孫紀(jì)發(fā)，王云玲，李具偉

(瑞陽(yáng)制藥有限公司，山東 淄博256100)

瓦松的功能主治為涼血止血，解毒，斂瘡［1］，用于血痢，便血，痔血，瘡口久不愈合，在中國(guó)民間廣泛應(yīng)用于多種疾病.瓦松栓是由瓦松經(jīng)提取制成的純中藥栓劑，具有較強(qiáng)的清熱利濕、活血化瘀、去腐生肌、抗病毒等作用，用于治療細(xì)菌或病毒所引起的宮頸糜爛，效果顯著［2］.槲皮素和山柰素為瓦松栓的主要成分.為了更好地控制制劑質(zhì)量，本文采用高效液相色譜法建立了瓦松栓的含量測(cè)定方法.該方法簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高，可很好的控制本制劑的質(zhì)量.

1 儀器與試藥

1.1 儀器 SHIMADZU LC－20ATVP高效液相色譜儀，SHIMADZU SPD－20AVP檢測(cè)器、METTLER AE240型電子天平.

1.2 試藥 對(duì)照品槲皮素(批號(hào):100081－200406，含量97.3%，中國(guó)藥品生物制品檢定所).對(duì)照品山柰素(批號(hào):110861－200304，含量100%，中國(guó)藥品生物制品檢定所);乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純.

1.3 供試品 來(lái)源:瑞陽(yáng)制藥有限公司.

2 方法與結(jié)果［1］

2.1 色譜條件 色譜柱:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動(dòng)相:乙腈－1.0%鹽酸酸溶液(47∶53);檢測(cè)波長(zhǎng):360 nm;流速:1.0 mL·min－1;進(jìn)樣量:20 μL.

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取槲皮素、山柰素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含槲皮素約12 μg、山柰素約24 μg的混合溶液，即得，色譜圖見(jiàn)圖1.

2.3 供試品溶液的制備 稱取瓦松栓樣品4～6 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入乙腈－25%鹽酸溶液(36∶14)混合溶液50 mL，密塞，稱定重量，置水浴中回流1 h，立即冷卻，再稱定重量，用乙腈補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得，色譜圖見(jiàn)圖2.

圖2 樣品色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取槲皮素與山柰素對(duì)照品適量制成含槲皮素 245 μg·mL－1與山柰素 468.6 μg·mL－1的溶液，精密量取以上溶液各 10 mL、7.5 mL、5 mL、3.75 mL、2.5 mL，分別置100 mL量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，制成溶液(1)、(2)、(3)、(4)、(5)，精密量取以上溶液按色譜條件分別測(cè)定.以峰面積對(duì)相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸處理，得回歸方程為:Y槲皮素=83 691X+93 060，(r=0.990 8);Y山柰素=86 032X+170 741，(r=0.995 2).結(jié)果，槲皮素和山柰素分別在 0.006～0.024 mg·mL－1、0.012 ～0.047 mg·mL－1呈良好的線性關(guān)系.

2.5 精密度試驗(yàn) 精密量取上述對(duì)照品溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，重復(fù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣20 μL，按上述色譜條件測(cè)定，槲皮素和山柰素的平均峰面積分別為:644 356、1 336 897.RSD分別為:0.53%、0.94%，n=5，結(jié)果表明，本方法精密度良好.

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品(08082304批)，按2.3項(xiàng)下的方法制備5份平行樣品，分別測(cè)定，槲皮素的平均含量為0.009 505%，RSD為0.34%;山柰素的平均含量為0.016 48%，RSD為0.55%，表明重復(fù)性良好.

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的供試品溶液，分別于0、1、2、4、6 h測(cè)定，結(jié)果槲皮素和山柰素含量的 RSD分別為0.76% 和0.85%，n=5，表明供試品溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定性良好.

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知槲皮素含量(0.011 18%)與山柰素含量(0.022 51%)的樣品6份，每份約4～6 g，分別精密加入槲皮素對(duì)照品溶液(50 μg·mL－1)與山奈素對(duì)照品溶液(110 μg·mL－1)各 2 mL，按 2.3 項(xiàng)下方法制備供試品溶液.搖勻，測(cè)定，槲皮素的平均回收率為99.91%，RSD為0.67%，山柰素的平均回收率為101.2%，RSD為1.00%.結(jié)果見(jiàn)表1.

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

2.9 樣品測(cè)定與結(jié)果 分別按照2.2、2.3項(xiàng)下操作制備供試品溶液與對(duì)照品溶液，分別精密量取20 μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算.結(jié)果見(jiàn)表2.

3 討論

3.1 曾對(duì)瓦松栓供試品溶液制備的酸量進(jìn)行選擇 分別以乙腈 －25%鹽酸(45∶5)、(40∶10)、(35∶15)、(30∶20)四種混合液進(jìn)行篩選優(yōu)化，最后確定以乙腈－25%鹽酸(36∶14)制備供試品溶液.

3.2 本方法簡(jiǎn)單準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可以作為瓦松栓中槲皮素和山柰素的含量測(cè)定方法.

［1］國(guó)家藥典委員會(huì)，中華人民共和國(guó)藥典2010年版(一部)［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:1.

［2］孫翠清，朱洲華.瓦松栓與婦炎寧治療慢性宮頸炎的臨床療效比較［J］.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2009，14(5):84 －85.