張宏萌

山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，山東 濟(jì)南 250355

黃楊 Buxus sinica(Rehd.et.Wils)Cheng為黃楊科黃楊屬植物。在我國(guó)主要分布在南方各省。黃楊自古以來(lái)就是一種重要的藥用植物，最早記載于《本草綱目》:“葉苦平無(wú)毒”，主要有祛濕通絡(luò)、解毒消腫等功效［1］，民間用以治療瘧疾、梅毒、風(fēng)濕、皮炎和狂犬病［2］。黃楊主要的化學(xué)成分為三萜類、如無(wú)羈萜 (friedelin)，表無(wú)羈萜醇 (epifriedelanol)和無(wú)羈萜醇 (friedelanol);黃酮類，如槲皮素－3－β－D－葡萄糖－7－α－L－鼠李糖甙、山柰酚－3－β－D－葡萄糖 －7－β －L－鼠李糖甙等;生物堿類等［3－5］。為充分了解黃楊提取物的抑菌活性，在水提物的基礎(chǔ)上，我們進(jìn)一步對(duì)黃楊的醇提物進(jìn)行了抑菌活性的分析。

1 材料和方法

1.1 醇提取物的制備

取干燥的黃楊葉片粉末加入70﹪的乙醇回流、加熱蒸發(fā)濃縮至含生藥1g/ml，高壓滅菌后于冰箱內(nèi)備用。

實(shí)驗(yàn)所采用的金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌 (分離)、綠膿桿菌、變形桿菌等由山東中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。

表1 黃楊醇提物的抑菌活性

1.2 黃楊醇提取物的抗菌活性測(cè)定

用紙片擴(kuò)散法進(jìn)行試驗(yàn)，培養(yǎng)基和藥敏紙片的制備按照參考文獻(xiàn)［6］的方法進(jìn)行。將黃楊醇提取物配成100 mg.ml－1的供試液，取制備好的紙片 (直徑為6mm)放入供試液中浸泡2h，然后取出紙片置于40℃烘箱中烘干;將菌液濃度為106 ml－1的金黃色葡萄球菌 (分離)、痢疾桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、變形桿菌分別均勻涂抹在普通瓊脂培養(yǎng)基上。最后，再將制備好的藥敏片均勻貼于培養(yǎng)基的3個(gè)位點(diǎn)，然后置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)18h，分別測(cè)定各自的抑菌圈直徑。取3個(gè)重復(fù)的平均值為最終結(jié)果。依同樣方法測(cè)定水提取物的抑菌活性。

1.3 最低抑菌 (MIC)濃度測(cè)定

采用試管比濁法［7］配制系列肉湯培養(yǎng)基，分別加入50μL細(xì)菌懸液，最后一管補(bǔ)加50μL肉湯。對(duì)各管進(jìn)行比濁。將未見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)的管內(nèi)肉湯轉(zhuǎn)接到普通瓊脂培養(yǎng)皿上，再于37℃條件下培養(yǎng)18～24h。將瓊脂平皿上未見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度最為最低殺菌濃度 (MIC)。

2 結(jié)果

黃楊醇提物對(duì)除綠膿桿菌外的四種細(xì)菌均具有抗菌活性，抑菌圈直徑:金黃色葡萄球菌﹥大腸桿菌﹥變形桿菌﹥痢疾桿菌﹥金黃色葡萄球菌 (分離)。

最低抑菌濃度時(shí)抑菌圈直徑:痢疾桿菌﹥大腸桿菌=金黃色葡萄球菌 (分離)﹥變形桿菌=金黃色葡萄球菌。半抑菌濃度時(shí)只對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌 (分離)有抑菌作用。

3 討論

作為藥用植物黃楊在民間經(jīng)常作為消炎藥物來(lái)使用，因此黃楊抑菌活性的研究顯得非常必要。實(shí)驗(yàn)顯示，黃楊醇提物的抑菌活性明顯強(qiáng)于水提物，尤其是對(duì)金黃色葡萄球菌。MIC也比水提物 (50μg.ml－1)偏低。這顯示黃楊醇提物較水提物更好的抑菌效果。盡管黃楊中含有多種化學(xué)成分，如黃酮類、β－谷甾醇類、生物堿等，但推測(cè)黃楊醇提物的抑菌活性主要成分是黃酮類化合物。但實(shí)驗(yàn)也顯示黃楊醇提物對(duì)綠膿桿菌等抑制活性較小，這說(shuō)明黃楊醇提取抑菌活性成分對(duì)細(xì)菌高度的選擇性，因此非常有必要進(jìn)一步探討其抑菌的作用機(jī)制。

［1］吳征鎰.新華本草綱要 (第一卷)［M］.上海:上海人民出版社，1988:316.

［2］李進(jìn)喜，等.黃楊寧雙盲法治療冠心病的療效觀察［J］.中成藥研究，1984，(5):15.

［3］林云良，邱明華，李忠榮，等.黃楊中的非生物堿化學(xué)成分［J］.云南植物研究，2006，28(4):429－432.

［4］梁軍，蘇小建，徐慶，等.小葉黃楊石油醚部位化學(xué)成分［J］.中藥材，2009，32(7):1062－1064.

［5］邱明華，聶瑞麟.黃楊生物堿及其植物資源［J］.天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，1992，4(4):41－57.

［5］吳國(guó)娟，張中文，李煥榮，等.中草藥對(duì)奶牛乳房炎6種致病菌的抑茵效果觀察［J］.北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，18(3):195－198.

［6］李健強(qiáng)，李六金.獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)習(xí)指導(dǎo)［M］.西安:陜西科學(xué)技術(shù)出版社，1998.

［7］邱明華.黃楊科植物生理活性生物堿成分［D］.北京大學(xué)博士研究生論文，北京:北京大學(xué)，1996:1－120.