袁云仙

（廣東省茂名石化醫(yī)院，廣東 茂名 525000）

隨著醫(yī)學(xué)事業(yè)的不斷發(fā)展和進(jìn)步，國(guó)內(nèi)外學(xué)者專家已針對(duì)膽紅素（bilirubin，BR）的干擾機(jī)制及干擾的消除作了大量的研究[1]。一般認(rèn)為，由于血清對(duì)于光的吸收或者散射能夠使反應(yīng)的本底進(jìn)行提升，因此在設(shè)置動(dòng)力學(xué)檢測(cè)試驗(yàn)時(shí)一般不考慮設(shè)空白，但是對(duì)于終點(diǎn)檢測(cè)法卻設(shè)標(biāo)本空白。膽紅素作為內(nèi)源性干擾物，一方面要對(duì)自身的本底吸光度進(jìn)行干擾，另一方面又可以參與整個(gè)反應(yīng)或是存在著自身所發(fā)生的副反應(yīng)。本研究是以膽紅素為主要研究對(duì)象，對(duì)膽紅素本底吸光度的干擾情況進(jìn)行探討，并提出在實(shí)際過(guò)程中要積極地進(jìn)行干擾的消除。

1 資料與方法

1.1 資料

對(duì)茂名石化醫(yī)院門診近1個(gè)月來(lái)的無(wú)藥物治療史者的非抗凝血標(biāo)本進(jìn)行隨機(jī)地采集，為30份（沒(méi)有選擇性，僅僅是通過(guò)隨機(jī)選擇的方式進(jìn)行血樣標(biāo)本的采集，而且選擇樣本之后，運(yùn)用分離的方法對(duì)血清進(jìn)行分離，沒(méi)有檢測(cè)出溶血、脂肪血，因?yàn)檫@兩類物質(zhì)也是對(duì)臨床生化檢驗(yàn)結(jié)果有干擾性的。這就確保了單一變量變化的研究）。膽紅素標(biāo)準(zhǔn)液以及分析檢測(cè)試劑盒均為進(jìn)口，為AR。PCR儀、紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)。

1.2 方法

首先對(duì)上述30份血液樣本進(jìn)行震蕩處理并獲取人工溶血模型；然后在PCR分析儀上對(duì)干擾物的動(dòng)力學(xué)進(jìn)行檢測(cè)分析；運(yùn)用紫外-可見(jiàn)光分光光度法進(jìn)行光譜掃描；運(yùn)用EP7-P方案對(duì)膽紅素進(jìn)行干擾評(píng)價(jià)；最后進(jìn)行數(shù)據(jù)的處理。

2 結(jié) 果

2.1 吸光特性

通過(guò)上述方法的闡述，可以發(fā)現(xiàn)膽紅素在血清溶血中呈現(xiàn)出特異的吸收光譜，其主吸峰為470nm。在溫度為36.5℃的條件下，膽紅素的吸收光譜在10min前后的差值曲線變化為：在主吸收峰470nm的吸光度處有一定的下降，下降的幅度約為3.5%，現(xiàn)將其置于360nm的波長(zhǎng)條件下，其吸光度又呈現(xiàn)出上升的趨勢(shì)。這就說(shuō)明了膽紅素在不同的波長(zhǎng)區(qū)域下，其吸光度值的大小是不同的，而且其差值曲線也是隨著波長(zhǎng)的變化而變化著的。表1為我們所得的血清中血紅蛋白對(duì)常用的組合波長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)分析吸光度的影響結(jié)果。

2.2 干擾分析

膽紅素對(duì)動(dòng)力學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目的干擾如表2所示。

綜合表1和表2可以看出，盡管使用了雙波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，膽紅素的吸光度值本底還是其時(shí)相漂移都不為零，所以雙波長(zhǎng)分析不能消除膽紅素對(duì)臨床分光光度法所產(chǎn)生的干擾[2]。由于動(dòng)力學(xué)檢測(cè)采用吸光度變化率，本底吸光度被自動(dòng)扣除，故膽紅素和血紅蛋白對(duì)動(dòng)力學(xué)檢測(cè)的干擾主要是它們?cè)谌芤褐械牟环€(wěn)定性所發(fā)生變化（表1），而對(duì)終點(diǎn)法的干擾主要來(lái)自其光吸收所產(chǎn)生的本底（表2）。

表1 血清中血紅蛋白對(duì)常用組合波長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)分析吸光度的影響

表2 膽紅素對(duì)動(dòng)力學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目的干擾

3 討 論

3.1 膽紅素吸收譜線漂移的機(jī)制分析

膽紅素吸收曲線的漂移表現(xiàn)在主吸收峰值的降低和470nm附近吸光度的增加。有研究表明，膽紅素吸收曲線的漂移是由于氧化、變構(gòu)（溫度及pH）、變性（多聚體的形成和四聚體的降解）等一系列效應(yīng)所致。由溫度所致的變構(gòu)效應(yīng)是可逆的，然而氧化和變性是不可逆的[3]。在溫度為36.5℃的條件下，膽紅素的吸收光譜在10min前后的差值曲線變化為：在主吸收峰470nm的吸光度處有一定的下降，下降的幅度約為3.5%，現(xiàn)將其置于360nm的波長(zhǎng)條件下，其吸光度又呈現(xiàn)出上升的趨勢(shì)。這就說(shuō)明了膽紅素在不同的波長(zhǎng)區(qū)域下，其吸光度值的大小是不同的，而且其差值曲線也是隨著波長(zhǎng)的變化而變化著的。

3.2 干擾的消除

關(guān)于膽紅素干擾的消除，主要是通過(guò)如下幾個(gè)方面進(jìn)行干擾的消除的：①膽紅素一個(gè)重要的特性就是可以參與或者干擾某些檢測(cè)體系的主反應(yīng)，其作用的機(jī)制也很明確，因此可以將其待定項(xiàng)目的干擾方向報(bào)告給臨床。這些干擾的項(xiàng)目主要包括：AST、TG、UA、LD以及GLU等。②對(duì)血凝分析時(shí)干擾的消除：在血凝分析時(shí)，當(dāng)遇到高濃度的膽紅素樣品時(shí)，其本底濁度必然會(huì)存在。這個(gè)過(guò)程中就犧牲了有效信號(hào)的動(dòng)態(tài)范圍為代價(jià)的，不僅降低了檢驗(yàn)結(jié)果精密度，而且本底濁度過(guò)高掩蓋了標(biāo)本吸光度的變化時(shí)無(wú)法測(cè)出結(jié)果。這時(shí)，可以雙磁路磁珠法進(jìn)行干擾的消除，從而保證了臨床檢驗(yàn)結(jié)果不受膽紅素的干擾，所測(cè)值準(zhǔn)確性大大提高。

[1]程正江.血紅蛋白和膽紅素干擾臨床化學(xué)分析的機(jī)理初探[J].國(guó)外醫(yī)學(xué),2004,25(6):111-112.

[2]郭洪晨.膽紅素對(duì)臨床檢驗(yàn)結(jié)果的干擾及消除[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2009,6(18):98-100.

[3]甄廣懷.不同副波長(zhǎng)消除膽紅素對(duì)血清無(wú)機(jī)磷測(cè)定的干擾[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2006,3(5):321-333.