃炎，消化性潰瘍的發(fā)生，發(fā)展及復發(fā)相關(guān)，近幾年來甚至認為Hp與胃癌相關(guān)[1]。清除Hp有利于胃黏膜炎癥程度的減輕，因此，檢測Hp的感染對診斷、治療及藥物療效分析顯得尤為重要。但檢測方法較多，每種方法各有優(yōu)缺點，由于條件和技術(shù)的要求，限制了某些方法的應用[2]。在長期的工作經(jīng)驗中摸索出甲苯胺藍染色效果較好，并與HE染色，W-S銀染等染色方法進行了比較，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料收集我科2012年6月至12月半年中胃鏡活檢確診為慢性活動性胃炎和胃潰瘍的蠟塊50例，每例切片4張分別進行HE染色、Warthin starry(W-S)銀染、堿性品紅、甲苯胺藍染色。

1.2 試劑W-S銀染液，堿性品紅，哈瑞(Harris)蘇木精-伊紅染液，甲苯胺藍染液。

1.3 染色方法W-S銀染色，堿性品紅染色按說明書進行，HE常規(guī)染色；甲苯胺藍染色方法：(1)石蠟切片常規(guī)脫蠟至水；(2)滴加1%甲苯胺藍染液染色5～8min(染液配制：1g甲苯胺藍溶于100ml蒸餾水中，滴加媒染劑2ml，置于60℃溫箱2h，然后移置室溫備用)；(3)自來水洗1～2min；(4)95%乙醇急速分化；(5)無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固，顯微鏡下觀察Hp的顯示情況。

2 結(jié)果

W-S銀染色Hp呈黑色，背景為棕黃色，在50例慢性活動性胃炎和胃潰瘍的胃黏膜活檢蠟塊中的陽性檢出率為84%(42/50);堿性品紅染色Hp與背景均呈鮮紅色，陽性檢出率為78%(39/50);HE染色Hp呈淺灰色，陽性檢出率72%(36/50);甲苯胺藍染色Hp呈淺藍色或藍色，陽性檢出率92%(46/50);甲苯胺藍染色胃黏膜活檢組織的Hp的顯微鏡下組織圖像見圖1A～D,鏡下顯示Hp呈淺藍色菌體形態(tài)清晰(圖1A)，Hp形狀桿狀或短弧狀(圖1B)，位于胃小凹或胃小凹的分泌物中(圖1C)，亦可位于腺腔內(nèi)單個散在，片狀或團塊狀分布(圖1D)。

圖1 胃黏膜活檢組織及HP染色結(jié)果

3 討論

經(jīng)典的W-S銀染色法，Hp呈黑色，但染液配制復雜，需要一定的溫度，染色時間長，常出現(xiàn)銀顆粒沉淀物，影響觀察。堿性品紅染色菌體和背景均呈鮮紅色，鏡檢時容易導致視力疲勞。HE染色時，Hp著色較淺較淡，不僅觀察困難而且經(jīng)常容易漏診。HE染色是組織切片最經(jīng)常和廣泛應用的染色方法[3]，但其手續(xù)眾多，過程復雜，而甲苯胺藍染色具有如下優(yōu)點，染色步驟少，操作簡便，時間短，染液配制簡單，所需藥品少，染液可反復使用，長期保存，成本低廉，Hp著色穩(wěn)定鮮明，菌體形態(tài)清晰，在顯微鏡下易于觀察。是一種經(jīng)濟實用的染色方法，符合Hp感染的診斷標準[4]。

甲苯胺藍是屬醌亞胺噻嗪類的一種堿性染料，對Hp有一定的親和力，經(jīng)媒染作用后，對Hp染色強度增加，穩(wěn)定且鮮明，甲苯胺藍在醇中溶解度比水中低，用醇進行分化易于控制適度[5]，由于甲苯胺藍對Hp有較強的親和力，故可采用稍過染，深分化的退行性染色法，這樣胃黏膜活檢組織褪色較多，Hp褪色較少，從而加大了Hp與背景的色差，使Hp更易于組織碎片、污染菌及其他雜菌鑒別。Hp的組織染色方法有多種，但均不夠理想或操作繁瑣，或染液使用率低成本較高，或染色效果不佳，本人在多年的工作當中不斷摸索，發(fā)現(xiàn)甲苯胺藍是一種染色效果好，操作簡便，成本低廉的染色方法，值得推廣，對Hp的臨床診斷及研究有一定的應用價值[6]。

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[2]劉天舒,王吉耀,陳世耀,等.幽門螺桿菌相關(guān)性胃部疾病的病理變遷[J].中華消化雜志,2001,21(1):15-17.

[3]王伯沄,李玉松,黃高昇,等.病理學技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社, 2000:128-129.

[4]中華醫(yī)學會消化病學分會.幽門螺桿菌若干問題的共識意見[J].中華消化雜志,2000,20(2)：117-118.

[5]凌啟波.實用病理特殊染色和組化技術(shù)[M].廣州:廣州高等教育出版社,1989:43-45.

[6]Sepulreda AR,Graham DY.Role of Helicobacter pylori in gastric carcinogenesis[J].Gastroenterol Clin North Am,2002,31(2):517-535.

R361+.2，R466

B

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10.3969/j.issn.1674-1129.2013.03.040