王玉健，王 斌，馬 妍，楊志勇

（天津市公安局物證鑒定中心，天津 300384）

應(yīng)用EZ-tape膠帶分離提取混合斑精細胞

王玉健，王 斌，馬 妍，楊志勇

（天津市公安局物證鑒定中心，天津 300384）

法醫(yī)遺傳學；精細胞；混合斑；EZ-tape膠帶

在強奸案件中的DNA檢驗往往需要將混合斑中男性精子與女性陰道上皮細胞徹底分離。常規(guī)方法是剪取載體及其上面附著的混合斑跡一起進行差異裂解分離出精子細胞與女性陰道上皮細胞。在實踐中，由于載體的介入可能會帶來不利因素，加大了混合斑分離的難度，往往得不到男性精斑的DNA分型或者得到的是混合DNA分型。本研究根據(jù)混合斑的形成特點，利用EZ-tape膠帶既不破壞載體又可多次粘取載體表面混合斑跡的特性，巧妙地克服了載體帶來的諸多不利因素，提高了男性精子的檢出率。

1 材料與方法

1.1 材料

10份混合斑檢材均來自于日常案件，檢材包括內(nèi)褲、護墊、衛(wèi)生紙、床單等。

1.2 儀器與試劑

EZ-tape膠帶（公安部物證鑒定中心研制），F(xiàn)reedom EVO 100-4型自動化提取工作站（瑞士TECAN公司），EQ1000法醫(yī)DNA提取試劑盒（北京東勝創(chuàng)新生物科技有限公司），9700型PCR擴增儀、3130XL型遺傳分析儀、SinofilerTM試劑盒（美國AB公司）。

1.3 方法

用EZ-tape膠帶多次粘取載體表面的可疑斑跡部位，用干凈的鑷子揭下基座上的膠帶，剪碎放入1.5mL離心管中，按照文獻[1]中的步驟加300μL TNE緩沖液于37℃浸泡30min，然后加入30μL 10%的SDS，加蛋白酶K至終質(zhì)量濃度為40 μg/mL（如果女性細胞較多，蛋白酶K終質(zhì)量濃度可增至100 μg/mL）。于56℃保溫過夜消化女性上皮細胞后直接挑出膠帶，然后以離心半徑5cm，14000r/min，離心5min，取得富含女性DNA的上清液保存?zhèn)溆?，男性精細胞沉淀用TNE緩沖液洗滌兩次備用。按照文獻[2]的方法，在Freedom EVO 100-4型自動化提取工作站上應(yīng)用EQ1000法醫(yī)DNA提取試劑盒運行“工作站-磁珠法”提取程序，分孔提取上述上清液及男性精子細胞懸液，最終得到的DNA樣品采用SinofilerTM試劑盒進行復合擴增，擴增產(chǎn)物以3130XL型遺傳分析儀進行檢測分析。

2 結(jié)果與討論

10份混合斑檢材均分離獲得男性精子DNA的STR分型。EZ-tape膠帶是公安部物證鑒定中心研制的一種針對脫落細胞的提取裝置，其原理為利用膠帶直接粘取滲透性和非滲透性客體表面上的脫落細胞，膠帶固定在基座上易于操作，使用前后存放于有機玻璃密閉容器中，避免污染[3]。

本研究將EZ-tape膠帶應(yīng)用到強奸案件混合斑中精子的分離，除利用EZ-tape膠帶的上述優(yōu)點外，還利用其不破壞檢材載體即可取到載體表面目的細胞的特性。這就避免了檢材載體帶來的載體體積過大、載體本身易碎易爛、載體所含抑制物以及載體深層附著的大量女性細胞等不利因素，縮短了女性細胞的消化時間，簡化了精子的離心分離、洗滌等操作步驟，降低了混合斑分離的難度及成本。

在實際檢驗中，最好先使用特定波長的紫外光源照射上述檢材，通過護目鏡可觀察到混合斑跡的熒光區(qū)域范圍，再結(jié)合顯微鏡檢查大體了解女性上皮細胞及男性精子細胞的數(shù)量，最后根據(jù)檢材實際情況對粘取次數(shù)、粘取范圍、一步消化時蛋白酶K的用量以及消化時間略作調(diào)整。

綜上所述，EZ-tape膠帶的使用很大程度上避免了檢材載體帶來的諸多不利因素，提高了男性精子的檢出率，可在強奸案件中加以利用。

[1]鄭秀芬.法醫(yī)DNA分析[M].北京：中國人民公安大學出版社，2002：47.

[2]匡金枝，聶同鋼，朱巍，等.DNA自動化檢案及其規(guī)范程序的研究與應(yīng)用[C]//公安部物證鑒定中心.法醫(yī)遺傳學進展與應(yīng)用：第三屆全國法醫(yī)DNA檢驗技術(shù)研討會論文選.北京：群眾出版社，2008：20-22.

[3]李萬水，胡蘭，劉海東，等.用EZ-tape膠帶提取接觸DNA一例[C]//公安部物證鑒定中心.法醫(yī)遺傳學進展與應(yīng)用：第三屆全國法醫(yī)DNA檢驗技術(shù)研討會論文選.北京：群眾出版社，2008：367-368.

2012-02-13）

（本文編輯：李成濤）

DF795.2

B

10.3969/j.issn.1004-5619.2012.02.015

1004-5619（2012）02-0133-01

王玉?。?973—），男，天津人，副主任法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)DNA檢案工作；E-mail：mayan0615@126.com