汪偉民* 蔡煒龍 潘 杰 許洪寶

浙江省湖州市中心醫(yī)院普外科（313000）

胃癌為最常見的惡性腫瘤之一，根據(jù)全球癌癥統(tǒng)計資料，2008年胃癌新發(fā)病例數(shù)和死亡病例數(shù)分別占癌癥總體新發(fā)病例數(shù)和死亡病例數(shù)的8%和10%，70%以上的新發(fā)病例和死亡病例出現(xiàn)于發(fā)展中國家[1]。胃癌的發(fā)生、發(fā)展是一個多因素參與的多步驟過程，幽門螺桿菌（H.pylori）感染與胃癌發(fā)生密切相關(guān)目前已成為共識[2]。ATDC基因（ataxia-telangiectasia group D complementing gene）又名 TRIM29（tripartite motif-containing 29），定位于染色體11q22-23，編碼由588個氨基酸構(gòu)成的蛋白質(zhì)。ATDC蛋白的氨基酸序列中含有多個鋅指基序和一個亮氨酸拉鏈基序，使之可形成同源或異源二聚體。ATDC在正常成體組織中表達于胎盤、前列腺和胸腺，在胚胎組織中表達于外胚層[3]，具有促進細胞增殖和抑制電離輻射敏感性的功能。Kosaka等[4]的研究發(fā)現(xiàn)胃癌組織中ATDC表達較正常胃黏膜顯著增高，其高表達可作為胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標記。關(guān)于胃癌組織中ATDC表達與H.pylori感染的關(guān)系，目前尚未見文獻報道。本研究通過檢測胃癌組織中的ATDC表達并分析其表達與胃癌臨床病理特征和患者H.pylori感染狀態(tài)的關(guān)系，旨在進一步明確ATDC在胃癌中的作用，并初步探討ATDC與H.pylori相關(guān)胃癌的關(guān)系，以期為胃癌的有效防治提供新的思路。

材料與方法

一、標本獲取

選取2008年6月～2010年5月于浙江省湖州市中心醫(yī)院行胃癌根治術(shù)的72例胃癌患者的癌組織和相應癌旁非癌組織（距胃灶邊緣3～5 cm）石蠟包埋標本，所有標本均經(jīng)HE染色病理檢查明確診斷，按美國癌癥聯(lián)合會（AJCC）標準對胃癌行組織學分級。入選患者男38例，女34例，年齡32～76歲，平均（54.6±16.6）歲。所有患者均未接受過H.pylori根除治療，術(shù)前未接受過放化療。經(jīng)13C-尿素呼氣試驗（13C-UBT）判定 H.pylori感染情況，H.pylori陰性28例，陽性44例，陽性率為61.1%。

二、ATDC免疫組化染色

以免疫組化SP法檢測胃癌組織和相應癌旁組織中的ATDC表達和分布。兔抗人TRIM29多克隆抗體為Abcam plc.產(chǎn)品，即用型兔SP免疫組化檢測試劑盒（含生物素標記羊抗兔IgG和HRP標記鏈霉卵白素工作液）為北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，操作按試劑盒說明書進行。以PBS代替一抗作為陰性對照，以已知ATDC染色陽性切片作為陽性對照。

結(jié)果判定：ATDC免疫反應陽性物質(zhì)定位于細胞質(zhì)。隨機選取10個200倍視野，每視野計數(shù)400個細胞。陽性細胞比例：無，0分；<30%，1分；30%～60%，2分；≥60%，3分。陽性染色強度：無，0分；弱，1分；一般，2分；強，3分?？偡譃閮山M分值之和：0 分，陰性（－）；1～2 分，弱陽性（±）；3～4 分，陽性（+）；5～6 分，強陽性（++）。 陽性和強陽性判定為ATDC表達陽性。

三、統(tǒng)計學分析

應用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件，組間率的比較采用χ2檢驗，組間等級資料的比較采用Wilcoxon檢驗或Kruskal-Wallis H檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

一、胃癌和相應癌旁組織ATDC表達比較

72例胃癌組織中，ATDC陰性、弱陽性、陽性、強陽性表達例數(shù)分別為5、12、40、15例，陽性表達率為76.4%（55/72），其表達定位于腫瘤細胞質(zhì)；相應癌旁組織ATDC陰性、弱陽性、陽性、強陽性表達例數(shù)分別為 50、20、2、0例， 陽性表達率為 2.8%（2/72），其表達定位于細胞質(zhì)（見圖1）。胃癌組織ATDC陽性表達率明顯高于相應癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

二、ATDC表達與胃癌臨床病理特征和患者H.pylori感染狀態(tài)的關(guān)系

圖1 ATDC在胃癌和相應癌旁組織中的表達（免疫組化SP法，×200）

中低分化、伴轉(zhuǎn)移（包括淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠處轉(zhuǎn)移）、伴H.pylori感染的胃癌患者，胃癌組織ATDC陽性表達率和表達強度分別明顯高于高分化、不伴轉(zhuǎn)移、不伴 H.pylori感染的胃癌患者，差異均有統(tǒng)計學意義；不同性別組間ATDC表達則無明顯差異（見表1）。表明ATDC表達與胃癌組織學分級、轉(zhuǎn)移以及患者的H.pylori感染狀態(tài)相關(guān)，而與患者性別無關(guān)。

表1 ATDC表達與胃癌臨床病理特征和患者H.pylori感染狀態(tài)的關(guān)系

討 論

胃癌是嚴重威脅人類健康的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其早期診斷和治療一直是相關(guān)領(lǐng)域的研究熱點。已知H.pylori是人類胃癌的Ⅰ類致癌原，因此尋找H.pylori相關(guān)胃癌的分子標記物對胃癌的有效防治具有重要意義。

ATDC又名TRIM29，屬于TRIM蛋白家族，其特征性結(jié)構(gòu)為含有三個鋅結(jié)合域（R、B1、B2）和一個卷曲螺旋區(qū)域（CC），ATDC 含有 B1、B2和 CC。TRIM蛋白家族為RING型E3泛素連接酶亞家族之一，其成員參與了發(fā)育、細胞生長等多種生物學過程以及一些人類疾病如HIV感染和惡性腫瘤的發(fā)生。研究顯示ATDC在肺癌、膀胱癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、多發(fā)性骨髓瘤、胃癌、胰腺癌中呈高表達，在黑素瘤、乳腺癌、頭頸部癌、前列腺癌中呈低表達[3～6]。

Kosaka等[4]以實時RT-PCR和免疫組化技術(shù)檢測了124例胃癌患者的ATDC mRNA和蛋白表達，發(fā)現(xiàn)胃癌組織中的ATDC mRNA表達水平是相應非癌組織的3.07倍，胃癌組織中ATDC陽性染色定位于腫瘤細胞質(zhì)，基質(zhì)細胞和正常上皮細胞中未見ATDC表達；ATDC mRNA表達與胃癌的大小、組織學分級、浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)；多變量logistic回歸模型顯示ATDC mRNA高表達可作為胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨立預測因素；此外，ATDC mRNA高表達尚與預后不良相關(guān)。Wang等[6]的研究顯示，ATDC在正常胰腺組織和慢性胰腺炎組織中基本不表達，在絕大多數(shù)侵襲性胰腺癌以及胰腺癌前病變中呈高表達，具有加速癌細胞增殖，促進腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的作用。

本研究以免疫組化方法檢測ATDC在胃癌組織和相應癌旁組織中的表達，發(fā)現(xiàn)ATDC在胃癌組織中的陽性表達率顯著高于相應癌旁組織（76.4%對2.8%），且胃癌組織中的ATDC表達與胃癌組織學分級和轉(zhuǎn)移相關(guān)，表明ATDC可能參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展。

Wnt/β-catenin信號通路為常見腫瘤信號通路，大量研究[7～10]顯示該信號通路障礙為胃癌發(fā)生、發(fā)展的機制之一。關(guān)于胰腺腫瘤中ATDC表達的研究[6]顯示，胰腺癌組織中的ATDC表達與β-catenin水平升高相關(guān)，進一步探討其機制，發(fā)現(xiàn)ATDC可與 Dvl-2蛋白（Wnt/β-catenin信號通路 Axin/Gsk-3β/APC降解復合體中Gsk-3β的負調(diào)控因子）結(jié)合并穩(wěn)定其表達，從而使β-catenin從降解復合體中釋放以穩(wěn)定其表達，進而激活下游由β-catenin/TCF/LEF調(diào)節(jié)的靶基因轉(zhuǎn)錄，表明ATDC系通過激活Wnt/β-catenin信號通路發(fā)揮致胰腺癌作用。關(guān)于卵巢癌組織中ATDC與β-catenin關(guān)系的研究[11]亦表明β-catenin可能是ATDC參與卵巢癌發(fā)生、發(fā)展的效應蛋白。由此推測ATDC在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用亦可能是通過調(diào)節(jié)Wnt/β-catenin信號通路實現(xiàn)的，具體機制有待進一步研究。

此外，有研究[12]發(fā)現(xiàn)ATDC可與乙酰轉(zhuǎn)移酶蛋白Tip60結(jié)合，ATDC過表達促進Tip60降解并改變其細胞內(nèi)分布，使Tip60對p53的乙?；饔媒档?，導致細胞生長和轉(zhuǎn)化活性增強。另有研究[13]發(fā)現(xiàn)，ATDC可通過與p53結(jié)合阻止其進入細胞核，從而抑制p53的核活性以及由p53調(diào)節(jié)的基因如p21、NOXA表達，促進細胞增殖。上述機制可用于解釋ATDC對腫瘤細胞的促增殖作用。因此ATDC參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展還可能與p53信號通路有關(guān)。

本研究還發(fā)現(xiàn)伴H.pylori感染的胃癌患者胃癌組織ATDC陽性表達率和表達強度顯著高于不伴H.pylori感染的胃癌患者。本組胃癌患者系以13C-UBT判定H.pylori感染情況。鑒于胃癌患者的胃內(nèi)環(huán)境已不適合 H.pylori生存，13C-UBT并不能準確反映胃癌患者的H.pylori感染狀態(tài)，因此根據(jù)上述結(jié)果僅能推測ATDC與H.pylori相關(guān)胃癌之間可能存在一定聯(lián)系。至于ATDC是否參與了H.pylori相關(guān)胃癌的發(fā)生機制，抑或ATDC與H.pylori系通過不同機制，在胃癌發(fā)生、發(fā)展的不同階段起不同作用，以及兩者是否具有協(xié)同致癌作用，均有待進一步研究。H.pylori感染可激活胃上皮細胞中的轉(zhuǎn)錄因子 NF-κB，NF-κB信號通路在H.pylori相關(guān)胃黏膜炎癥中起關(guān)鍵作用[14,15]，亦為胃癌發(fā)生的重要路徑之一[10]。ATDC參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展是否與NF-κB信號通路有關(guān)，有待進一步研究。

綜上所述，ATDC在胃癌組織中的表達顯著高于相應癌旁組織，并與胃癌組織學分級和轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示其可能參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展；而伴H.pylori感染的胃癌患者胃癌組織ATDC表達顯著高于不伴 H.pylori感染的胃癌患者，則提示ATDC可能與H.pylori相關(guān)胃癌有一定聯(lián)系。因此，ATDC有望成為新的胃癌分子標記物，為胃癌的早期診斷、預后判斷和基因治療研究提供新的靶點。

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