孫劍經(jīng)，逯 海，姚世媛，張 斌

(河北北方學院附屬第一醫(yī)院，河北張家口075000)

DNA倍體的異常與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的生物學特性密切相關(guān)，腫瘤細胞的DNA含量異常和DNA異倍體的出現(xiàn)已被作為多種實體腫瘤組織良惡性判斷的客觀指標。2008年2月～2009年12月，我們采用流式細胞術(shù)(FCM)對60例食道癌患者(包括癌前病變)和45例食管良性狹窄或胃食管反流病患者的黏膜脫落細胞行DNA倍體分析，同時將倍體分析、內(nèi)鏡檢查、黏膜脫落細胞檢查、X線鋇餐造影檢查結(jié)果分別與食道疾病的臨床及病理確診結(jié)果進行對比，探討DNA倍體分析在診斷食道良惡性疾病中的價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇我院消化科住院經(jīng)臨床病理分析診斷為食道癌(包括癌前病變)的患者60例，(男47例、女13例)，其中Barrett食管上皮內(nèi)瘤變患者11例，食管鱗狀細胞癌術(shù)后放療患者28例，晚期食管癌多發(fā)肝、肺及縱膈轉(zhuǎn)移行保守治療者23例。另選擇消化科門診經(jīng)內(nèi)鏡及上消化道鋇餐造影檢查確診為食管良性狹窄性疾病及胃食管反流病(GERD)患者45例(男18例、女27例)，其中食管賁門失弛緩癥11例、GERD 29例、食管炎所致食管良性狹窄患者5例，診斷明確后半年內(nèi)均隨訪，未見惡性改變。以上所有患者均行內(nèi)鏡檢查、黏膜脫落細胞檢查、X線鋇餐造影檢查及食管黏膜脫落細胞DNA倍體分析。

1.2 主要試劑及儀器 DNA-Preg Regents試劑盒(Beckman Coulter)、流式細胞儀(Epics XL型)為美國BECKMAN-COULTER公司產(chǎn)品，日本奧林巴斯EVIS-240型電子胃鏡，雙腔塑料管線套網(wǎng)氣囊細胞采集器。

1.3 檢查方法 ①所有患者行內(nèi)鏡檢查及X線鋇餐造影，內(nèi)鏡檢查疑惡者作活組織病理檢查以明確診斷。②食管黏膜脫落細胞采集:應(yīng)用線網(wǎng)氣囊雙腔管細胞采集器吞入食管內(nèi)，通過病變段后充氣膨脹氣囊，然后緩緩將氣囊拉出。取套網(wǎng)擦取物涂片作細胞學檢查。③在胃鏡下直接刷取食管可疑病灶黏膜處脫落細胞，先送流式細胞儀進行DNA倍體分析檢查，嚴格按照操作說明書對細胞進行染色，用CellQuest軟件自動獲取5×103細胞/樣品，再用ModFit LT2.0軟件進行分析，同時以正常人外周血淋巴細胞作為正常二倍體標準。

1.4 FCM DNA倍體分析診斷標準 依據(jù)Klein等提出的FCM診斷腫瘤細胞的標準:①出現(xiàn)DNA細胞峰為惡性腫瘤細胞。②如無明顯的非整倍體細胞峰，但有一突出的四倍體細胞峰和大于15%的超二倍體細胞峰(S期細胞)，并伴有G0/G1期的CV值大于9%為惡性腫瘤細胞。③無明顯的非整倍體細胞峰，但G0/G1期的CV值增大，并伴有大于10% ～5%的超二倍體細胞峰和1個突出的四倍體細胞峰，診斷為可疑癌。

1.5 FCM DNA倍體分析結(jié)果判斷 DNA指數(shù)(DI)系樣本G0/G1期細胞與正常二倍體G0/G1期細胞DNA含量峰均值之比。參照國內(nèi)外文獻［1］對脫落細胞DNA倍體作分類:DI=1.0±0.1為二倍體，其余DI值均為異倍體。標本1次以上者，其DI值取數(shù)次結(jié)果中最異常值。

1.6 統(tǒng)計學方法 分別計算各檢查方法對食道惡性疾病的陽性預測值、陰性預測值、敏感性、特異性;最后計算各診斷方法的尤登指數(shù)［2］，尤登指數(shù):YI=敏感性 +特異性 －1'。采用 SPSS 11.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料采用χ2檢驗，以P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

內(nèi)鏡檢查、黏膜脫落細胞檢查、X線鋇餐造影檢查及DNA倍體分析檢查結(jié)果見表1，其在食道良惡性疾病中的尤登指數(shù) YI分別為 0.373、0.555、0.112、0.806，前三者之間比較差異無統(tǒng)計學意義，而DNA倍體分析與前三者比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P ＜0.01)。

表1 2組各檢查方法結(jié)果比較

3 討論

食道癌是危害人類健康的主要腫瘤之一，其早期診斷較為困難，多數(shù)患者確診時已失去根治性切除機會，普通檢查手段如內(nèi)鏡檢查、黏膜脫落細胞檢查、X線鋇餐造影檢查對食道癌的早期診斷，尤其是對Barrett食管上皮內(nèi)瘤變即食管癌前病變患者診斷陽性率較低。而異倍體可能是癌前病變向食管癌轉(zhuǎn)變的重要標志。普通檢查手段對食道良惡性疾病診斷的正確性、陽性預測值、陰性預測值結(jié)果相似，而與DNA倍體分析值卻有明顯差異。尤登指數(shù)是綜合反映診斷價值的指標，常用于比較不同的診斷試驗，值越大，診斷價值越高。本研究結(jié)果顯示DNA倍體分析值高達0.806，與普通檢查手段相比差異均有顯著意義。DNA倍體分析對于評價惡性程度、判斷預后、評價療效是一項重要指標，資料表明實體惡性腫瘤的DNA倍體大多為非整倍體，所有的良性病變都是二倍體［3］。異常的DNA含量不但可作為惡性腫瘤的標志之一，且可反應(yīng)腫瘤的惡性程度及生物學行［4］，倍體腫瘤惡性度低，異倍體腫瘤與腫瘤的低分化或浸潤性有關(guān)。由于FCM的逐漸普及，通過DNA倍體分析對食管鱗狀細胞癌進行診斷、指導治療和判斷預后已成為可能。應(yīng)用食管拉網(wǎng)或內(nèi)鏡等方法進行脫落細胞DNA倍體分析，可早期發(fā)現(xiàn)食管癌或癌前病變，以阻止病情進展，達到二級預防目的，改善食管癌患者的預后;其對檢查食管鱗狀細胞癌術(shù)后患者有無復發(fā)也有一定應(yīng)用前景。

［1］李朋軍，夏潮涌.腫瘤細胞DNA干系倍體分析及其臨床應(yīng)用［J］.中國體視學與圖像分析，2005，10(2):72-76.

［2］鐘征翔，丁韌燁，孫建良，等.膽胰液脫落細胞DNA倍體分析在診斷膽道和胰腺良惡性疾病中的價值［J］.中華檢驗醫(yī)學雜志，2004，27(8):511-513.

［3］Auer G，Eriksson E，Azavedo E，et al.Prognostic significance of nuclear DNA content in mammary adenocarcinomas in humans［J］.Cancer Res，1984，44(1):394-396.

［4］陳獻國，余國偉，鄭昭璟，等.食管脫落細胞DNA分析對食管癌診斷價值的探討［J］.中華腫瘤防治雜志，2009，16(10):758-760.