胡欽勇，丁 濤

（武漢大學人民醫(yī)院 腫瘤中心，湖北 武漢 430060）

N-cadherin蛋白在骨肉瘤中的表達及臨床意義

胡欽勇，丁 濤

（武漢大學人民醫(yī)院 腫瘤中心，湖北 武漢 430060）

骨肉瘤是一種高度惡性的骨腫瘤，好發(fā)于青壯年的長骨干骺端，其5年生存率僅為10%。近年來輔助化療的應用，改善了骨肉瘤患者的預后。但是血行肺轉(zhuǎn)移仍然是一個重要的預后因素。因此研究骨肉瘤的生物學特性，尤其是轉(zhuǎn)移機制具有重要意義。Amsdorf等發(fā)現(xiàn)，N-鈣黏附素（N-cadherin）在成骨細胞的分化中發(fā)揮著重要作用［1］。目前，關于N-cadherin蛋白在骨肉瘤中表達的意義以及相互關系罕見報道。本研究中，我們應用免疫組織化學方法對34例骨肉瘤組織中N-cadherin蛋白表達的情況進行檢測，并與24例新生骨組織中的表達情況進行比較，以探討N-eadherin蛋白表達與骨肉瘤及其分期的相關性，以期為臨床骨肉瘤的治療和預后判斷提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 材料收集2008年9月至2010年9月我科行骨肉瘤根治術的骨肉瘤標本34例，其中男23例，女11例，年齡在14－41（平均23）歲。全部病例均由組織學病理確診，術前均未行放療及化療。Enneking分期：IIb期19例，Ⅲ期15例。轉(zhuǎn)移情況：肺轉(zhuǎn)移15例，無遠處轉(zhuǎn)移19例。選擇其中24例正常的新生骨組織為對照組。

1.2 方法與操作步驟石蠟切片采用檸檬酸抗漂修復緩沖液高溫抗原修復法，采用SP免疫組織化學法染色，嚴格依照試劑盒所附步驟進行檢測，同時用已知陽性片比照.采取PBS液代替一抗作空白對照，并與正常新生骨組織進行對照。

1.3 結果判定N-cadherin蛋白陽性定位于細胞質(zhì)或細胞膜，呈明顯棕黃色反應即為陽性。每張標本切片選取5個高倍視野（400倍），計算各視野中陽性細胞數(shù)的百分比數(shù)作為該視野的陽性細胞百分比，進而算出平均陽性細胞百分比作為該切片的陽性細胞百分比。染色評判標準：按陽性細胞百分比將染色結果評為3個級別：陽性細胞百分比小于10%為陰性（－），百分比位于10%和50%之間為陽性（＋），大于50%為強陽性（＋＋），其中，陽性和強陽性標本計入陽性組，兩組間進行統(tǒng)計學處理。

1.4 統(tǒng)計學處理統(tǒng)計分析采用SPSS 12.0軟件，組間計數(shù)資料進行用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 N-cadherin蛋白在骨肉瘤組織和正常組織中的表達情況N-cadherin蛋白在24例新生骨組織中有17例（70.83%）有陽性表達；在34例骨肉瘤組織中，有11例（32.35%）N-cadherin蛋白陽性表達。經(jīng)列聯(lián)表χ2檢驗分析得出：骨肉瘤組織與新生骨組織之間的N-cadherin蛋白表達差異性具有統(tǒng)計學意義（χ2＝8.34，P＜0.05）。見表1。

2.2 N-cadherin蛋白表達與骨肉瘤分期的關系N-cadherin蛋白在骨肉瘤Enneking分期中，Ⅱ、Ⅲ期中的陽性表達率分別為36.84%、26.67%，其陽性率隨著臨床分期的增高而降低。見表1。

表1 乳腺癌Hrad51蛋白表達與常見病理學參數(shù)之間的關系

3 討論

在近年腫瘤轉(zhuǎn)移的分子機制研究中，鈣黏附素家族倍受重視。鈣黏附素為包括至少9個基因家族的Ca2＋依賴跨膜糖蛋白，可通過同型細胞間鈣離子依賴的黏附，在正常結構的維持等方面發(fā)揮重要作用。N－cadherin基因定位于18號染色體，首先發(fā)現(xiàn)于成纖維細胞與神經(jīng)組織，介導細胞間的動態(tài)粘附。進一步研究還發(fā)現(xiàn)其在包括細胞凋亡、增殖與遷移以及基因激活、信號轉(zhuǎn)導等方面的重要作用，其與腫瘤的相關研究也得到大家的重視。

鈣黏附素家族的分子結構包括細胞內(nèi)區(qū)、跨膜區(qū)與細胞外區(qū)，接合蛋白與胞內(nèi)區(qū)域形成復合物，進而與細胞骨架相連，胞外區(qū)域通過三肽序列結構與配體結合，誘導細胞間的黏附作用［2］。鈣黏附蛋白的失活可引起細胞間連接的破壞。研究發(fā)現(xiàn)，在上皮細胞中，N-cadherin可使細胞形態(tài)向成纖維細胞轉(zhuǎn)化，從而讓這些細胞富有活力與侵襲性，可能在腫瘤浸潤與轉(zhuǎn)移等方面有促進作用［3，4］。Jaggi［5］等對44例前列腺癌標本進行檢測，結果N-cadherin陽性率為45%，且腫瘤Gleason grade級別越高N-cadherin陽性率越高。Nagi［6］等對N-cadherin在非浸潤性微小乳頭狀癌與浸潤性微小乳頭狀癌的表達進行研究，結果N-cadherin在兩組的陽性率分別為52%與76%，提示N-cadherin高表達與腫瘤侵襲性相關。

與此同時，有研究證實在骨肉瘤與部分其他類型惡性間質(zhì)細胞瘤演進過程中，N-cadherin保持低表達水平［7］。與其在上皮腫瘤中的研究結果比較，在骨肉瘤中，N-cadherin被認為是一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制因子，N-cadherin低表達對骨肉瘤等的發(fā)生發(fā)展具有重要作用［8］。

本組研究提示，N-cadherin蛋白陽性表達率在骨肉瘤組織中明顯低于新生骨組織，且與骨肉瘤腫瘤分期呈負相關。證實在骨肉瘤中N-cadherin蛋白為腫瘤抑制因子，可能誘導成骨細胞分化，促進腫瘤細胞凋亡，以及通過介導細胞動態(tài)粘附、信號轉(zhuǎn)導等抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展。

綜上，本研究通過檢測N-cadherin蛋白在骨肉瘤中的表達水平，探討其與臨床各特征的相關性，得知N-cadherin與骨肉瘤的發(fā)生和發(fā)展有密切相關性，其表達情況是骨肉瘤預后的重要標志之一，對臨床治療起到較好的指導作用并幫助預后分析。尚需進一步深入研究以明確其在骨肉瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮的作用。

［1］Arnsdorf EJ，Tummala P，Jacobs CR.Non-canonical Wnt signaling and N-cadherin related beta-catenin signaling play a role in mechanically induced osteogenic cell fate［J］.PloS one，2009，4（4）：e5388.

［2］Zuppinger C，Eppenberger-Eberhardt M，Eppenberger HM.NCadherin：structure，function and importance in the formation of new intercalated disc-like cell contacts in cardiomyocytes［J］.Heart failure reviews，2000，5（3）：251.

［3］Derycke LD，Bracke ME.N-cadherin in the spotlight of cell-cell adhesion，differentiation，embryogenesis，invasion and signaling［J］.The International journal of developmental biology，2004，48（5-6）：463.

［4］De BlasioA，Messina C，SantulliA，et al.Differentiative pathwayactivated by 3-aminobenzamide，an inhibitorofPARP，in human osteosarcomaMG-63cells［J］.FEBS Lett，2005，579（3）：615.

［5］Jaggi M，Nazemi T，Abrahams N A，et al.N-cadherin Switching Occurs in High Gleason Grade Prostate Cancer［J］.Prostate，2006，66（2）：193.

［6］Nagi C，Guttman M，Jaffer S，et al.N2cadherin Expression in Breast Cancer：Correlation with an Aggressive Histologic Variant Invasive Micropapillary Carcinoma［J］.Breast Cancer Res Treat，2005，94（3）：225.

［7］Kashima T，Kawaguchi J，Takeshita S，et al.Anomalous cadherin expression in osteosarcoma.Possible relationships to metastasis and morphogenesis［J］.The American journal of pathology.1999，155（5）：1549.

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1007－4287（2012）10－1916－02

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