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        野甘草的生藥學(xué)研究

        2012-01-15 03:41:13唐曉敏
        云南中醫(yī)中藥雜志 2012年2期
        關(guān)鍵詞:試液斑點薄層

        楊 全, 唐曉敏

        (廣東藥學(xué)院, 廣東 廣州 510006)

        野甘草又名冰糖草、香儀、假甘草等,為玄參科植物野甘草(ScopariadulcisL.)的全株,主要分布在廣西、廣東、福建、臺灣等地,具有清熱解毒,疏風(fēng)止咳,利尿消腫的功效[1]。我國主要用于治療感冒發(fā)熱、肺熱咳嗽、暑熱吐瀉、腳氣浮腫、小兒麻疹、濕疹、熱痱、高血壓和丹毒等證[2]。目前,國內(nèi)外對野甘草的研究集中在化學(xué)成分及藥理作用方面[3~4],先后發(fā)現(xiàn)了野甘草酸(scopadulcic acid)A、B[5]、野甘草屬酸(scoparic acid)A、B、C、野甘草都林(scopadulin)[6]等活性成分,但尚未見野甘草生藥學(xué)方面的研究報道,本文就其生藥學(xué)特征展開研究,為該藥的鑒別、質(zhì)量控制和進(jìn)一步的開發(fā)利用提供依據(jù)。

        1 儀器與試劑

        XSP-ZCA生物顯微鏡;SK3300H超聲波清洗器(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司);HH-6恒溫水浴鍋(江蘇金壇市宏華儀器廠);YH系列規(guī)格1000ml電熱器(江蘇近湖鎮(zhèn)教學(xué)儀器廠);ZF-20C暗箱式紫外透射儀(上海顧村光電儀器廠)。所用試劑均為分析純。

        2 材料與方法

        2.1 試驗材料 野甘草采于廣東省廣州市和肇慶市,經(jīng)廣東藥學(xué)院藥用植物教研室楊全副教授鑒定為玄參科植物野甘草(ScopariadulcisL.)。

        2.2 試驗方法 運用徒手切片、粉末裝片、表面制片方法進(jìn)行野甘草的顯微鑒別;采用試管定性反應(yīng)及薄層色譜法進(jìn)行理化鑒別。

        3 結(jié)果與分析

        3.1 藥材性狀鑒別 主根呈圓錐形,平直或帶彎曲,木化,長10~30cm,表面棕黃色,常具側(cè)根,質(zhì)脆易折斷,斷面淡黃綠色,皮部薄。莖多分枝,基部圓柱形,黃褐色,上部灰綠色,莖節(jié)明顯,體輕;嫩莖表面具6條縱棱,質(zhì)脆易折斷,斷面髓部中空;分枝由葉腋伸出,光滑無毛。葉片多,皺縮易碎,灰綠色,完整葉浸潤展開后為菱狀卵形或菱狀披針形,葉緣具齒或細(xì)小缺刻,網(wǎng)狀脈序,草質(zhì),兩面無毛。花黃白色,生于葉腋處,偶見卵圓形至球形的蒴果,黃褐色,皺縮,多開裂,散出極小粉狀種子。

        3.2 顯微鑒定

        3.2.1 根橫切面 木栓層由4~5列細(xì)胞組成,多呈扁平狀,類長方形,排列整齊,往往多層相迭,細(xì)胞壁木栓化,呈褐色。皮層較寬,為數(shù)層薄壁細(xì)胞組成,細(xì)胞呈長卵圓形、圓形以及不規(guī)則多角形,排列疏松,有明顯的細(xì)胞間隙,偶見大型裂隙,斷續(xù)排列成環(huán)。韌皮部較狹窄,細(xì)胞小而不規(guī)則。形成層為2~3列排列整齊的扁平細(xì)胞組成。木質(zhì)部較寬,約占2/3左右,導(dǎo)管多單個散在,偶見幾個相連,木射線明顯。見圖1。

        1.木栓層;2.皮層;3.韌皮部;4.形成層;5.木質(zhì)部

        3.2.2 莖橫切面 莖的橫切面略呈圓柱形,有六條縱棱,棱角處為厚角組織。表皮由一列排列整齊緊密、扁平的細(xì)胞組成,外壁稍厚,常見由4~5個細(xì)胞組成的非腺毛。皮層所占比例較小,細(xì)胞大,壁薄,多為球形或橢圓形,排列疏松,靠近表皮的細(xì)胞具有葉綠體,有斷續(xù)排列成環(huán)狀的不規(guī)則小型裂隙。維管束為外韌型,呈放射狀排列,韌皮部較狹窄,約占莖的1/8,由篩管、伴胞、韌皮薄壁細(xì)胞和韌皮纖維組成,細(xì)胞小且不規(guī)則。木質(zhì)部比例較大,約占莖的1/4,由導(dǎo)管、管胞、木薄壁細(xì)胞和木纖維組成。髓部較寬,約為莖的1/2,呈類三角形,常有針晶束分布。見圖2。

        1.表皮;2.厚角組織;3.裂隙;4.皮層;5.韌皮部;6.木質(zhì)部;7.髓

        3.2.3 葉片橫切面 上下表皮細(xì)胞各一列,排列緊密,均有氣孔和腺鱗分布,上表皮細(xì)胞較大,外壁厚,多不規(guī)則,下表皮細(xì)胞類方形。柵欄組織1列,細(xì)胞內(nèi)含有大量葉綠素,與海綿組織分化明顯。主脈維管束為半月形,外韌型,維管束上下方均有厚角組織,木質(zhì)部位于向莖面,導(dǎo)管呈放射狀徑向排列。見圖3。

        1.非腺毛;2.厚角組織;3.下表皮;4.韌皮部;5.木質(zhì)部;6.海綿組織;7.氣孔;8.柵欄組織;9.上表皮;10.腺鱗

        3.2.4 葉表皮片 上下表皮細(xì)胞不規(guī)則,側(cè)壁(垂周壁)呈波浪狀,彼此互相嵌合,有腺鱗分布,由6~8個細(xì)胞組成;上表皮氣孔器為不定式,下表皮為不等式,偶見直軸式。見圖4。

        A B

        A.上表皮;B.下表皮 1.腺鱗;2.氣孔;3.表皮細(xì)胞

        圖4野甘草葉片上下表皮片

        3.2.5 粉末 灰綠色,淀粉粒多為單粒淀粉,偶見復(fù)粒,直徑10~30 μm。導(dǎo)管多為螺紋導(dǎo)管,直徑20~34 μm。纖維有2種,一種細(xì)長,壁厚,另一種壁薄,兩頭稍尖,直徑12~32 μm。腺鱗成群存在,腺頭由6~8個細(xì)胞組成,直徑85~120 μm。非腺毛偶見,由3~4個細(xì)胞組成。可見木栓細(xì)胞碎片,細(xì)胞呈正方形及多角形。見圖5。

        1.淀粉粒;2.螺紋導(dǎo)管;3.非腺毛;4.腺鱗;5.纖維管胞;6.纖維;7.木栓細(xì)胞

        3.3 理化鑒別

        3.3.1 顯色試驗

        3.3.1.1 生物堿類成分鑒別 取本品根部粉末6 g,用40 mL乙醇加熱回流2 h,過濾,濾液加熱濃縮至10 mL過濾,濾液用3倍量水稀釋后加30 mL乙酸乙酯萃取3次,合并乙酸乙酯層,水浴蒸干,殘渣用4 mL乙醇溶解。溶液置于3支試管中,1號試管加入2 mL苦味酸試劑,有黃色沉淀產(chǎn)生;2號試管加入2 mL碘化鉍鉀試劑,有黃棕色沉淀產(chǎn)生;3號試管加入2 mL碘-碘化鉀試液中,有紅棕色沉淀產(chǎn)生。

        3.3.1.2 黃酮類成分鑒別 取本品地上部分粗粉10 g,用 60 mL 95%乙醇加熱回流2 h后蒸餾水稀釋至含醇量為70%,濾過,濾液用石油醚萃取,水浴蒸干,加30 mL 50%乙醇溶解,25 mL水飽和正丁醇洗滌2次,取水層水浴蒸干,加4 mL乙醇溶解[7]。吸取0.5 mL上述樣品溶液乙醇稀釋至2 mL,加少量的鎂粉,滴入2滴濃鹽酸,溶液顯紅色。用毛細(xì)管吸取上述樣品溶液約4 μL,點于濾紙上,晾干,噴1%的三氧化鋁乙醇試液,熱風(fēng)吹干,置于紫外365 nm下觀察,顯鮮黃色熒光。

        3.3.2 薄層色譜鑒別

        3.3.2.1 黃酮類薄層層析 ①根部供試液制備:取根部粉末2 g,用20 mL乙醇加熱回流2 h,過濾,濾液加熱濃縮至約2 mL;②地上部供試液制備:取對照樣品粉末3 g,用30 mL乙醇加熱回流1 h過濾,揮干濾液,用2 mL甲醇溶解;③對照樣品制備:取對照樣品粉末4 g,具體方法參考3.3.1.2。取上述供試液各1 μL,點于同一聚酰胺薄層板上,以乙酰丙酮-乙醇-丁酮-水(1∶3∶3∶13)為展開劑,展開,晾干,噴1%三氯化鋁乙醇試液,吹干,置紫外燈下檢視。②和③供試液在Rf值為0.53、0.33處呈現(xiàn)藍(lán)色熒光斑點,Rf值為0.56、0.47、0.40處呈現(xiàn)亮黃色熒光斑點,①供試液黃色熒光斑點不明顯。

        3.3.2.2 生物堿類薄層層析 根部及地上部供試液制備方法參考3.3.2.1;對照樣品制備同3.3.1。取上述供試液各8 μL,點于同一聚酰胺薄層板上,氯仿-環(huán)己烷-甲醇(19∶1.5∶1)為展開劑,展開,取出晾干。①依次噴碘化鉍鉀和亞硝酸鈉乙醇試液,105 ℃烘至斑點清晰[8],根部及對照樣品在Rf值0.35、0.65處呈現(xiàn)紅棕色斑點,地上部分未見斑點;②取同條件下展開后的薄層色譜,噴1%鉬酸鈉硫酸試液,105 ℃烘至斑點清晰[8],3種供試液均在Rf值0.64處呈現(xiàn)藍(lán)色斑點,根部和對照樣品更清晰。

        4 結(jié)論與討論

        顯微鑒別中,野甘草莖的髓部存在草酸鈣針晶束。葉片為異面葉,上下表皮均有腺鱗和非腺毛存在,氣孔軸式為不定式和不等式。理化鑒別初步判斷野甘草的主要化學(xué)成分為生物堿、黃酮類化合物。其中,生物堿類主要分布在根部,黃酮類主要分布在地上部分。

        [1]中藥大辭典編纂委員會.中藥大辭典[M].下冊.上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,2006:2954.

        [2]李宗友,倪暮云.野甘草的化學(xué)、藥理[J].國外醫(yī)學(xué)中醫(yī)中藥分冊,1994,16(2):11~14.

        [3]盧小曼,陳建華.野甘草痱子水的制備與臨床應(yīng)用[J].廣東藥學(xué),1996,(2):56.

        [4]蔡幼清譯.野甘草提取物和粘霉烯酮在嚙齒動物中的鎮(zhèn)痛和抗炎特性[J].國外醫(yī)學(xué)中醫(yī)中藥分冊,1994,16(4):42.

        [5]Hayashi T,Asano S,Mizutani M.Scopadulciol,an inhibitor of gastric H+,K(+)-ATPase from Scoparia dulcis,and its structure-activity relationships[J].Nat Prod,1991,54(3):802~809.

        [6]Hayashi T,Kawasaki M,Miwa Y.Antiviral agents of plant origin.III.Scopadulin,a novel tetracyclic diterpene from Scoparia dulcis L[J].Chem Pharm Bull(Tokyo),1990,38(4):945~947.

        [7]鄒海艦,唐自明,韋群輝,等.鳳尾茶的生藥研究[J].中國民族民間醫(yī)藥雜志,1999,6:359~363.

        [8]匡海學(xué).中藥化學(xué)[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社,2003:323~327.

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