余曉玲， 張韶湘， 付 義

(昆明市中醫(yī)醫(yī)院，云南中醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院， 云南 昆明 650011)

紅景天和三七是本院院內(nèi)制劑“七龍?zhí)臁钡膬煞N重要藥材。紅景天為景天科多年生草本植物，全世界有90多種，中國(guó)有70多種，進(jìn)行過(guò)化學(xué)成分研究的有20 多種[1]，紅景天具有增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能、降血脂，提高體內(nèi)SOD 活性，增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)耐力等多方作用[2]。三七[Panax notoginseng(BurK.)F.H.Chen]為五加科人參屬植物，是中國(guó)特有的名貴中藥材[3]。一般認(rèn)為三七總皂苷(PNS)是三七的主要藥理活性成分，近年的研究表明 PNS具有擴(kuò)張血管、降低心肌耗氧量、抑制血小板凝集、延長(zhǎng)凝血時(shí)間、降血脂、清除自由基、抗炎、抗氧化等藥理作用[4～8]。為提高兩種藥材有效成分的提取率，需對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)選。一般中藥材的提取方法主要有：冷浸發(fā)[9]、滲漉法[10]、煎煮法、醇回流法[11]、超聲提取法[12]，其中以超聲提取法的提取率最高，但不宜于工藝上放大進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)[13]?！捌啐?zhí)臁敝苿┳詈髮⑦M(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)所以舍棄超聲提取法而選用提取率次之的醇回流法進(jìn)行提取。本次試驗(yàn)采取三七、紅景天按一定比例混合后用乙醇提取，最后以紅景天苷含量為參考指標(biāo)的方法選擇最佳提取。

1 材料與儀器

1.1 材料 三七；紅景天；紅景天苷對(duì)照品(中國(guó)生物制品檢定所，批號(hào)：110818-200404)；甲醇、乙醇均為分析純；乙腈為色譜純；純水；磷酸。

1.2 儀器 電子天平；循環(huán)水式多用真空泵；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；電子恒溫水浴鍋；高效液相色譜儀(Agilent1101)；色譜柱(ZORBOX 4.6×250nm)；超聲儀 。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 提取

2.1.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用正交實(shí)驗(yàn)法，選定乙醇濃度、提取時(shí)間、提取次數(shù)、料液比作為考察的4個(gè)因素，各取3個(gè)水平(見(jiàn)表1)按照L9(34)正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

表1 因素水平

2.1.2 提取流程工藝設(shè)計(jì) 三七紅景天混合→乙醇回流→合并濾液→濃縮→干燥待測(cè)

2.1.3 提取實(shí)驗(yàn)結(jié)果 按表1選擇因素、水平和提取流程進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 提取實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 流程設(shè)計(jì) 取1 g浸膏→超聲溶解30 min→定容至25 mL→過(guò)濾→濾液待測(cè)。

2.2.2 溶劑選擇 以甲醇作為溶劑。

2.2.3 色譜分析條件 色譜柱ZORBOX 4.6×250 nm。

2.2.4 檢測(cè)波長(zhǎng) 紅景天苷的最大吸收波長(zhǎng)為278 nm，以此作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2.5 流動(dòng)相選擇 進(jìn)樣5 uL，流速1 mL/min的條件下以乙腈水=7∶93，水中加0.05‰磷酸時(shí)的峰型良好，紅景天苷與其他組分達(dá)基線分離。以此作為測(cè)定條件。

2.2.6 標(biāo)注曲線的繪制 精密稱取紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品2.5 mg，甲醇溶解定容至25 mL(C=0.1 mg/mL)。分別進(jìn)樣5、10、15、20、25、30 uL，測(cè)定峰面積，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。見(jiàn)圖1。

圖1 紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2.7 樣品含量測(cè)定 取3份樣品，按設(shè)計(jì)流程重復(fù)3次測(cè)定，計(jì)算平均值。結(jié)果見(jiàn)圖2，圖3及表3。

圖2 紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品HPLC圖

圖3 樣品HPLC圖

表3 3次測(cè)得峰面積

3 結(jié)果和討論

根據(jù)峰面積用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算紅景天苷濃度和含量結(jié)果見(jiàn)表4，表5。

表4 紅景天苷含量

表5 正交試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析

注：Ⅰj、Ⅱj、Ⅲj表示不同因素的三個(gè)水平；R表示極差，既某因素水平之間平均值的最大值與最小值之差。

一個(gè)因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響最大，這個(gè)因素就是最主要因素，在正交表中影響的大小通過(guò)極差類(lèi)反應(yīng)，極差值大，影響也大，反之亦然。從表中計(jì)算結(jié)果來(lái)看，RD>RB>RC>RA因此，影響提取效率的主要因素為回流次數(shù)，其次是回流時(shí)間、料液比，醇濃度的影響最小。在同一因素中，哪一個(gè)水平最好，可以通過(guò)每一個(gè)水平的實(shí)驗(yàn)平均值Ⅰj、Ⅱj、Ⅲj比較來(lái)確定，值最大，水平最好。比較可知ⅢA>ⅡA>ⅠA；ⅢB>ⅠB>ⅡB；ⅡC>ⅢC>ⅠC；ⅢD>ⅡD>ⅠD 。通過(guò)上述分析得最佳工藝組合為AⅢBⅢCⅡDⅢ。即10倍75%的乙醇，回流3次，每次2 h。

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