蔣淑娟 武利娟 劉艷麗

（1 鄭州市第一人民醫(yī)院，河南 鄭州 450004；2 鄭州市第七人民醫(yī)院，河南 鄭州450006；3 鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院，河南 鄭州450001）

乙型肝炎病毒（HBV）是引起急慢性肝炎、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌的重要致病因素[1]，乙型肝炎已成為嚴(yán)重威脅到人類健康的全球性問(wèn)題。據(jù)報(bào)道，全球約20億人曾感染過(guò)HBV，其中3.5億人為慢性HBV感染者，我國(guó)HBv的攜帶者約1.2億[2]，是乙型肝炎高感染的國(guó)家。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取在我院門診和住院的患者，共342位進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)，診斷符合2005年由中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)和中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì)聯(lián)合制定的《慢性乙型肝炎防治指南》中的病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。采用時(shí)間分辨熒光免疫分析法檢測(cè)HBsAg陽(yáng)性、HBeAg陽(yáng)性及HBcAb陽(yáng)性且熒光定量PCR法檢測(cè)HBv-DNA陽(yáng)性（＞104拷貝/mL）的病例70例，HBsAg陽(yáng)性、HBeAg陰性、HBeAb陽(yáng)性、HBcAb陽(yáng)性且熒光定量PCR法檢測(cè)HBv-DNA陽(yáng)性（＞103拷貝/mL）和陰性（＜103拷貝/mL）的病例各10例，排除甲、丙、丁、戊肝炎或重疊感染的患者。

1.2 標(biāo)本的采集及處理

要求檢測(cè)對(duì)象在空腹的狀態(tài)下，用一次性真空采血管抽取靜脈血，靜置凝固后以2000rpm 5min分離血清，分裝0.5mL離心管置冰箱-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 檢測(cè)方法

HBV血清標(biāo)志物：采用時(shí)間分辨熒光免疫分析法（fluorescenee quantitative PCR，TRFIA），時(shí)間分辨熒光分析儀Anytest2000及配套試劑由上海新波生物技術(shù)有限公司提供，HBsAg值＞0.5ng/mL為陽(yáng)性，HBeAg＞0.03Ncu/mL為陽(yáng)性。HBV-DNA的定量檢測(cè)：采用熒光定量PCR（fluorescenee quantitative PCR，F(xiàn)Q-PCR），熒光定量PCR儀Applied Biosystems 7300（美國(guó)），試劑由廣州中山醫(yī)科大學(xué)達(dá)安基因技術(shù)有限公司提供。血清ALT：由美國(guó)雅倍AerosetTM全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)，試劑由上海榮盛公司提供。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 16.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行χ2檢驗(yàn)

2 結(jié) 果

在HBV血清學(xué)標(biāo)志物陽(yáng)性的各種模式中，均有不同程度的病毒DNA復(fù)制。本組的342例血清標(biāo)本中，HBV-DNA陽(yáng)性的為188例，陽(yáng)性率為58.02%。1，3，5模式（大三陽(yáng)）和1，3模式中HBV-DNA陽(yáng)性率分別為87.5%和85.7%，陽(yáng)性率比較高。1，4，5模式（小三陽(yáng)）中HBV-DNA的陽(yáng)性率為60.5%。血清ALT異常有64例。乙型肝炎大三陽(yáng)HBV-DNA的陽(yáng)性率明顯高于小三陽(yáng)的陽(yáng)性率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=14.35，P＜0.05）。乙型肝炎大三陽(yáng)ALT異常率明顯高于小三陽(yáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=36.21，P＜0.01）。見(jiàn)表1。

表1 不同HBV-M陽(yáng)性模式中HBV-DNA及ALT檢測(cè)結(jié)果

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)采用TRFIA和FQ-PCR技術(shù)對(duì)血清的HBV不同血清標(biāo)志及HBV-DNA檢測(cè)，結(jié)果顯示在299例HBsAg（+）血清中，HBV-DNA（+）181例，占60.5%；HBeAg（+）63例中，HBV-DNA（+）55例，陽(yáng)性率為87.3%，說(shuō)明用FQ-PCR技術(shù)檢測(cè)，絕大多數(shù)HBsAg（+）或HBeAg（+）血清中均有HBV-DNA存在。部分HBsAg（+）和HBeAg（+）血清中顯示HBV-DNA（-），可能是HBV-DNA整合于宿主細(xì)胞基因或基因變異，血清中游離的HBV-DNA很少[3]，或者是由于HBVDNA的消失比HBeAg的消失早以及病毒發(fā)生變異有關(guān)[4]，乙型肝炎大三陽(yáng)ALT異常率明顯高于小三陽(yáng)，與以往觀點(diǎn)相符。

本研究采用的是熒光定量PCR，它可以快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)標(biāo)本中的HBV-DNA，并能夠真實(shí)地反映出HBV感染和復(fù)制的狀態(tài)，這對(duì)于乙型肝炎的診斷、療效觀察以及預(yù)后都具有十分重要的指導(dǎo)意義[5]。TRFIA是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新的免疫測(cè)定方法，TRFIA提高了乙型肝炎病毒的檢出率，能夠動(dòng)態(tài)觀察療效和對(duì)病情進(jìn)行監(jiān)測(cè)，可以給醫(yī)師對(duì)病情療效作出合理的解釋提供依據(jù)和參考。

綜上所述，隨著新的乙型肝炎病毒亞型以及基因突變不斷出現(xiàn)，綜合多方面的結(jié)果，方可更準(zhǔn)確、更全面地判斷急慢性乙型肝炎的預(yù)后，對(duì)臨床的乙型肝炎診斷、指導(dǎo)用藥和治療監(jiān)測(cè)等方面均具有重要價(jià)值。

[1] Qian WP,Tan YQ,Chen Y.Rapid quantification of semen hepatitis B virus DNA by real-time poly merase chain reaction [J].World J Gastroenterol,2005,11(34)：5385-5289.

[2] Shi M,Zhang Y,Zhu YH,et al.Comparision of real-time with the COBAS test for quantitation of hepatitis B virus DNA in serum samples[J].World J Gastroenterol,2008,14(3)：479-483.

[3] 駱抗克.HBsAg陽(yáng)性的HBV感染.乙型肝炎基礎(chǔ)與臨床[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,1997：246-259.

[4] 高桂風(fēng),譚文秀,杜志勛,等.PCR檢測(cè)HBVDNA與其血清標(biāo)志物關(guān)系及其臨床意義[J].包頭醫(yī)學(xué),1999,23(1)：3-4.

[5] 沈宏偉,范敏明,吳育連,等.熒光定量PCR和ELISA檢測(cè)外科病人HBV標(biāo)志物結(jié)果的比較[J].臨床檢驗(yàn)雜志,2002,20(5)：307.