余良忠，文萍，李梅

(1.江西省中醫(yī)藥研究院，江西 南昌 330046;2.江西省宜黃縣中醫(yī)院，江西宜黃344400)

黔曲發(fā)酵工藝研究

余良忠1，文萍1，李梅2

(1.江西省中醫(yī)藥研究院，江西 南昌 330046;2.江西省宜黃縣中醫(yī)院，江西宜黃344400)

目的建立黔曲發(fā)酵工藝的控制技術(shù)。方法用氣相色譜法測(cè)定黔曲發(fā)酵樣品中乙醇的含有量，考察其主要影響因素。結(jié)果最佳發(fā)酵工藝參數(shù)為溫度約30℃，加水量約700mL，發(fā)酵時(shí)間4～5 d。結(jié)論發(fā)酵工藝參數(shù)和檢測(cè)指標(biāo)量化，檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)便，可靠，切實(shí)可行。

黔曲;發(fā)酵工藝;乙醇;氣相色譜

黔曲載于部頒標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑第2冊(cè)(WS3-B-0465-90)，具有健脾開(kāi)胃，理氣導(dǎo)滯，清暑化濕的功效，用于食積飽脹，胸悶腹痛，不思飲食，暑濕感冒。黔曲由二十四味中藥材經(jīng)發(fā)酵制備而成，其傳統(tǒng)發(fā)酵程度判斷指標(biāo)—以主觀嗅覺(jué)嗅酒香氣，缺乏具體的客觀量化指標(biāo)，對(duì)結(jié)果判斷存在較大的差異性，有關(guān)黔曲的發(fā)酵工藝以及控制方法的相關(guān)研究均尚未見(jiàn)報(bào)道。本課題采用現(xiàn)代分析技術(shù)和儀器，對(duì)黔曲發(fā)酵工藝中的量化指標(biāo)進(jìn)行篩選研究，建立以乙醇量為量化指標(biāo)的黔曲發(fā)酵工藝控制技術(shù)。

1 儀器與試藥

PS—240中藥破碎機(jī)(杭州富陽(yáng)康華機(jī)械設(shè)備有限公司)，GC—2010氣相色譜儀(日本島津);AG—135電子天平(梅特勒-托利多);酒曲(安琪酵母股份有限公司);黔曲，試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測(cè)指標(biāo)以內(nèi)標(biāo)法氣相色譜法測(cè)定發(fā)酵樣品中乙醇的含有量作為指標(biāo)。

2.2 供試品溶液的制備及測(cè)定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)毛細(xì)管柱(30QC3/AC10，內(nèi)徑0.25 mm)，進(jìn)樣口溫度150℃，檢測(cè)器溫度150℃，柱溫110℃。理論板數(shù)按正丙醇峰計(jì)算應(yīng)不低于8 000。

2.2.2 校正因子測(cè)定精密量取無(wú)水乙醇4、5、6 mL，分別置100 mL量瓶中，分別精密加入正丙醇(內(nèi)標(biāo)物)5 mL，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取上述3種溶液各適量，注入氣相色譜儀，分別連續(xù)進(jìn)樣3次，測(cè)定峰面積，計(jì)算校正因子。

2.2.3 供試品溶液的制備取樣品約10 g，精密稱定，加水50 mL，充分振搖混合，離心，取上清液25 mL置100 mL量瓶中，精密加入正丙醇5 mL，加水稀釋至刻度，即得。

2.2.4 測(cè)定法取各供試品溶液1 μL，注入氣相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算。

2.3 加水量考察曲類制劑發(fā)酵藥材加水拌勻時(shí)，一般以完全潤(rùn)濕為宜，本次研究對(duì)加水量出現(xiàn)偏干(每個(gè)處方加水約600 mL)、適中(每個(gè)處方加水約700 mL)和偏濕(每個(gè)處方加水約800 mL)的3種情況進(jìn)行了考察，每組取5個(gè)處方量藥材進(jìn)行發(fā)酵試驗(yàn)，發(fā)酵溫度約30℃，分別采集第0天至第5天的的樣品進(jìn)行含乙醇量測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1、圖1。從表1、圖1中可以看出，發(fā)酵到第2天含乙醇量開(kāi)始明顯增加，第4天發(fā)酵基本完全，而在加水量較少的情況下，發(fā)酵效果較差，延長(zhǎng)發(fā)酵時(shí)間也沒(méi)有作用，因此，在加水拌勻藥材時(shí)，以保證充分潤(rùn)濕為宜，每個(gè)處方加水量在700 mL左右。

表1 不同加水量發(fā)酵含乙醇量測(cè)定結(jié)果(10－3mL·g－1)

2.4 發(fā)酵溫度考察選取約10(10～15)℃、20(20～25)℃、30(30～35)℃、40(40～45℃)4個(gè)不同溫度進(jìn)行比較試驗(yàn)，每組取5個(gè)處方量藥材進(jìn)行發(fā)酵試驗(yàn)，分別采集第0天至第6天的的樣品進(jìn)行含乙醇量測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)圖2、表2。

圖1 不同加水量含乙醇量和發(fā)酵時(shí)間關(guān)系圖

圖2 含乙醇量和發(fā)酵時(shí)間關(guān)系圖

表2 不同溫度發(fā)酵含乙醇量測(cè)定結(jié)果/(10－3mL·g－1)

溫度考察試驗(yàn)結(jié)果表明，溫度對(duì)發(fā)酵樣品中的含乙醇量影響較大，在10℃左右時(shí)，無(wú)法進(jìn)行發(fā)酵，溫度過(guò)高也不利于發(fā)酵，發(fā)酵溫度須控制在30℃左右為宜。

3 討論

文獻(xiàn)報(bào)道發(fā)酵過(guò)程包括根霉菌糖化和酵母菌發(fā)酵兩個(gè)步驟，根霉菌能產(chǎn)生糖化酶，將淀粉水解為葡萄糖，且在糖化過(guò)程中還能產(chǎn)生少量的有機(jī)酸(如乳酸);酒曲中的酵母菌，則利用根霉菌糖化淀粉所產(chǎn)生的糖酵解為酒精［1-10］。因此，選取黔曲發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的乙醇作為量化指標(biāo)進(jìn)行氣相色譜法測(cè)定，考察影響發(fā)酵工藝的3個(gè)因素發(fā)酵溫度、藥材加水量及發(fā)酵時(shí)間和樣品中含乙醇量的相關(guān)性。

結(jié)果顯示，溫度和加水量是黔曲發(fā)酵工藝的主要影響因素，發(fā)酵前后樣品中的含乙醇量有明顯的變化，可以用氣相色譜法測(cè)定發(fā)酵樣品中的含乙醇量作為黔曲發(fā)酵工藝控制技術(shù)的量化指標(biāo)。試驗(yàn)研究表明，溫度是黔曲發(fā)酵工藝的關(guān)鍵因素，溫度偏低，發(fā)酵效果較差，延長(zhǎng)發(fā)酵時(shí)間也沒(méi)有作用，過(guò)高的溫度也不利于發(fā)酵，適宜的發(fā)酵溫度在30℃左右，這和相關(guān)研究文獻(xiàn)是一致的［6-12］;加水量是影響黔曲發(fā)酵的主要因素，加水量不夠，藥材粉偏干，相對(duì)濕度小，不利于發(fā)酵，水量過(guò)大則藥材發(fā)黏，易霉?fàn)€，且延長(zhǎng)了干燥時(shí)間;發(fā)酵時(shí)間是相對(duì)次要因素，發(fā)酵充分后(大約4～6 d)，含乙醇量不再增加，繼續(xù)發(fā)酵黔曲表面則會(huì)長(zhǎng)出白毛;黔曲發(fā)酵溫度應(yīng)控制在30℃左右，藥材粉加水混合時(shí)每個(gè)處方加水量約700 mL以保證藥材充分潤(rùn)濕，發(fā)酵時(shí)間在4～5 d為宜。

黔曲部頒標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定酒曲的用量為冬、春季用1.25 g，夏、秋季用1.56 g，試驗(yàn)考察中，30℃(夏)和20℃(秋)用量為每個(gè)處方1.25 g，10℃(冬)用量為每個(gè)處方1.25 g，從發(fā)酵樣品中含乙醇量來(lái)看，在自然狀態(tài)下，在夏季里黔曲的發(fā)酵效果最好，但黔曲成品的臨床效用是否與此相關(guān)，還有待進(jìn)一步的研究。

［1］張東亮，王啟軍，張水華．生料釀酒工藝概述［J］．釀酒，2006，33(6):46-48．

［2］榮瑞金，李祖明．中國(guó)酒曲微生物研究進(jìn)展［J］．中國(guó)釀造，2009，28(6):5-8．

［3］王世強(qiáng)，鄭揚(yáng)云.2種地方酒曲主要微生物特性的比較研究［J］．中國(guó)釀造，2010，29(3):141-142．

［4］劉義剛．生料糖化與釀酒研究概述［J］．釀酒科技，2000，21(5):40-43．

［5］王懷能，王輝．生淀粉糖化酶的研究［J］．釀酒科技，2000，21(3):32-34．

［6］肖冬光，鄒海晏．生料釀酒技術(shù)有關(guān)問(wèn)題探討［J］．釀酒科技，2000，21(6):39-42．

［7］李祥，呂嘉櫪，李小奎．生料釀酒工藝技術(shù)研究［J］．釀酒科技，2002，23(6):42-44．

［8］鄒東恢，梁敏，馬翠翠．生料釀酒技術(shù)的應(yīng)用與開(kāi)發(fā)［J］．釀酒科技，2005，26(6):61-64．

［9］何丹，肖更生，吳繼軍，等．生料釀酒技術(shù)的研究與應(yīng)用［J］．現(xiàn)代食品科技，2007，23(10):93-96．

［10］李健容，蔡愛(ài)群．民間傳統(tǒng)酒曲主要微生物的分離及鑒定［J］．釀酒科技，2007，28(5):111-115．

［11］葉定江．中藥炮制學(xué)［M］．上海:上海科學(xué)出版社，1996:261．

［12］江西省食品藥品監(jiān)督管理局．江西省中藥飲片炮制規(guī)范［S］．上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2008:573．

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1001-1528(2012)10-2041-02

2011-07-04

江西省衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科研科題(2010A106)

余良忠(1975—)，男，副研究員，從事中藥質(zhì)量控制技術(shù)研究。Tel:(0791)88501125，E-mail:yczp4@yahoo．cn