韓 飛，熊 魏，羅嘵健

(1.江西中醫(yī)學(xué)院，江西南昌330004;2.中藥固體制劑制造技術(shù)國家工程研究中心，江西南昌330006)

木香大安丸出自《痘疹世醫(yī)心法》卷十二，全方由木香、連翹、黃連、陳皮、山楂等十一味中藥組成，具有消食導(dǎo)滯、祛熱健脾、緩消平補(bǔ)、不溫不燥等功效，用于治療小兒食滯，頭溫腹熱，噯氣惡食，煩不安眠等病癥臨床效果顯著.經(jīng)劑改成顆粒劑后，具有劑量準(zhǔn)確、穩(wěn)定性強(qiáng)、更適合小兒服用等優(yōu)點(diǎn).由于原方無質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，故本文采用反相高效液相色譜法測定木香大安顆粒中橙皮苷的含量，結(jié)果表明該方法簡便、準(zhǔn)確、分離度好、重現(xiàn)性高，可用于制劑的質(zhì)量控制.

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent－1200高效液相色譜儀:Agilent－1200泵，Agilent－1200－VWD檢測器，Agilent－1200化學(xué)工作站;BSZZ4S型電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司，感量0.001 mg)，Labomed UVS－2800 紫外可見分光光度計(jì)(美國奧然科技有限公司)，超聲儀(KQ5200DA型昆山市超聲儀器有限公司).

1.2 試藥 橙皮苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110721－200211)，乙腈、甲醇為色譜純(天津市永大化學(xué)試劑廠)，冰醋酸、無水乙醇為分析純(天津市博迪化工有限公司)，水為超純水，木香大安顆粒自制，藥材均購自南昌市黃慶仁大藥房，經(jīng)江西中醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)教研室褚小蘭教授鑒定合格.

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Hypersil ODS－2 C18(250 mm×4.6 mm，5 μm，大連依利特公司);流動(dòng)相:乙腈 －6.0%醋酸溶液(79∶21);流速:1.0 mL·min－1;檢測波長:283 nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:20 μL，理論板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000.

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取橙皮苷對照品約9 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻.精密吸取1 mL置5 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得(每 1 mL 含橙皮苷 0.182 3 mg).

2.2.2 供試品溶液的制備 取同一批成品顆粒(批號:20100911)適量，研細(xì)，精密稱取1 g粉末，置100 mL量瓶中，精密加入甲醇定容，密塞，精密稱定重量，超聲處理(200 W，40 kHz)3次，每次20 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足失重，濾過，取續(xù)濾液，即得.

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按供試品的處方比例和制備工藝，制成缺橙皮苷的陰性對照顆粒.取本品1 g，按2.2.2項(xiàng)下方法制成陰性對照溶液，即得.

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液，分別進(jìn)樣20 μL，記錄色譜圖，見圖1.結(jié)果在上述色譜條件下，理論板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000，與相鄰峰分離度大于2，主峰保留時(shí)間9.86 min.陰性對照品色譜圖中，在與對照品色譜圖相對應(yīng)的保留時(shí)間處無色譜峰出現(xiàn).表明制劑中其他成分對橙皮苷的測定無干擾，結(jié)果見圖1.

圖1 三種不同溶液的HPLC圖

2.4 線性關(guān)系考察 精密量取橙皮苷對照品溶液(0.182 3 mg·mL－1)0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 mL，分別置 10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取溶液20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，以橙皮苷對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為:Y=2 016.2X － 24.147，相關(guān)系數(shù):r=0.999 9， 結(jié)果表明，橙皮苷對照品在0.036 3～2.321 9 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好.

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取橙皮苷對照品溶液(0.182 3 mg·mL－1)及供試品溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，依法測定，記錄峰面積，得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為0.78%，1.25%，結(jié)果表明儀器精密度良好.

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 按2.2.2項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，對同一批樣品(批號20100911)6份進(jìn)行測定，橙皮苷平均含量3.056 8 mg·g－1，RSD為0.514%(n=6) ，結(jié)果表明方法重現(xiàn)性良好.

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取成品顆粒適量，研細(xì)，精密稱取粉末1 g，按2.2.2項(xiàng)下制備成供試品溶液，精密吸取同一供試品溶液各 20 μL，分別于制備后 0、2、4、8、12、24 h，依法測定，峰面積的RSD為0.673%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好.

2.8 回收率試驗(yàn) 稱取同一批號的樣品(批號20100911，含量為3.056 8 mg·g－1)0.5 g，共9 份，分成3 組，每組3 份，精密稱定后，第1組每份加入樣品含量80%的橙皮苷對照品，第2組每份加入樣品含量100%的橙皮苷對照品，第3組每份加入樣品含量120%的橙皮苷對照品，按2.2.2項(xiàng)下制備成樣品溶液，依法測定，結(jié)果見表1.

2.9 樣品測定 取三批(20100906、20100925、20101018)樣品，按2.2.2項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，進(jìn)行測定，根據(jù)峰面積計(jì)算橙皮苷的總平均含量為3.070 6 mg·g－1，結(jié)果見表2.

表1 回收率實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果

表2 3批樣品中橙皮苷含量測定結(jié)果

3 結(jié)果與討論

3.1 檢測波長的選擇 參考《中國藥典》［1］2010年版(一部)確定樣品檢測波長為283 nm，在此波長下的基線平穩(wěn)，檢測靈敏度高.

3.2 流動(dòng)相的選擇 查閱相關(guān)文獻(xiàn)［2～5］，本文還考察了以下流動(dòng)相:①甲醇－水(35∶65);②甲醇－1%磷酸水溶液(40∶60);③乙腈－3%醋酸水溶液(25∶75)等，效果均不如本文所采用的流動(dòng)相，在該流動(dòng)相條件下，橙皮苷與其他組分峰能達(dá)到較好分離，保留時(shí)間理想，理論塔板數(shù)高.

3.3 提取方法的選擇 本實(shí)驗(yàn)考察了索式提取、超聲提取、回流提取三種方法，結(jié)果表明索式提取所得橙皮苷含量最高，但提取時(shí)間較長，操作較繁瑣，綜合考慮，選擇超聲提取，操作簡便，提取時(shí)間較短，且橙皮苷含量較高.

3.4 提取溶劑的選擇 本實(shí)驗(yàn)考察了無水乙醇、50%乙醇、50%甲醇、甲醇、純水等提取溶劑，結(jié)果表明采用甲醇提取所得橙皮苷含量最高，故選擇甲醇作為提取溶劑.

本法簡單準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，分離度高，專屬性強(qiáng)，陰性對照無干擾，可有效控制該成品的質(zhì)量.

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2010年版(一部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:758.

［2］鄧桂明，歐陽榮，周新蓓，等.高效液相色譜法測定枳實(shí)中橙皮苷的含量［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2004，14(9):170－173.

［3］陳錫峰，趙春景，錢妍.高效液相色譜法測定舒通顆粒中橙皮苷的含量［J］.中國藥業(yè)，2005，5(12):110－113.

［4］蘇彥斌，張鳳榮，蘇彥文.高效液相色譜法測定止咳寧嗽膠囊中橙皮苷的含量［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2008，3(23):90－93.

［5］郭天義，楊雙杰，張現(xiàn)軍，等.高效液相色譜法測定健胃消食片中橙皮苷的含量［J］.中國藥業(yè)，2004，3(20):211－214.