張桂春，賈江花，沃燕波

(寧波美康生物科技股份有限公司，浙江 寧波 315104)

糖尿病(diabetes mellitus，DM)是一種全球性慢性疾病[1]，臨床工作中要使血糖全面長(zhǎng)期達(dá)標(biāo)，短期平均血糖的良好控制非常重要。GA是臨床上血糖檢測(cè)的指標(biāo)，可反映機(jī)體2~4周內(nèi)平均血糖水平[2,3]，被認(rèn)為能在血糖變化最顯著時(shí)更確切和及時(shí)地反映血糖水平，對(duì)于評(píng)價(jià)糖尿病患者近期血糖控制情況及反映短期內(nèi)血糖水平的變化具有較高的臨床價(jià)值[4,5]，已被納入2011版中國(guó)血糖檢測(cè)臨床應(yīng)用指南[6]。

試劑盒的抗干擾性能越來(lái)越受關(guān)注，對(duì)于臨床實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō)，抗干擾性能評(píng)價(jià)可以明確干擾物引起的結(jié)果差異。本實(shí)驗(yàn)的目的在于評(píng)價(jià)GA試劑盒的抗干擾性能，以指導(dǎo)樣本的質(zhì)量評(píng)定，從而避免因樣品因素引起的檢測(cè)結(jié)果的偏差[7]，為臨床檢測(cè)提供一定的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 儀器為HITACHI 7180型全自動(dòng)生化分析儀，GA試劑盒由寧波美康生物科技股份有限公司提供，干擾物質(zhì) Vc、乳糜、Hb、CB和FB分別購(gòu)于 Sigma、 華瑞制藥有限公司、Amresco、Frontier scientific和J&K。

本實(shí)驗(yàn)所用血清樣品來(lái)源于美康國(guó)賓健康體檢中心健康體檢者清晨空腹混合血清(乙肝、丙肝、HIV、梅毒四項(xiàng)陰性，血糖值正常，無(wú)溶血、黃疸和脂血)。將混合血清分裝后，于-20℃凍存。使用時(shí)先常溫下溶化，1 000 r/min離心5 min，取上清液。

1.2 方法

1.2.1 干擾血清的配制 Vc干擾樣品的制備：先用去離子水制備600 mg/L的Vc溶液作為儲(chǔ)存液，再以儲(chǔ)存液為基礎(chǔ)分別配制Vc系列濃度溶液，依次為 600、450、300、150、0 mg/L；然后再按稀釋 20 倍的比例，與血清樣本進(jìn)行混合，得到系列濃度Vc干擾樣品，分別對(duì)應(yīng) Vc濃度為 30、22.5、15、7.5、0 mg/L。

脂血干擾樣品的制備：先用去離子水將乳糜干擾物(14500 FTU，定義為100%)配制成系列濃度溶液，依次為 100、75、50、25、0%；然后再按稀釋 10倍的比例，與血清樣本進(jìn)行混合，得到系列濃度乳糜干擾樣品，分別對(duì)應(yīng)乳糜為1450、1087.5、725、362.5 、0 FTU。

血紅蛋白干擾樣品的制備：先用去離子水制備100 g/L的Hb溶液作為儲(chǔ)存液，再以儲(chǔ)存液為基礎(chǔ)分別配制Hb系列濃度溶液，依次為100、75、50、25、0g/L；然后再按稀釋20倍的比例，與血清樣本進(jìn)行混合，得到系列濃度Hb干擾樣品，分別對(duì)應(yīng) Hb 濃度為 5、3.75、2.5、1.25、0g/L。

黃疸干擾樣品的制備：(1)先用去離子水制備5.76 g/L的CB溶液作為儲(chǔ)存液，再以儲(chǔ)存液為基礎(chǔ)分別配制CB系列濃度溶液，依次為5.76、4.32、2.88、1.44、0g/L；然后再按稀釋 20 倍的比例，與血清樣本進(jìn)行混合，得到系列濃度CB干擾樣品，分別對(duì)應(yīng) CB 濃度為 0.288、0.216、0.144、0.072、0 g/L。(2)用0.1mol/L的NaOH溶液制備4.0g/L的FB溶液作為儲(chǔ)存液，再以儲(chǔ)存液為基礎(chǔ)分別配制FB系列濃度溶液，依次為 4.0、3.0、2.0、1.0、0g/L；然后再按稀釋20倍的比例，與血清樣本進(jìn)行混合，得到系列濃度FB干擾樣品，分別對(duì)應(yīng)FB濃度為0.2、0.15、0.1、0.05、0 g/L。

1.2.2 操作 (1)在最佳儀器條件下，用GA試劑盒對(duì)上述樣品進(jìn)行檢測(cè)，每個(gè)樣品連續(xù)測(cè)定3次。(2)根據(jù)EP7-A2文件，為了平均系統(tǒng)漂移影響，樣品的具體上機(jī)順序：高值-低值，低值-高值，高值-低值。(3)所有干擾樣品制備后，2h內(nèi)上機(jī)檢測(cè)。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理 由于儀器或檢測(cè)環(huán)境影響，產(chǎn)生的具有明顯偏差的樣品，應(yīng)剔除，或重新進(jìn)行測(cè)定。計(jì)算每個(gè)樣品測(cè)定的平均值、標(biāo)準(zhǔn)差(s)和變異系數(shù)(CV)，應(yīng)CV≤10%，以保證干擾實(shí)驗(yàn)是在精密度在控的條件下進(jìn)行。在CV≤10%在控的條件下，按照下面的公式，繼續(xù)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理?；厥章?%)=干擾樣品的測(cè)定均值/對(duì)照樣品的測(cè)定均值×100%。對(duì)照樣品即干擾物含量為0的樣品。當(dāng)回收率≥110%或≤90%所對(duì)應(yīng)的臨界干擾樣品濃度，即為GA試劑盒所能耐受的最大干擾。

2 結(jié)果

應(yīng)用Excel軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。GA試劑盒Vc、乳糜、Hb、CB和FB抗干擾劑量效應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表1。

2.1 Vc對(duì)測(cè)試的干擾 當(dāng)樣品中Vc濃度≤30 mg/L時(shí)，對(duì)GA的測(cè)定可產(chǎn)生非線性的干擾。計(jì)算得到的回收率在±10%范圍內(nèi)，臨床可接受。

2.2 乳糜對(duì)測(cè)試的干擾 當(dāng)樣品中乳糜濃度≤1450 FTU時(shí)，對(duì)GA的測(cè)定可產(chǎn)生非線性的干擾。計(jì)算得到的回收率在±10%范圍內(nèi)，臨床可接受。

表1 GA試劑盒Vc、乳糜、Hb、CB和FB干擾實(shí)驗(yàn)

2.3 Hb對(duì)測(cè)試的干擾 當(dāng)樣品中Hb濃度≤5 g/L時(shí)，對(duì)GA的測(cè)定可產(chǎn)生非線性的干擾。計(jì)算得到的回收率在±10%范圍內(nèi)，臨床可接受。

2.4 黃疸對(duì)測(cè)試的干擾 當(dāng)樣品中CB濃度≤288 mg/L，F(xiàn)B濃度≤200 mg/L時(shí)，均可對(duì)GA的測(cè)定可產(chǎn)生線性的干擾，其線性干擾方程分別為Y=-0.012X+15.26，R2=0.957； Y=-0.018X+15.16，R2=0.987。結(jié)果見(jiàn)圖1和圖2。當(dāng)CB≤144 mg/L，F(xiàn)B≤100 mg/L時(shí)，計(jì)算得到的回收率±10%范圍內(nèi)，臨床可接受。當(dāng)CB≥144 mg/L，F(xiàn)B≥100 mg/L時(shí)，計(jì)算得到的回收率超過(guò)10%范圍，超出臨床可接受范圍。同時(shí)，根據(jù)擬合曲線回歸方程，干擾物在不同濃度的干擾度能夠通過(guò)方程計(jì)算公式被估計(jì)。

圖1 CB對(duì)GA測(cè)定的干擾趨勢(shì)

圖2 FB對(duì)GA測(cè)定的干擾趨勢(shì)

3 討論

干擾物質(zhì)主要來(lái)源于3個(gè)方面：內(nèi)源性物質(zhì)(人體血液中成分)、外源性物質(zhì)(藥物或其他相關(guān)代謝物)、樣本污染物質(zhì)(抗凝劑等)，本研究對(duì)常見(jiàn)的干擾物質(zhì)Vc、乳糜、Hb、CB和FB進(jìn)行了評(píng)價(jià)。實(shí)驗(yàn)中，選取的干擾物的最高濃度為EP7規(guī)定的最高病理濃度[8]，以便能夠確定分析結(jié)果影響臨床應(yīng)用價(jià)值的可疑干擾物的最低濃度。干擾樣本的準(zhǔn)備方面，以添加物質(zhì)以原血清基質(zhì)的變化最小為原則，按照1:20的比例稀釋，干擾物配成的一系列的濃度為實(shí)驗(yàn)濃度的20倍，空白對(duì)照樣本通過(guò)添加溶媒制成，和實(shí)驗(yàn)樣本同時(shí)測(cè)定。

本研究發(fā)現(xiàn)GA試劑盒在樣品檢測(cè)過(guò)程中，當(dāng)CB≥288mg/L及FB≥200mg/L時(shí)對(duì)GA的測(cè)定會(huì)產(chǎn)生負(fù)干擾趨勢(shì)，且均可產(chǎn)生線性干擾；當(dāng)CB濃度≤144 mg/L，F(xiàn)B≤100 mg/L，其回收率在±10%范圍內(nèi)，為臨床可接受范圍，對(duì)檢測(cè)結(jié)果沒(méi)有明顯影響。而Vc濃度≤30 mg/L，乳糜濃度≤1450 FTU，Hb濃度≤5 g/L，計(jì)算得到的回收率均在±10%范圍內(nèi)，為臨床可接受范圍，對(duì)測(cè)定結(jié)果沒(méi)有影響。因此，GA試劑盒測(cè)定樣本時(shí)，對(duì)Vc、乳糜、Hb的抗干擾能力完全能夠滿足臨床需求。而CB濃度≤144 mg/L時(shí)，F(xiàn)B濃度≤100 mg/L時(shí)，計(jì)算得到的回收率均在±10%范圍內(nèi)，為臨床可接受范圍。綜上，GA試劑盒具有較強(qiáng)的抗干擾性能，基本能夠滿足臨床的需求。

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