張建榮 席向紅 郭小龍 崔 潔

(寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心 寧夏銀川 750004)

乙肝五項(xiàng)檢測(cè)是檢驗(yàn)科常見(jiàn)的檢測(cè)項(xiàng)目，目前國(guó)內(nèi)大多應(yīng)用酶免疫(EIA)測(cè)定，然而其方法固有的缺點(diǎn)在一定程度上給臨床診治帶來(lái)了困難[1]。隨著近年來(lái)檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展，電化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)以其快速、簡(jiǎn)便、無(wú)污染、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)得以廣泛應(yīng)用。由于乙肝表面抗原(HBsAg)屬于定性檢測(cè)項(xiàng)目，因此，我們?cè)谏陥?bào) ISO15189 認(rèn)可時(shí)，參照相關(guān)文獻(xiàn)[2，3]對(duì)Roche E－170檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定HBsAg進(jìn)行了批內(nèi)重復(fù)性、批間重復(fù)性、臨界值驗(yàn)證、陽(yáng)性符合率、陰性符合率的性能驗(yàn)證及評(píng)價(jià)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 收集本院臨床新鮮血清標(biāo)本低、高兩個(gè)濃度水平用于批內(nèi)重復(fù)性測(cè)定，另取低、高兩個(gè)濃度水平控制品用于批間重復(fù)性測(cè)定。準(zhǔn)備臨界值+20%濃度樣本、臨界值－20%濃度樣本，用于臨界值驗(yàn)證。選取本院患者血清標(biāo)本乙肝表面抗原陽(yáng)性31人份;另選取本院患者，乙肝表面抗原陰性血清標(biāo)本20人份，衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)(EQA)回報(bào)結(jié)果，用于陽(yáng)性符合率、陰性符合率驗(yàn)證。

1.2 試劑與儀器 德國(guó)Roche170全自動(dòng)免疫分析儀(電化學(xué)發(fā)光法，ECLIA)及配套試劑盒、質(zhì)控品、耗材等。

1.3 結(jié)果計(jì)算 臨界值(cutoff)由陰性和陽(yáng)性定標(biāo)品測(cè)定光信號(hào)值(RLU)計(jì)算得出，標(biāo)本結(jié)果用標(biāo)本光信號(hào)值 /cutoff光信號(hào)值進(jìn)行報(bào)告。結(jié)果報(bào)告≥1.00 COI(cutoffindex)為陽(yáng)性，＜1.00 COI為陰性(儀器自動(dòng)計(jì)算以上結(jié)果)。

1.4 方法

1.4.1 批內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn)。取低、高2個(gè)濃度血清標(biāo)本進(jìn)行評(píng)價(jià)試驗(yàn)，連續(xù)重復(fù)測(cè)定20次，計(jì)算變異系數(shù)(CV)，結(jié)果與廠商說(shuō)明書(shū)給定的參數(shù)比較，若在給定的允許范圍內(nèi)，批內(nèi)重復(fù)性性能符合要求。

1.4.2 批間重復(fù)性試驗(yàn)。取低、高2個(gè)濃度水平控制品連續(xù)重復(fù)測(cè)定20天，每天1次，計(jì)算變異系數(shù)(CV)。結(jié)果與給定的允許總誤差比較，若在給定的允許范圍內(nèi)，批間重復(fù)性性能符合要求。

1.4.3 臨界值驗(yàn)證。準(zhǔn)備臨界值+20%濃度樣本、臨界值－20%濃度樣本，分別重復(fù)測(cè)定20次，計(jì)算陰、陽(yáng)性率。臨界值+20%濃度的標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率≥95%，同時(shí)，臨界值－20%濃度標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果陰性率≥95%則符合要求。

1.4.4 陽(yáng)性符合率、陰性符合率評(píng)價(jià)。選取HBsAg檢測(cè)陽(yáng)性和陰性的血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果與原結(jié)果進(jìn)行比較，分別計(jì)算符合率，若符合率≥95%則符合要求。

1.4.5 以2010年衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心的3次感染性疾病血清標(biāo)志物A類(lèi)室間質(zhì)評(píng)為標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)每次5個(gè)標(biāo)本的HBsAg回報(bào)結(jié)果與預(yù)期結(jié)果進(jìn)行符合性統(tǒng)計(jì)，計(jì)算符合率，若EQA結(jié)果符合率≥80%則符合要求。

2 結(jié)果

2.1 批內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn) 批內(nèi)CV應(yīng)≤廠商說(shuō)明書(shū)給定的參數(shù)。檢測(cè)項(xiàng)目的CV分別為7.3%和0.6%，均小于給定的允許范圍，表明驗(yàn)證的檢測(cè)系統(tǒng)批內(nèi)重復(fù)性符合要求，重復(fù)性好。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 批間重復(fù)性試驗(yàn) 批間CV應(yīng)≤1/3允許總誤差，兩個(gè)水平控制品的CV分別為9.6%和4.9%，均小于給定的允許范圍，表明驗(yàn)證的檢測(cè)系統(tǒng)批間重復(fù)性符合要求，重復(fù)性好。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 乙肝HBsAg檢測(cè)的批內(nèi)重復(fù)性和批間重復(fù)性結(jié)果

2.3 臨界值驗(yàn)證 臨界值+20%濃度的標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率為100%，臨界值－20%濃度標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果陰性率為100%，均大于判斷標(biāo)準(zhǔn)(≥95%)，檢測(cè)結(jié)果符合要求。說(shuō)明試劑生產(chǎn)廠家提供的檢測(cè)項(xiàng)目臨界值基本可靠，在此區(qū)間內(nèi)標(biāo)本能得到穩(wěn)定的檢測(cè)結(jié)果。

2.4 陽(yáng)性符合率、陰性符合率評(píng)價(jià) HBsAg陽(yáng)性符合率為100%，陰性符合率為100%，均大于判斷標(biāo)準(zhǔn)(≥95%)，檢測(cè)結(jié)果符合要求。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.5 對(duì)衛(wèi)生部臨檢中心2010年的3次質(zhì)評(píng)回報(bào)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，符合率為100%。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 乙肝HBsAg陽(yáng)性符合率、陰性符合率的檢測(cè)結(jié)果

3 討論

HBsAg是乙肝病毒感染后最早出現(xiàn)的血清標(biāo)志物之一，因此HBsAg的檢測(cè)是診斷肝炎病毒感染的重要依據(jù)。診斷中最重要的就是高靈敏度與高特異性相結(jié)合，故檢測(cè)系統(tǒng)的性能指標(biāo)能否滿足臨床檢測(cè)的要求會(huì)影響臨床診療的效果。定性檢測(cè)性能的評(píng)估主要通過(guò)重復(fù)性研究和方法間比較來(lái)評(píng)估檢測(cè)方法的性能[3]。而Roche E－170檢測(cè)系統(tǒng)具有卓越的分析靈敏、高臨床靈敏度和特異性[4]。

定性檢測(cè)的重復(fù)性研究能夠評(píng)估檢測(cè)方法的精密度，而精密度是檢驗(yàn)項(xiàng)目測(cè)定中最基本的性能指標(biāo)，我們檢測(cè)的批內(nèi)重復(fù)性和批間重復(fù)性的CV值均小于規(guī)定的允許范圍，性能符合要求。

定性試驗(yàn)用陰、陽(yáng)性符合率來(lái)評(píng)價(jià)結(jié)果的準(zhǔn)確度，我們使用2010年衛(wèi)生部臨檢中心的3次感染性疾病血清標(biāo)志物A類(lèi)室間質(zhì)評(píng)回報(bào)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，符合率為100%。同時(shí)我們對(duì)選取的HBsAg陽(yáng)性(包括臨界弱陽(yáng)性標(biāo)本)和陰性血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，陽(yáng)性、陰性符合率均為100%，檢測(cè)性能符合要求，說(shuō)明該檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性較好，能夠滿足臨床診療的需求。

臨界值是指實(shí)驗(yàn)結(jié)果處于陰、陽(yáng)性分界點(diǎn)時(shí)的樣本中分析物濃度值，低于該值判斷為陰性結(jié)果，高于該值判斷為陽(yáng)性結(jié)果，對(duì)于定性試驗(yàn)，臨界值是一個(gè)醫(yī)學(xué)決定水平。定性試驗(yàn)的臨界值直接決定了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的檢出率，因此必須對(duì)廠家提供的臨界值進(jìn)行驗(yàn)證。本實(shí)驗(yàn)室HBsAg±20%濃度水平的樣本位于臨界值95%區(qū)間內(nèi)，結(jié)果說(shuō)明試劑生產(chǎn)廠家提供的檢測(cè)項(xiàng)目臨界值基本準(zhǔn)確。

綜上所述，通過(guò)對(duì)HBsAg的批內(nèi)重復(fù)性、批間重復(fù)性、臨界值驗(yàn)證、陽(yáng)性符合率、陰性符合率的評(píng)價(jià)和分析，證實(shí)該檢測(cè)系統(tǒng)的性能卓越，具有高靈敏度和高特異性，能夠滿足臨床檢測(cè)的要求。

[1]周迎春，陳 輝，關(guān) 平，等.3種方法測(cè)定低濃度乙型肝炎病毒表面抗原效果評(píng)價(jià)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2007，11(4):1070 －1071

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