邢 軍， 程 靜， 馬玉燕， 司民一

(萊蕪市人民醫(yī)院，山東萊蕪271100)

嚴(yán)重術(shù)后腸黏連可引起慢性腹痛、腸道功能運(yùn)動(dòng)障礙或反復(fù)間斷發(fā)作性的機(jī)械性腸梗阻，女性可引起不孕癥。有研究表明一些活血益氣的中藥對(duì)其有一定的預(yù)防治療作用［1］，血必凈注射液主要成分提取自紅花、赤芍、丹參、當(dāng)歸之中，包括紅花黃色素A、川芎嗪、丹參素、阿魏酸鈉、芍藥苷、原兒茶酚等，現(xiàn)臨床上主要用于因感染誘發(fā)的全身炎癥反應(yīng)綜合癥和因感染、創(chuàng)傷、燒傷等引起的多器官功能障礙綜合征［2-3］。本實(shí)驗(yàn)研究血必凈預(yù)防術(shù)后腸黏連的作用，并通過測(cè)定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腹腔灌洗液IL-6、TNF-α水平和其盲腸組織中羥脯氨酸含有量探討其預(yù)防腸黏連的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 Mettler AE240電子分析天平 (瑞士梅特勒公司);UV-2401PC型紫外-可見分光光度儀 (日本島津公司);RM2135型組織切片機(jī) (德國leica公司)。血必凈注射液 (天津紅日制藥有限公司，批號(hào)09101501);羥脯氨酸試劑盒 (南京建成生物工程研究所);IL-6和TNF-α試劑盒 (美國Sigma公司)。SD大鼠50只，雌雄兼半，體質(zhì)量 (220±20)g，由山東大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 方法 參照文獻(xiàn)［4］，取SD大鼠50只，用3%戊巴比妥鈉 (30 mg/kg)經(jīng)耳靜脈注射麻醉，用安爾碘進(jìn)行皮膚消毒，用手術(shù)刀剖開下腹部正中約2 cm，提出盲腸干燥2 min，再用手術(shù)刀片輕刮整條盲腸漿膜面及對(duì)應(yīng)的腹壁雙側(cè)各8遍，放回盲腸，關(guān)閉腹腔。建立大鼠腸黏連模型。

將以上模型大鼠隨機(jī)均分為5組，即模型組、地塞米松組及血必凈高、中、低劑量組。術(shù)后分別尾靜脈注射氯化鈉注射液 (1 mL/kg)、地塞米松注射液 (5 mg/kg)、血必凈高劑量 (5 mg/kg)、血必凈中劑量 (2.5 mg/kg)、血必凈低劑量 (1.25 mg/kg)，連續(xù)給藥7 d。于術(shù)后第7天測(cè)定腹腔灌洗液IL-6和TNF-α水平。第8天開腹檢查，評(píng)定黏連程度，取盲腸組織測(cè)羥脯氨酸含有量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 各實(shí)驗(yàn)組黏連結(jié)果分別和模型組比較進(jìn)行Ridit分析;IL-6、TNF-α水平和羥脯氨酸含有量以±s表示，各實(shí)驗(yàn)組數(shù)據(jù)和模型組比較進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 指標(biāo)與結(jié)果

2.1 黏連分級(jí)標(biāo)準(zhǔn) 參考Nair［5］分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，將黏連程度分為5級(jí)，分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表1 黏連分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

結(jié)果顯示血必凈注射液高劑量 (P＜0.01)、中劑量(P＜0.05)、低劑量 (P＜0.05)黏連程度均低于模型組，說明高、中、低劑量血必凈注射液均可預(yù)防大鼠術(shù)后腸黏連。見表2。

表2 大鼠腹腔黏連分級(jí)情況

2.2 腹腔灌洗液IL-6和TNF-α水平檢測(cè)和盲腸組織羥脯氨酸測(cè)定 按 Nagelschmidt等［6］報(bào)道，將3 mL PBS(磷酸鹽緩沖液，0.15 mol/L)注入大鼠腹腔，輕微震蕩腹腔2min后用注射器自腹腔將灌洗液抽出，采用夾心ELISA檢測(cè)方法測(cè)定IL-6和TNF-α水平。

精密稱取50mg盲腸組織，放入試管中，按試劑盒說明書處理后在550 nm波長處測(cè)定各管吸光度，計(jì)算組織中羥脯氨酸含有量。

結(jié)果與模型組相比，血必凈高、中劑量組腹腔灌洗液TNF-α、IL-6水平和血必凈高、中、低劑量組盲腸組織羥脯氨酸含有量明顯降低 (P＜0.05)，見表3。

表3 大鼠腹腔灌洗液TNF-α、IL-6水平和盲腸組織羥脯氨酸含有量(±s，n=10)

表3 大鼠腹腔灌洗液TNF-α、IL-6水平和盲腸組織羥脯氨酸含有量(±s，n=10)

注:與模型對(duì)照組比較，#P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù)/只 羥脯氨酸/(mg·g－1) IL-6/(ng·mL－1) TNF-α/(pg·L－1)10 2.61±0.20 4.24±0.64 138.67±13.52地塞米松組(5 mg/kg) 10 1.88±0.16# 2.81±0.52# 105.46±13.55#血必凈高劑量組(5 mg/kg) 10 1.71±0.12# 2.74±0.81# 102.55±10.18#血必凈中劑量組(2.5 mg/kg) 10 1.97±0.14# 3.31±0.82# 124.75±13.67#血必凈低劑量組(1.25 mg/kg) 10 2.25±0.17#模型組(生理鹽水1 mL/kg)4.17±0.95 132.52±12.34

3 討論

術(shù)后腸黏連的發(fā)生機(jī)制目前還不十分明確，現(xiàn)在認(rèn)為主要是由于漿膜在手術(shù)時(shí)受到損傷或異物刺激，引起機(jī)體局部缺血或炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致腹膜、腸管、網(wǎng)膜等損傷部位組織液滲出。滲出的組織液中纖維蛋白和纖維蛋白原沉積，便會(huì)形成黏連。在這個(gè)過程中由浸潤的炎性細(xì)胞釋放細(xì)胞因子的失衡極其瀑布式效應(yīng)，是導(dǎo)致腹膜黏連形成的觸發(fā)機(jī)制［7］。研究發(fā)現(xiàn)，術(shù)后早期羥脯氨酸含有量能反應(yīng)黏連程度［8］;腹腔液和全身TNF-α的水平高與術(shù)后黏連程度顯著相關(guān)，IL-6可促進(jìn)黏連形成，在刺激術(shù)后腸黏連的形成中有較大作用［9］;楊小進(jìn)等通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)創(chuàng)傷黏連型大鼠1周內(nèi)有明顯的炎癥反應(yīng)，模型大鼠血清中TNF-α表達(dá)水平有明顯提高［10］;陳彈等發(fā)現(xiàn)TNF-α對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞株分泌的纖溶酶原激活抑制因子有顯著升高作用，說明降低TNF-α的表達(dá)水平可提高纖溶系統(tǒng)的活性［11］。

腸黏連的預(yù)防可通過改善局部血運(yùn)、抑制炎性滲出、促進(jìn)纖維蛋白的溶解與吸收、抑制成纖維細(xì)胞生長及促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)等諸多環(huán)節(jié)而實(shí)現(xiàn)。血必凈注射液是在血府逐瘀湯基礎(chǔ)上研制而成的靜脈制劑，其藥理作用主要為:調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)、抗氧化應(yīng)激、改善凝血功能、調(diào)節(jié)免疫功能、內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)及改善循環(huán)等。作用機(jī)理與影響細(xì)胞因子IL-1、IL-6、TNF-α水平，提高超氧化物歧化酶活性和降低丙二醛含有量，改善凝血反應(yīng)和纖溶抑制的形成等有關(guān)［12］。本實(shí)驗(yàn)中血必凈注射液對(duì)術(shù)后腸黏連大鼠腹腔灌洗液TNF-α和IL-6水平的影響與文獻(xiàn)中對(duì)血清TNF-α和IL-6水平影響一致。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示血必凈注射液對(duì)術(shù)后黏腸連的預(yù)防作用可能與降低術(shù)后大鼠腹腔組織中TNF-α和IL-6水平有關(guān)。

［1］王春霞，石玉生.中醫(yī)藥防治術(shù)后腸粘連的研究進(jìn)展［J］.中藥材，2005，28(3):236-239.

［2］馮有為，張玉生，左擁軍，等.血必凈注射液早期干預(yù)治療全身炎癥反應(yīng)綜合癥的研究［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，18(30):3698-3699.

［3］張寶民，孫 艷，徐繼來，等.血必凈注射液對(duì)危重癥患者多器官功能的保護(hù)及相關(guān)細(xì)胞因子的影響［J］.蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，35(12):1267-1269.

［4］趙 潔，曾煦欣，侯連兵.維通注射液對(duì)大鼠術(shù)后腸粘連的防治作用研究［J］.中國藥房，2009，20(21):1611-1613.

［5］Nair S K，Bhal I K，Aurora A L，et al.Role of proteolytic enzymes in the prevention of postoperative intraperitioneal adhesions［J］.Arch Surg，1974，108(6):849.

［6］Nagelschmidt M，Saad S.Influence of polyethylene glycol 4000 and dextran 70 on adhesion formation in rats［J］.J Surg Res，1997，67(2):113-118.

［7］Martikainen T A，Ekstrand A V，Teppo A M，et al.Cytokines and other soluble factors in dialysate-indicators of altered peritoneal function［J］.Scand J Urol Nephrol，2002，36(6):450-454.

［8］Ozoˇgul Y，Baykal A，Onat D，et al.An experimental study of the effect of aprotinin on intestinal adhesion formation［J］.Am J Surg，1998，175(2):137-141.

［9］Stadlmann S，Pollheimer J，Renner K，et al.Response of human peritoneal mesothelial cells to inflammatory injury is regulated by interleukin-1beta and tumor necrosis factor-alpha［J］.Wound Repair Regen，2006，14(2):187-194.

［10］楊小進(jìn)，毛勤生，周新澤.大鼠腸膜粘連的病理學(xué)特征及血清中 IL-6、TNF-α的變化［J］.中國交通醫(yī)學(xué)雜志，2005，19(2):104-106.

［11］陳 彈，程緒杰，李紅霞，等.卡維地洛及TNF-α對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞釋放t-PA和PAI-1的影響［J］.實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志，2003，7(5):448-449，452.

［12］吳海榮，關(guān)方艷.血必凈注射液臨床應(yīng)用進(jìn)展［J］.中國中醫(yī)急癥，2010，19(4):653-654.