石玉丹 浙江中醫(yī)藥大學(xué) 杭州 310053

張永華 杭州市第七人民醫(yī)院

劉肄輝 浙江省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院肝病科

CD4+CD25+Tregs是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的亞群之一,在維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、腫瘤免疫監(jiān)測(cè)、誘導(dǎo)移植耐受以及自身免疫性疾病的發(fā)生中起重要作用。在感染性疾病病程中，CD4+CD25+Tregs在一定程度上抑制了保護(hù)性免疫,造成了感染持續(xù)化,但同時(shí)也抑制過(guò)強(qiáng)的免疫反應(yīng),保護(hù)宿主免于發(fā)生致命的炎癥性病理?yè)p害。慢性乙肝是一個(gè)嚴(yán)重危害大眾健康，威脅人們生命的傳染病，免疫損害是其主要發(fā)病機(jī)制。本文就近年來(lái)關(guān)于CD4+CD25+Tregs在慢性乙型肝炎（CHB）感染中的作用相關(guān)研究進(jìn)展綜述如下。

1 CD4+CD25+Tregs概述

CD4+CD25+Tregs起源于胸腺，Sakaguchi等[1]于1995年在未免疫小鼠外周血循環(huán)中發(fā)現(xiàn)，CD4+CD25+Tregs具有免疫無(wú)能和免疫抑制特性。正常情況下，CD4+CD25+Tregs占人外周血細(xì)胞的5%~10%[2]。Ramsdell[3]和Sakaguchi[1]等研究小組發(fā)現(xiàn)CD4+CD25+Tregs轉(zhuǎn)錄因子Foxp3（forkhead box P3）可能在Treg發(fā)育及其功能的發(fā)揮中起著決定性作用[4]，目前，F(xiàn)oxp3是大多數(shù)學(xué)者公認(rèn)的CD4+CD25+Tregs表達(dá)的特異標(biāo)志。也有學(xué)者認(rèn)為，人類的CD4+CD25+Tregs可以通過(guò)CD127低表達(dá)進(jìn)行識(shí)別[5-7]。CD4+CD25+Treg能夠控制自身反應(yīng)性T細(xì)胞的活化與增殖，抑制細(xì)胞因子產(chǎn)生與分泌，誘導(dǎo)細(xì)胞無(wú)能等，在維持機(jī)體自身免疫抑制方面的作用機(jī)制目前仍不清楚，其可能主要通過(guò)細(xì)胞間直接接觸和分泌細(xì)胞因子模式起免疫調(diào)節(jié)作用[8-9]。

2 CD4+CD25+Tregs在慢性乙肝患者體內(nèi)分布狀況

慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染后的結(jié)局取決于宿主的免疫反應(yīng)，其中也包括CD4+CD25+Tregs。Stoop等[10]在HBV感染中發(fā)現(xiàn)CD4+CD25+Tregs的數(shù)量與正常人相比有顯著性差異，且HBeAg陽(yáng)性CHB患者外周血CD4+CD25+Tregs水平顯著高于HBeAg陰性的CHB患者。這與Nan等[11]的研究相似，Nan等對(duì)39例慢性乙肝患者和19例健康者進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)慢性乙肝組CD4+CD25+Tregs分布頻率高于正常組且得出HBV DNA≥10（8）的患者體內(nèi)CD4+CD25+Tregs水平明顯高于 HBV DNA＜10（8）患者。Xu等[12]得出慢性重度乙肝外周血Tregs水平較正常對(duì)照有明顯升高，慢性輕度乙肝中無(wú)明顯差異，而慢性乙肝急性期Tregs頻率明顯低于慢性乙肝患者及正常人，在恢復(fù)期Tregs又明顯升高，考慮Tregs的抑制作用與IFN-γ分泌減少相關(guān)。也有學(xué)者認(rèn)為，慢性乙肝患者外周血中CD4+CD25+Tregs水平與健康對(duì)照無(wú)差異[13]。

目前對(duì)慢性HBV感染患者肝臟組織內(nèi)CD4+CD25+Tregs的研究，主要通過(guò)應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法,檢測(cè)CHB患者肝組織中Foxp3的表達(dá)方式來(lái)研究肝臟組織內(nèi)CD4+CD25+Tregs頻率，國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究結(jié)果基本一致。Stoop等[14]通過(guò)測(cè)定肝內(nèi)FoxP3+Tregs，發(fā)現(xiàn)慢性乙肝患者肝內(nèi)存在一定數(shù)量的CD4+FoxP3+細(xì)胞，但是這些細(xì)胞在外周血中不表達(dá)CD25，因此，肝內(nèi)CD4+CD25+Tregs水平高于外周血水平，且與病毒載量呈正相關(guān)。楊玉英等[15]檢測(cè)19例免疫耐受期及12例免疫清除期慢性乙肝患者肝組織中FoxP3的表達(dá)，同時(shí)對(duì)照6例正常肝組織，發(fā)現(xiàn)免疫耐受期及免疫清除期患者肝組織中FoxP3較正常肝組織明顯增加，而免疫清除期也明顯高于免疫耐受期。

3 CD4+CD25+Tregs在慢性乙肝免疫發(fā)病機(jī)制中的作用

在乙肝病毒感染中，細(xì)胞增殖和分泌干擾素等抗病毒因子是機(jī)體免疫系統(tǒng)清除乙肝病毒的重要途徑，Tregs可以抑制HBV特異性的T細(xì)胞增殖和CTL 反應(yīng)[10,13]。

徐東平等[16]觀察發(fā)現(xiàn)，去除CD4+CD25+Tregs后，慢性乙肝患者PBMC在HBV抗原刺激下IFN-g產(chǎn)生量和細(xì)胞增殖反應(yīng)均明顯增高，而加入Treg后，患者PBMC對(duì)HBV抗原刺激的細(xì)胞增殖能力受到顯著抑制，認(rèn)為HBV感染能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生抗原特異性的CD4+CD25+Tregs,抑制抗原特異性T細(xì)胞反應(yīng)，影響對(duì)HBV感染的清除，造成感染的持續(xù)化。Stoop等[10]用HBcAg刺激外周血單個(gè)核細(xì)胞中CD25+細(xì)胞缺失的慢性乙肝患者，發(fā)現(xiàn)可以促進(jìn)效應(yīng)性T細(xì)胞的增殖，說(shuō)明慢性乙肝患者外周血CD4+CD25+Tregs水平升高可能會(huì)促進(jìn)病毒的持續(xù)復(fù)制，導(dǎo)致感染慢性化，并且發(fā)現(xiàn)Tregs水平增加能夠抑制DC及其他抗原遞呈細(xì)胞的成熟，抑制T細(xì)胞的刺激能力。CD4+CD25+Tregs水平與HBV DNA水平成正相關(guān)，有學(xué)者認(rèn)為，病毒復(fù)制活躍的慢性乙肝患者，可能是通過(guò)CD4+CD25+Tregs的免疫抑制效應(yīng)促進(jìn)病毒的復(fù)制[17]。張恒輝在研究CD4+CD25+Treg與慢性乙肝時(shí)，發(fā)現(xiàn)慢性乙肝患者CD4+CD25+Tregs細(xì)胞表面糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的TNFR相關(guān)基因表達(dá)增高，表明慢性乙肝患者的CD4+CD25+Tregs處于抑制功能的活化狀態(tài)，這也是促使乙肝慢性化的原因之一[18]。福軍亮等[19]觀察不同類型乙肝患者外周血CD4+CD25+Tregs水平，顯示急性乙肝患者外周血中CD4+CD25+Tregs水平較低，并認(rèn)為可能是因?yàn)榧毙砸腋位颊咄庵苎狢D4+CD25+Tregs遷移到肝臟中發(fā)揮免疫作用，保護(hù)宿主免于發(fā)生過(guò)強(qiáng)的抗病毒反應(yīng)帶來(lái)致命的炎癥性病理?yè)p害。

4 慢性乙肝抗病毒治療與CD4+CD25+Tregs

抗病毒治療有利于抑制HBV復(fù)制，減少肝臟損傷，抑制并減緩疾病進(jìn)展。目前，抗病毒治療是治療HBV的主要方法之一，抗病毒藥物主要有干擾素（IFN）-α和核苷酸類似物。

Sprengers等[20]對(duì)應(yīng)用干擾素治療的HBeAg陽(yáng)性CHB患者進(jìn)行研究，IFN完全應(yīng)答者HBV特異性T細(xì)胞增殖能力與無(wú)反應(yīng)者比較有明顯增強(qiáng)，提示在IFN-α治療時(shí)與治療后，CD4+CD25+Tregs在HBV持續(xù)感染中起重要作用。IFN-α能夠改善患者的免疫功能，促進(jìn)T細(xì)胞表達(dá)IFN-γ，增強(qiáng)的IFN-γ能夠抑制CD4+CD25+Tregs活化和產(chǎn)生，并且IFN-α能增強(qiáng)CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞反應(yīng)，上調(diào)CTL細(xì)胞水平，增強(qiáng)Th1反應(yīng)，增強(qiáng)的Th1反應(yīng)可能抑制了Tregs的數(shù)量和功能[21]。

替比夫定在抗HBV DNA復(fù)制過(guò)程中能夠降低慢性乙肝患者外周血CD4+CD25+Tregs水平，使Tregs對(duì)乙肝特異性T細(xì)胞的抑制作用得到恢復(fù)，從而使機(jī)體特異性抗病毒免疫應(yīng)答得到改善[22]。Stoop等[23]應(yīng)用阿德福韋抗病毒治療CHB，治療過(guò)程中，隨著病毒載量的下降外周血CD4+CD25+Tregs水平也相應(yīng)下降，同時(shí)伴隨HBeAg特異性IFN-γ的產(chǎn)生或增殖水平的升高，免疫應(yīng)答得到部分恢復(fù)。但也有學(xué)者認(rèn)為阿德福韋的抗病毒作用主要是直接抑制病毒復(fù)制，與CD4+CD25+Tregs無(wú)關(guān)[17]。因此，深入研究慢性乙肝CD4+CD25+Tregs對(duì)于指導(dǎo)抗病毒治療具有重要價(jià)值。

5 結(jié) 語(yǔ)

目前，有關(guān)CD4+CD25+Treg的免疫抑制作用研究已經(jīng)達(dá)成共識(shí)，即在慢性HBV感染中CD4+CD25+Tregs介導(dǎo)了對(duì)HBV特異性T細(xì)胞的抑制,這種免疫抑制不利于CTL對(duì)病毒的清除,進(jìn)一步造成乙肝的慢性化，但對(duì)CD4+CD25+Tregs具體作用機(jī)制還需要更詳盡的研究。

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