李曉玉，王 梅，隋 濤，李金強，于 杰

氣相色譜-質(zhì)譜法測定肉及肉制品中的2,4-D-丁酯

李曉玉1，王 梅2，隋 濤1，李金強1，于 杰1

(1.煙臺出入境檢驗檢疫局，山東 煙臺 264000；2.中國科學(xué)院福建物質(zhì)結(jié)構(gòu)研究所，福建 福州 350002)

建立肉及肉制品中2,4-D-丁酯的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測方法。樣品采用乙腈提取，弗羅里硅土柱固相萃取柱凈化，外標法定量。結(jié)果表明：方法添加量為5～100μg/kg時，回收率均大于70%，相對標準偏差為1.0%～3.6%，線性相關(guān)系數(shù)為0.99996，方法的檢出限為5μg/kg。本方法適用于肉及肉制品中2,4- D-丁酯的測定。

2,4-D-丁酯；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用；肉及肉制品

2,4-D-丁酯是一種苯氧羧酸類除草劑[1]，純品為無色油狀液體，熔點169℃，密度1.2428g/cm3，大鼠急性經(jīng)口LD50值為500～1500mg/kg?？诜卸鞠葹橄腊Y狀，然后出現(xiàn)感覺異常、嗜睡、肌肉無力和肌纖維顫動，嚴重者出現(xiàn)抽搐、昏迷、大小便失禁和呼吸衰竭。2,4-D-丁酯由于具有選擇性強、殺草譜廣、用量少、成本低等特點[2]，在我國生產(chǎn)量、使用量和出口量非常大。給人類健康構(gòu)成極大的安全隱患，因而得到了國際社會的廣泛關(guān)注[3]。

據(jù)文獻報道，2,4-D-丁酯的檢測以氣相色譜方法居多，且多數(shù)為檢測蔬菜、糧谷、水果中2,4-D-丁酯的殘留量[4-8]，毒理學(xué)方面的研究報告也較多[9-10]，而以氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)法測定肉及肉制品中2,4-D-丁酯殘留量的文獻未見報道。本實驗以乙腈處理樣品，經(jīng)多種凈化方法的篩選，建立肉及肉制品2,4-D-丁酯的GCMS檢測方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

2,4-D-丁酯標準品(96.5%) 美國Dr. Ehrenstorser GmbH公司；乙腈、正己烷、丙酮均為色譜純；弗羅里硅土(60～80目)，650℃烘烤2h，放置備用。

1.2 儀器與設(shè)備

6890N-5973氣相色譜型質(zhì)譜聯(lián)用儀 美國安捷倫公司；高速組織搗碎機；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；低速離心機(5000r/min)。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件

氣相色譜：DB-35MS彈性石英鍵合毛細管柱(30m× 0.25mm，0.25μm)，程序升溫：初始柱溫60℃，以20℃/min升至250℃，保持3min，再以30℃/min升至280℃，保持1min；進樣口溫度250℃；高純氦氣(純度99.999%)為載氣，流速為1.5mL/min；不分流進樣1μL。

1.3.2 質(zhì)譜條件

電子轟擊(EI)離子源；電子能量70eV；傳輸線溫度280℃；離子源溫度250℃；質(zhì)量掃描范圍m/z 50～500；2,4-D-丁酯m/z 185、162、276。

1.3.32 ,4-D-丁酯的提取

稱取約5g樣品于50mL離心管中，加入5g氯化鈉固體，20mL乙腈，均質(zhì)完全后，5000r/min離心5min，將上清液移入分液漏斗中，離心管中的殘渣用20mL乙腈重復(fù)提取一次，合并提取液于分液漏斗中。

1.3.4 凈化

向分液漏斗中加入80mL乙腈飽和的正己烷，搖勻，靜置分層，將下層液通過無水硫酸鈉，濾入平底燒瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于39℃蒸至1～2mL。

用帶有砂芯墊的300mm×15mm(內(nèi)徑)的玻璃層析柱，依次裝入1cm無水硫酸鈉、5g弗羅里硅土，1cm無水硫酸鈉，先以50mL乙腈預(yù)洗層析柱，棄去預(yù)洗液，再將濃縮液轉(zhuǎn)移至層析柱上進行凈化洗脫，用100mL乙腈淋洗柱子。將淋洗液全部接收至圓底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至1～2mL，氮氣吹干。用丙酮-正己烷混合溶液(1:1，V/V)定容至2mL，供氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取溶劑的選擇

根據(jù)相似相溶原理，先后實驗了乙醚、乙酸乙酯和乙腈作溶劑提取，結(jié)果發(fā)現(xiàn)對于去除基質(zhì)雜質(zhì)和分離度來說，乙醚效果不佳，而乙酸乙酯和乙腈效果均不錯，但是乙腈提取時2,4-D-丁酯的回收率略高于乙酸乙酯，因此最終選擇乙腈作為提取溶劑。

2.2 凈化方法的確定

由2,4-D-丁酯的結(jié)構(gòu)可以看出，其苯氧羧酸的鄰對位各含一個氯原子，極性較強，因此需選用順相柱進行凈化，分別選擇弗羅里硅土柱、離子交換柱Carb柱與NH2柱的混合柱和SAX/PAX柱3種順相柱進行實驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，同時過Carb與NH2兩種柱回收可以達到實驗要求但是靈敏度不及過弗羅里硅土柱效果好；過SAX/ PAX柱產(chǎn)生基質(zhì)干擾導(dǎo)致定量離子m/z 185的基線過高(圖1)。因此最終選擇弗羅里硅土柱對樣品進行凈化。

2.3 方法回收率和精密度實驗

在5g樣品中分別添加相當于5、50、100μg/kg三個水平的2,4-D-丁酯標準溶液，每個水平加標5個樣品，測定5次，檢測結(jié)果見表1。

2.4 檢出限

圖1 提取液過不同色譜柱的色譜圖Fig.1 Chromatographs of sample extract on different columns

表1 回收率及精密度實驗結(jié)果(n=5)Table 1 Results of recovery rate and precision experiments (n=5)

測定檢出限是采用添加法進行實測的情況確定的。在陰性豬肉樣品中添加水平為5μg/kg時，本方法仍可定量檢出，信噪比≥10，其色譜圖見圖2。由此可以確定本方法2,4-D-丁酯的檢出限為5μg/kg。

圖2 陰性豬肉樣品中添加水平為5 μg/kg 2,4-D-丁酯色譜圖Fig.2 Gas chromatogram of negative pork sample spiked with 2,4-D butyl ester at 5 μg/kg

3 結(jié) 論

運用GC-MS測定肉及肉制品中2,4-D-丁酯的殘留量。所建立的方法在5～100μg/kg添加水平下平均回收率為71.7%～101.2%。本方法的檢出限5μg/kg，低于國內(nèi)外制定的2,4-D-丁酯最大殘留限量。線性相關(guān)系數(shù)為0.99996，相對標準偏差不大于3.6%。由此可見，本方法具有回收率穩(wěn)定、靈敏度高、準確度好和簡便快速等特點，適合肉及肉制品中2,4-D-丁酯的測定。

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Determination of 2, 4-D Butyl Ester in Meat and Meat Products by Gas Chromatography-Mass Spectrometry

LI Xiao-yu1，WANG Mei2，SUI Tao1，LI Jin-qiang1，YU Jie1
(1. Yantai Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Yantai 264000, China；2. Fujian Institute of Research on Structure of Matter, Chinese Academy of Sciences, Fuzhou 350002, China)

A gas chromatography-mass spectrometry method was established to determine 2,4-D butyl ester in meat and meat products. Samples were extracted using acetonitrile and purified on florisil solid-phase extraction cartridge, quantified by external standard method. This reliable and stable method exhibited recovery rates of more than 70% at spike levels ranging from 5 to 100μg/kg, relative standard deviations of 1.0%-3.6%, a linear regression coefficient of 0.99996 and a detection limit of 5μg/kg.

2,4-D butyl ester；gas chromatography-mass spectrometry；meat and meat products

O657.63

A

1002-6630(2011)04-0193-03

2010-03-09

李曉玉(1980—)，女，工程師，碩士，研究方向為食品的農(nóng)藥殘留檢測。E-mail：lixiaoyu19802004@163.com