馬銀麗 湯浩舟

(南京軍區(qū)杭州療養(yǎng)院海勤療養(yǎng)區(qū)，310002)

血脂是血液中所含類(lèi)脂質(zhì)的總稱(chēng)。血脂中主要包含膽固醇、三酰甘油(即中性脂肪)、磷脂、脂肪酸等。血脂增高叫高血脂，在臨床上高血脂常稱(chēng)作高脂血癥[1]。

高脂血癥是一種常見(jiàn)病癥，在中老年人中發(fā)病率較高，受人們生活習(xí)慣特別是飲食習(xí)慣的改變等多種因素的影響，高脂血癥的發(fā)病率有明顯增高的趨勢(shì)，其危害是隱匿、逐漸、進(jìn)行性和全身性的，會(huì)加速動(dòng)脈粥樣硬化，乃至引起冠心病、腦血栓、腦出血等危及生命的疾病[2]。

高脂血癥可分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩類(lèi)。原發(fā)性與先天性和遺傳性有關(guān)，是由于單基因缺陷或多基因缺陷，使參與脂蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝的受體、酶或載脂蛋白異常所致，或由于環(huán)境因素(飲食、營(yíng)養(yǎng)、藥物)和通過(guò)未知的機(jī)制而致。繼發(fā)性多繼發(fā)于代謝紊亂疾病 (糖尿病、高血壓、黏液性水腫等)，或與其他因素(年齡、性別、季節(jié)、飲酒等)有關(guān)。

目前的預(yù)防和治療高脂血癥的方法有飲食治療：低脂低糖飲食、戒煙限酒。運(yùn)動(dòng)治療：消耗體內(nèi)能量促進(jìn)代謝，提高體內(nèi)某些酶活性。藥物治療：如消膽胺、煙酸肌醇酯、多烯康等[3-5]。

對(duì)于高脂血癥目前還是以預(yù)防為主，其中運(yùn)動(dòng)治療中的項(xiàng)目仍較模糊，跑步是我們?nèi)粘Ｉ钪休^普遍并方便可行的方法。適當(dāng)?shù)呐懿娇梢詮?qiáng)健心肌、提高消化和吸收能力[6]。因此，我們研究運(yùn)動(dòng)治療中的跑步項(xiàng)目是否對(duì)降脂作用有效來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)討論。

1 實(shí)驗(yàn)主要儀器、試劑

1.1 實(shí)驗(yàn)主要儀器 可調(diào)速平面跑步機(jī)(型號(hào)：800，IITC)；風(fēng)光光度計(jì)(型號(hào)：Unico 2000)；冷凍高速離心機(jī)(型號(hào)：Labofuge 400R，Thermo Scientific)；精密電子天平(型號(hào)：T200，G＆G)；4℃冰箱(BCD-205E/Y，海爾集團(tuán))；恒溫水浴箱(型號(hào)：DK-S24，上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；微量加樣器；一次性手套；手術(shù)剪；鑷子；灌胃針；數(shù)碼相機(jī)(型號(hào)：E800，BenQ)；旋渦混合器(型號(hào)：XW-80A，上海精科實(shí)業(yè)有限公司)；研磨器。

1.2 實(shí)驗(yàn)主要試劑 總膽固醇液體單試劑盒，三酰甘油液體單試劑盒，高密度脂蛋白膽固醇測(cè)定試劑盒(溫州東甌津瑪生物技術(shù)有限公司)，基礎(chǔ)飼料，高脂飼料(79％基礎(chǔ)飼料、1％膽固醇、10％蛋黃粉和10％豬油，0.5％去氧膽酸鈉)[7]，洛伐他汀沖劑，氯化鈉。

1.3 實(shí)驗(yàn)其他材料 苦味酸顏料，平皿，計(jì)時(shí)器，冰塊。

1.4 實(shí)驗(yàn)主要試劑配制

1.4.1 洛伐他汀懸濁液的配制 30 mg洛伐他汀粉劑，溶于10 mL 1％的CMC溶液，充分溶解，制成懸濁液。

1.4.2 生理鹽水的配制 0.9 g Nacl溶于100 mL蒸餾水。

2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟

2.1 小鼠實(shí)驗(yàn)前處理

2.1.1 小鼠適應(yīng)訓(xùn)練 將每只小鼠都放跑步機(jī)上適應(yīng)性訓(xùn)練5 min。觀察是否身體健全，符合實(shí)驗(yàn)要求。大多數(shù)小鼠都能在1 min后強(qiáng)迫跑步，有些腳趾破口出血，屬正常現(xiàn)象。無(wú)明顯個(gè)體有不良反應(yīng)。

2.1.2 小鼠分組標(biāo)記 36只昆明小鼠，雌雄各半[8]，將它們隨機(jī)分成6組，分別標(biāo)記為普通組、高脂組、藥物對(duì)照組、高強(qiáng)度跑步組、中強(qiáng)度跑步組、低強(qiáng)度跑步組。每組雌雄各3只，雌雄分籠飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。標(biāo)記方法[9](表1)。

2.2 建立高脂小鼠模型

2.2.1 小鼠喂養(yǎng)方式[10-11]普通組喂養(yǎng)普通小鼠飼料，其余各組均喂養(yǎng)高脂小鼠飼料，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心無(wú)菌房飼養(yǎng)2周。每只小鼠每天約進(jìn)食6 g，自由飲水。

2.2.2 每周記錄體質(zhì)量(表2～4)，觀察生長(zhǎng)狀況 由表2可知，36只小鼠平均體質(zhì)量 (24.5±1.3)g，生長(zhǎng)狀況均良好，無(wú)出現(xiàn)死亡、消瘦等不良癥狀。

由表3可知，36只小鼠平均體質(zhì)量(30.6±2.9)g，與1周前比較P=0.01，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。生長(zhǎng)狀況均良好，無(wú)出現(xiàn)死亡，消瘦等不良癥狀。

由表4可知，36只小鼠平均體質(zhì)量(31.8±3.5)g，與兩周前比較P=0.01，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與1周前比較P=0.019，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，生長(zhǎng)狀況均良好，無(wú)出現(xiàn)死亡、消瘦等不良癥狀。

表1 各組各小鼠辨識(shí)標(biāo)記

表2 建立模型前各組每只小鼠體質(zhì)量(g)

表3 1周后各組每只小鼠體質(zhì)量(g)

表4 兩周后各組各小鼠體質(zhì)量(g)

2.3 檢驗(yàn)高脂模型是否建立成功 隨機(jī)選取普通組和高脂組小鼠各3只，不分雌雄，禁食18 h后對(duì)血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和肝TC、TG濃度用分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)分析。

2.3.1 取血、離心 眼球取血約0.3 mL于離心管中，4℃、4 000 r/min離心10 min，取上清液于新離心管，用試劑盒檢測(cè)。若離心后上清較少，可重復(fù)多次離心，直至所需量約0.1 mL。

2.3.2 取肝臟、離心 解剖小鼠取出整個(gè)肝臟于生理鹽水中浸洗，吸水紙吸干生理鹽水后稱(chēng)重，在相同部位取0.1 g肝組織，于盛有5 mL生理鹽水的研磨器中研磨，至無(wú)塊狀肝組織后倒入離心管，4℃、4 000 r/min離心10 min，取中間層(上層為白色脂質(zhì)層)，用試劑盒檢測(cè)，若離心后上清較少，可重復(fù)多次離心，直至所需量約0.1 mL。

2.3.3 試劑盒反應(yīng) 分別按表5、表6、表7加入試劑，旋渦振蕩器充分混勻，放4℃冰箱保存待用。

表5 TG測(cè)定試劑盒(μL)

表6 TC測(cè)定試劑盒(μL)

表7 HDL測(cè)定試劑盒(μL)

2.3.4 分光光度計(jì)分析 TG、TC、HDL測(cè)定均使用546 nm的波長(zhǎng)。并記錄數(shù)據(jù)。

2.3.5 計(jì)算公式

TG(mmol/L)=AT/AS·CS(CS=2.26 mmol/L)

TC(mmol/L)=AT/AS·CS(CS=5.17 mmol/L)

HDL(mmol/L)=AT/AS·CS(CS=1.29 mmol/L)

2.4 進(jìn)行跑步運(yùn)動(dòng)期間

2.4.1 普通組和高脂組小鼠 雌雄分籠喂養(yǎng)3周，不參加跑步運(yùn)動(dòng)，每天生理鹽水灌胃，生理鹽水0.2mL。每只約進(jìn)食6 g，普通組喂養(yǎng)普通飼料，高脂組喂養(yǎng)高脂飼料，自由飲水。

2.4.2 藥物對(duì)照組小鼠 雌雄分籠喂養(yǎng)3周，不參加跑步運(yùn)動(dòng)，每天藥物懸濁液灌胃，洛伐他汀懸濁液0.2 mL。每只約進(jìn)食6 g，自由飲水。

2.5 跑步組小鼠

2.5.1 第1周運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度 使用平面跑步機(jī)，每通道2只小鼠一起進(jìn)行，轉(zhuǎn)數(shù)10 m/min，運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度從高到低所用時(shí)間依次為30 min、20 min、10 min，即300 m、200 m、100 m的鍛煉量。1周不間斷鍛煉[12]，運(yùn)動(dòng)后休息半小時(shí)后用生理鹽水灌胃，生理鹽水0.2 mL。每只每天約進(jìn)食6 g，自由飲水。在此強(qiáng)度訓(xùn)練下，小鼠生理狀況良好，說(shuō)明未到達(dá)運(yùn)動(dòng)極限。

2.5.2 第2周運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度 使用平面跑步機(jī)，每通道2只小鼠一起進(jìn)行，轉(zhuǎn)數(shù)12 m/min，運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度從高到低所用時(shí)間依次為45 min、30 min、15 min，即540 m、360 m、180 m的鍛煉量。分別比第1周多240 m、160 m、80 m。1周不間斷鍛煉，運(yùn)動(dòng)后休息半小時(shí)后用生理鹽水灌胃，生理鹽水0.2 mL。每只每天約進(jìn)食6 g，自由飲水。在此強(qiáng)度訓(xùn)練下，小鼠生理狀況良好，說(shuō)明未到達(dá)運(yùn)動(dòng)極限。

2.5.3 第3周運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度 使用平面跑步機(jī)，每通道2只小鼠一起進(jìn)行，轉(zhuǎn)數(shù)14 m/min運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度從高到低所用時(shí)間依次為60 min、45 min、30 min，即840 m、630 m、420 m的鍛煉量。分別比第2周多300 m、270 m、240 m。1周不間斷鍛煉，運(yùn)動(dòng)后休息半小時(shí)后用生理鹽水灌胃，生理鹽水0.2 mL。每只每天約進(jìn)食6 g，自由飲水。在此強(qiáng)度訓(xùn)練下，小鼠生理狀況良好，說(shuō)明未到達(dá)運(yùn)動(dòng)極限。

2.6 指標(biāo)測(cè)定

2.6.1 取血，離心待用 眼球取血約0.3 mL于離心管中，4℃4 000 r/min離心10 min取上清于新離心管，若離心后上清較少，可重復(fù)多次離心，直至所需量約0.1 mL。

2.6.2 取肝臟，離心待用 解剖小鼠取出整個(gè)肝臟于生理鹽水中浸洗，吸水紙吸干生理鹽水后稱(chēng)重，在相同部位取0.1 g肝組織，于盛有5 mL生理鹽水的研磨器中研磨，無(wú)塊狀肝組織后倒入離心管，4℃4 000 r/min離心10 min，取中間層，用試劑盒測(cè)量，若離心后上清較少，可重復(fù)多次離心，直至所需量約0.1 mL。

2.6.3 試劑盒反應(yīng) 按表5、表6、表7加入反應(yīng)試劑，放4℃冰箱待用。

2.6.4 分光光度計(jì)分析 TG、TC、HDL測(cè)定均使用546 nm的波長(zhǎng)。記錄數(shù)據(jù)。

2.6.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 17.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 建模后小鼠體質(zhì)量、血脂指標(biāo)數(shù)據(jù)(表8) 通過(guò)建模后數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析，我們發(fā)現(xiàn)高脂組小鼠的TG、TC含量明顯高于普通組的對(duì)應(yīng)項(xiàng)，高脂組小鼠的HDL含量明顯低于普通組。證明高脂模型已經(jīng)建立，建模成功。

3.2 3周運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練后小鼠體質(zhì)量、一些指標(biāo)數(shù)據(jù)(表9～11) 各組小鼠間，肝指數(shù)在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上無(wú)明顯差異，但從數(shù)據(jù)上能看出高脂組的肝指數(shù)最高；高強(qiáng)度跑步組最低且與藥物對(duì)照組相似；中強(qiáng)度、低強(qiáng)度跑步組依次次之，相比正常組而言，中強(qiáng)度跑步組還是有優(yōu)勢(shì)的。從體質(zhì)量的數(shù)據(jù)情況來(lái)看，與肝指數(shù)大體相同。

根據(jù)數(shù)據(jù)說(shuō)明，藥物對(duì)照組和高強(qiáng)度跑步組的TC、TG、HDL濃度與高脂組比較，均有顯著性差異。且藥物組和高強(qiáng)度跑步組的數(shù)值比較接近，說(shuō)明高脂跑步組的效果與藥物對(duì)照組的效果相似。而中度及低度跑步組的TC、TG、HDL濃度相對(duì)于高脂組，沒(méi)有全部出現(xiàn)顯著性差異；但數(shù)值還是都有所變化的。說(shuō)明，中等及低等的跑步運(yùn)動(dòng)量還不夠。

高強(qiáng)度跑步組對(duì)于中強(qiáng)度跑步組：TG、TC的濃度變化無(wú)顯著性差異，HDL的濃度變化有顯著性差異；高強(qiáng)度跑步組對(duì)于低強(qiáng)度跑步組：TC、TG的濃度變化均有顯著性差異，HDL的濃度變化有極顯著性差異。說(shuō)明高強(qiáng)度和低強(qiáng)度這兩個(gè)程度的治療有一定的差距。這種較低的跑步強(qiáng)度并沒(méi)有起到明顯的效果。

數(shù)據(jù)顯示：藥物組對(duì)照和高強(qiáng)度跑步組相對(duì)高脂組的TC、TG濃度，都具有極顯著差異；且藥物對(duì)照組及高強(qiáng)度跑步組無(wú)明顯差異，高強(qiáng)度跑步組對(duì)于中強(qiáng)度組及低強(qiáng)度組：TC、TG的濃度變化均無(wú)明顯差異；HDL的濃度變化有顯著性差異。

3.3 小鼠實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每周的平均體質(zhì)量變化(表12) 從表12可以清楚地看到，參加運(yùn)動(dòng)的三組小鼠和藥物對(duì)照組的小鼠體質(zhì)量都有明顯下降，高強(qiáng)度跑步組的小鼠體質(zhì)量和藥物對(duì)照組的相近，且均接近普通組。

表8 建模后小鼠體質(zhì)量、血脂指標(biāo)比較(x±s)

表9 3周運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練后各組小鼠肝指數(shù)、體質(zhì)量指標(biāo)比較(x±s)

表10 3周運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練后血清各血脂指標(biāo)對(duì)照數(shù)據(jù)(x±s)

表11 3周運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練后肝的各血脂指標(biāo)對(duì)照數(shù)據(jù)(x±s)

表12 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每周各組小鼠平均體質(zhì)量

4 分析與討論

高強(qiáng)度的跑步運(yùn)動(dòng)，即60％～80％HRmax的有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)高脂血癥的預(yù)防及初期治療有效。堅(jiān)持鍛煉將有望在患病初期和藥物治療相媲美。

對(duì)于日趨老年化的社會(huì)，我們對(duì)老年患病率較高的高脂血癥進(jìn)行運(yùn)動(dòng)預(yù)防和治療研究。研究通過(guò)運(yùn)動(dòng)方式、運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度、運(yùn)動(dòng)時(shí)間、性別等幾方面開(kāi)展實(shí)驗(yàn)探討。

本實(shí)驗(yàn)只是單一地從跑步方面來(lái)驗(yàn)證降脂效果，對(duì)于其他的很多有氧運(yùn)動(dòng)并未涉及，選擇跑步的原因是：①跑步屬于耐力型；②跑步運(yùn)動(dòng)到的肌群較多；③簡(jiǎn)便易行。

在本實(shí)驗(yàn)中，設(shè)立了高、中、低3個(gè)強(qiáng)度的對(duì)照訓(xùn)練。其中高強(qiáng)度(即60％～80％HRmax的有氧運(yùn)動(dòng))訓(xùn)練之下，高脂模型小鼠的三酰甘油和總膽固醇含量明顯降低，高密度脂蛋白明顯上升，而中等強(qiáng)度和低等強(qiáng)度未達(dá)到較好的效果，間接說(shuō)明在強(qiáng)度適當(dāng)?shù)那闆r下，每天的有氧耐力鍛煉對(duì)癥狀是起作用的。

目前研究表明，系統(tǒng)參加耐力訓(xùn)練的男、女運(yùn)動(dòng)員都一致的表現(xiàn)出血漿高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)濃度升高，平均升高20％～35％，而參加速度、力量訓(xùn)練的運(yùn)動(dòng)員則無(wú)明顯變化。Sgouraski在研究[13]急性運(yùn)動(dòng)對(duì)HDL-C的影響時(shí)，以78名運(yùn)動(dòng)員用最大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)15 min后發(fā)現(xiàn)HDL-C都有不同程度的提高，其中以長(zhǎng)跑運(yùn)動(dòng)員最高。Zhang JQ等研究發(fā)現(xiàn)，正常人和高脂血癥患者以60％VO2max運(yùn)動(dòng)1 h后，其LPL濃度明顯上升并可持續(xù)24 h[14-16]。

普遍認(rèn)為，慢性運(yùn)動(dòng)可以使TG濃度降低，而且其下降幅度與運(yùn)動(dòng)負(fù)荷和運(yùn)動(dòng)之前血漿TG的濃度正相關(guān)。持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，周期性的大肌群參加的有氧運(yùn)動(dòng)，對(duì)血漿脂類(lèi)和脂質(zhì)蛋白濃度的影響較明顯[17]。

雌雄模型小鼠在本實(shí)驗(yàn)的運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練下，都達(dá)到了理想的效果，說(shuō)明高脂血癥的發(fā)病率與性別無(wú)明顯相關(guān)性，且運(yùn)動(dòng)效果也與性別無(wú)明顯相關(guān)性。

5 小結(jié)

由實(shí)驗(yàn)得出：在60％～80％HRmax的有氧運(yùn)動(dòng)下，高脂血癥可以得到預(yù)防及慢性治療，實(shí)驗(yàn)中其效果和使用藥物相當(dāng)，但不排除造模的不完全性，時(shí)間過(guò)短而呈現(xiàn)假陽(yáng)性。加強(qiáng)每天的跑步鍛煉，不僅可提高自身抵抗力，還能預(yù)防高脂血癥。

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