北京市朝陽區(qū)藥品檢驗(yàn)所（100101）許佳 岳福藝

中國藥品生物制品檢定所（100050）孫磊

仙璐貝滴劑系天然植物復(fù)方制劑，主治急慢性鼻竇炎等病，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)尚無專屬性成分的HPLC測定項(xiàng)。建立其主藥馬鞭草中有效成分含測方法對(duì)質(zhì)控有重要意義。中國藥典05版一部采用薄層掃描法測定熊果酸控制馬鞭草質(zhì)量[1]，專屬性和重復(fù)性稍差；2010版改為UV法測定熊果酸和齊墩果酸[2]，待測成分也不專屬；國內(nèi)也有文獻(xiàn)[3][4]采用HPLC法測定馬鞭草中馬鞭草苷，但由于本品成分復(fù)雜，方法不能直接沿用。本試驗(yàn)采用梯度洗脫法，首次建立了該制劑中專屬性成分馬鞭草苷的HPLC測定法，為其質(zhì)控制提供了參考。

1 儀器與試藥

W a t e r s 2 6 9 5 高效液相色譜儀（2996PDA檢測器，Epower2工作站），馬鞭草苷對(duì)照品（Sigma-Aldrich公司，含量≥99.0%），馬鞭草對(duì)照藥材（中國藥品生物制品檢定所，121002-200202），乙腈（色譜純，JT Baker），磷酸、無水乙醇（分析純，北京化工廠），實(shí)驗(yàn)用水為Milli-Q系統(tǒng)制備。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為a g i l e n t T CC18(4.6×2 5 0 m m，5 μ m)，檢測波長240nm，柱溫25℃。以乙腈為流動(dòng)相A，0.3%磷酸水溶液為流動(dòng)相B，梯度洗脫：0→40min，A 7→10%，B 93→90%，流速1.0ml·min-1。理論板數(shù)以馬鞭草苷峰計(jì)為25000，馬鞭草苷與相鄰色譜峰分離度大于1.5。

2.2 對(duì)照品儲(chǔ)備液 精密稱取馬鞭草苷對(duì)照品7.13mg于100ml量瓶中，加60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.3 供試品、對(duì)照藥材和陰性溶液 量取供試品經(jīng)0.45μm濾膜過濾，續(xù)濾液即為供試品溶液。取馬鞭草粉末0.5g，精密加入60%乙醇25ml，振蕩2小時(shí)，經(jīng)0.45μm濾膜過濾，取續(xù)濾液即為對(duì)照藥材溶液。不加馬鞭草，其余照處方及制備工藝處理后，0.45μm濾膜過濾，續(xù)濾液即為陰性溶液。對(duì)照品、對(duì)照藥材、陰性及供試品溶液色譜圖見附圖1。

附圖 HPLC色譜圖

2.4 線性及范圍 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1、2、3、5ml分別于10ml量瓶，加60%乙醇至刻度，搖勻。分別以上溶液和對(duì)照品儲(chǔ)備液各10μl進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程Y=1.3897×106X- 2728.6，相關(guān)系數(shù)r=0.9 9 9 9 8，表明馬鞭草苷在0.0713～0.713μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 取供試品，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后，取續(xù)濾液連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μl，馬鞭草苷峰面積RSD為0.86%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取供試品，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后，取續(xù)濾液即得。按此法制備供試品溶液6份，進(jìn)樣10μl，測定，馬鞭草苷的平均含量為12.77μg·ml-1，RSD為0.52%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后，取續(xù)濾液在24小時(shí)內(nèi)分別進(jìn)樣10μl，馬鞭草苷峰面積RSD為0.95%。

2.8 回收率測定 精密量取供試品5ml于具塞錐形瓶中，再精密加入14.26μg·ml-1的對(duì)照品溶液5ml，搖勻，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后，取續(xù)濾液即得。按此法制備溶液6份，進(jìn)樣10μl，測定，結(jié)果見附表。

2.9 供試品測定 按上法測定3 批供試品，馬鞭草苷含量分別為12.77、11.04和11.03μg·ml-1。

3 討論

本試驗(yàn)使用二極管陣列檢測器，對(duì)馬鞭草苷對(duì)照品溶液進(jìn)行掃描，確認(rèn)其最大吸收波長為240nm。由于供試品成分復(fù)雜，照國內(nèi)文獻(xiàn)[3][4]的等度洗脫條件均無法有效分離。經(jīng)試驗(yàn)，優(yōu)化了正文的梯度條件，達(dá)到了較好效果。制劑采用冷浸提取，且濃度較低，故考慮直接進(jìn)樣。初試結(jié)果表明，靈敏度和分離度達(dá)到定量要求，因此未采取進(jìn)一步的濃縮和凈化。本法減少了檢測成分的損失并簡化了前處理操作，提高了重復(fù)性。本試驗(yàn)還對(duì)色譜柱的耐用性進(jìn)行了考察，使用AKZO NOBEL KR100-5C18kromasil柱（250mm×4.6mm，5μm），分離度良好，表明優(yōu)化的梯度條件有較好的重復(fù)性。

附表 馬鞭草苷加樣回收率