李鵬，陳琴華，朱軍，彭林

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬東風(fēng)醫(yī)院藥劑部，湖北十堰 442008)

利夫康洗液由苦參、黃柏、蛇床子、白鮮皮、黃連、地膚子、花椒、赤芍、板藍(lán)根、何首烏、土茯苓等11味中藥組成，具有清熱燥濕、殺蟲止癢功效，常用于真菌性、滴蟲性陰道炎以及濕疹、接觸性皮炎和體股癬。蛇床子素是蛇床子中主要有效成分之一，現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)研究證明其具有抗滴蟲作用和性激素樣等作用［1-4］。為了控制該洗液質(zhì)量，筆者對利夫康洗液中的蛇床子素進(jìn)行含量測定，為利夫康洗液質(zhì)量評價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Ultimate3000高效液相色譜儀包括Ultimate3000泵，Ultimate3000二極管陣列檢測器，四元低壓混合系統(tǒng)，Chromeleon工作站;KQ-100DB型數(shù)控超聲波清洗器;HP-01溶劑過濾器;日本島津AEU-210電子天平;TG16G離心儀。

1.2 試藥 蛇床子素(中國藥品生物制品檢定所，批號:110822-20040);甲醇為色譜純，水為雙蒸水，其余溶劑均為分析純;利夫康洗液(西安太極藥業(yè)有限公司，批號:090102，091105，091005)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性條件 色譜柱:日本DLCl8柱(4.6 mm ×150 mm，5 μm);流動相:甲醇-水(65∶35);檢測波長為322 nm;柱溫:30℃;流速:1.0 mL·min-1。理論塔板數(shù)按蛇床子素計(jì)算應(yīng)不低于2 000，主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。

2.2 溶液的制備 對照品溶液的制備:精密稱取蛇床子素對照品10.0 mg置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，得貯備液，精密吸取貯備液1 mL至10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成含蛇床子素為100μg·mL-1的對照品溶液。

供試品溶液的制備:精密吸取利夫康洗液30 mL，水浴鍋中(95℃)揮干，加入30 mL乙醚溶解，過濾，濾液揮干，加入甲醇5 mL，完全溶解，過孔徑0.45μm微孔濾膜，即得供試品溶液。

陰性對照溶液的制備:取按照利夫康洗液的制備工藝配制獨(dú)缺蛇床子的陰性樣品30 mL，照供試品溶液制備方法，制成陰性對照溶液。

2.3 專屬性考察 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液各10μL分別注入高效液相色譜儀，供試品溶液色譜圖上在與對照品溶液相應(yīng)的位置上有一相同的色譜峰。而陰性對照品溶液在此保留時(shí)間無吸收峰，表明陰性對照品對測定無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 3種溶液的高效液相色譜圖1.陰性對照品溶液;B.對照品溶液;C.樣品溶液;1.蛇床子素Fig．1 HPLC Chromatogram s of 3 kinds of solutionA.negative control;B.reference substance;C.sample;1.osthole

2.4 線性關(guān)系和最低檢測限 精密吸取蛇床子素對照品溶液，加甲醇使溶解，稀釋至刻度，使其濃度分別為 2，10，20，50，80，100 μg·mL-1;精密吸取上述溶液各10μL注入高效液相色譜儀，以溶液濃度(X)對峰面積(Y)作線性回歸，得回歸方程為:Y=0.520 5X-0.045 4，r=0.999 5。由上可知，在 2～100 μg·mL-1范圍內(nèi)，蛇床子素濃度與峰面積線性關(guān)系良好。在信噪比(S/N)為3時(shí)，測得最低檢出限為0.05μg·mL-1，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為3.75%。

2.5 精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密度實(shí)驗(yàn):取供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計(jì)算蛇床子素峰面積的RSD為1.52%。

重復(fù)性實(shí)驗(yàn):取同一批樣品6份，按“2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣分析，記錄峰面積，計(jì)算蛇床子素峰面積的RSD為1.63%。

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn):精密吸取同一供試品溶液，于室溫放置12 h，分別在0，2，4，8，12 h 進(jìn)樣測定，記錄峰面積，計(jì)算蛇床子素峰面積的RSD為2.01%。表明處理后所得供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 加樣回收率 取同一供試品(9.70μg·mL-1)6份，分別加入蛇床子素對照品(100μg·mL-1)1.0，2.0，5.0 mL，各2份，按“2.2項(xiàng)”下供試品溶液制備方法制備，并按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣10μL測定，結(jié)果蛇床子素平均回收率99.7%，RSD為1.12%，見表1。

表1 蛇床子素加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab．1 The recovery of osthole μg

2.7 樣品的測定 取本品3批(批號分別為090102，091105，091005)適量，按“2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備3份，精密吸取10μL注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，由外標(biāo)法計(jì)算蛇床子素含量分別為9.70，10.25和8.68μg·mL-1，即利夫康洗液中蛇床子素平均含量為9.54μg·mL-1。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)曾考察了幾種不同的流動相系統(tǒng)［5-6］，最后確定用甲醇-水(65∶35)作為流動相，較乙腈簡單且經(jīng)濟(jì)，蛇床子素與其他成分能達(dá)到基線分離，且理論塔板數(shù)高，所建立利夫康洗液中的蛇床子素的高效液相色譜含量測定方法專屬性強(qiáng)，精密度好，回收率高，適合用于其質(zhì)量評價(jià)。

［1］ 黃良永，鄭江萍，甘春英.獨(dú)活藥材及其配方顆粒中蛇床子素的含量比較［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，29(1):90-91.

［2］ 蘇曉乾，楊建宏.蛇床子素提取工藝優(yōu)化研究［J］.天津藥學(xué)，2009，21(6):3-4.

［3］ 尚飛，王亞俠，陳芳曉，等.正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化蛇床子素的提取工藝［J］.中國藥師，2006，9(7):621-622.

［4］ 劉新，石峰，吳之琳.正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選潔康洗劑提取最佳工藝條件［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，27(5):585-587.

［5］ 周嵩煜，周文梟.高效液相色譜法測定溫腎止痛膏中蛇床子素的含量［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2005，24(6):533-534.

［6］ 石繼連，何群，楊梓懿，等.不同炮制方法對蛇床子中蛇床子素含量的影響［J］.中國藥師，2007，10(1):44-46.