張潤(rùn)林

（山西省太原市陽(yáng)曲縣疾病預(yù)防控制中心，山西 太原 030100）

艾滋病是一種危害人類生命健康的傳染病，目前已成為全球關(guān)注的公共衛(wèi)生和社會(huì)問(wèn)題，要了解和掌握HIV的感染情況，關(guān)鍵就是實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)技術(shù)，新的監(jiān)測(cè)和檢測(cè)需求在不斷增加，而HIV抗體的檢測(cè)可作為對(duì)HIV感染者診斷和監(jiān)測(cè)的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)，也是目前獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）診斷中最常用的方法，因此，提高實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的準(zhǔn)確性，減少假陽(yáng)性和假陰性反應(yīng)的發(fā)生，對(duì)診斷艾滋病十分重要，應(yīng)用HIV抗體質(zhì)控血清是對(duì)艾滋病初篩實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行全面質(zhì)量評(píng)價(jià)的重要手段，現(xiàn)將本實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行HIV室內(nèi)質(zhì)量控制的程序介紹如下。

1 試劑來(lái)源

1.1 外部對(duì)照質(zhì)控血清

衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心試劑部提供的GBW（E）090050抗HIV 2NCU/mL并嚴(yán)格按照《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》2009年修訂版[1]制備或購(gòu)買弱陽(yáng)性對(duì)照血清（該試劑盒臨界值的2～3倍）、分裝保存。

1.2 HIV診斷試劑盒

由省級(jí)HIV實(shí)驗(yàn)室提供，由珠海麗珠試劑股份有限公司生產(chǎn)的試劑，所用試劑盒及內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控血清均在有效期內(nèi)使用。

2 實(shí)驗(yàn)室設(shè)備校準(zhǔn)

2.1 北京普朗新技術(shù)有限公司制造的全自動(dòng)ZMX-988B酶標(biāo)洗板機(jī)

本實(shí)驗(yàn)室根據(jù)計(jì)量認(rèn)證質(zhì)量手冊(cè)的要求，經(jīng)省技術(shù)監(jiān)督監(jiān)測(cè)中心定期校準(zhǔn)（每年至少1次）。嚴(yán)格按照作業(yè)指導(dǎo)書(shū)操作規(guī)程進(jìn)行自校準(zhǔn)檢查。每個(gè)工作日應(yīng)檢查洗板機(jī)管道是否通暢，是否有漏液現(xiàn)象，定期（每月至少1次）檢查洗滌時(shí)各孔是否與相應(yīng)的沖洗頭對(duì)位良好，負(fù)壓是否符合規(guī)定要求，并保留記錄。

2.2 上海博訊實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn)的SSW型電熱恒溫水槽

調(diào)節(jié)并控制溫度在（37±2）℃。每個(gè)工作日檢查記錄水浴箱溫度，并做好記錄。使用經(jīng)過(guò)計(jì)量部門校準(zhǔn)合格的溫度計(jì)測(cè)量。

2.3 BIORAD Model 680型酶標(biāo)儀、上海精益醫(yī)學(xué)儀器廠生產(chǎn)的可調(diào)微量移液器

均經(jīng)省技術(shù)監(jiān)督監(jiān)測(cè)中心檢定合格。酶標(biāo)儀根據(jù)儀器內(nèi)具有的校準(zhǔn)程序或使用校準(zhǔn)板，對(duì)濾光片的精密度進(jìn)行校準(zhǔn)，并在檢定周期1年內(nèi)使用，每個(gè)工作日核對(duì)濾光片波長(zhǎng)，對(duì)其檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行不確定度分析，從而確保其具有良好的重復(fù)性和線性范圍。移液器嚴(yán)格按照質(zhì)量手冊(cè)中作業(yè)指導(dǎo)書(shū)的操作規(guī)程定期進(jìn)行校準(zhǔn)，每年至少校準(zhǔn)一次，發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)隨時(shí)進(jìn)行校準(zhǔn)，其精密度應(yīng)在廠家說(shuō)明書(shū)規(guī)定的范圍內(nèi)。

3 操 作

3.1 嚴(yán)格按照作業(yè)指導(dǎo)書(shū)的操作規(guī)程進(jìn)行操作。加入樣品量要準(zhǔn)確，不得混入血細(xì)胞，同時(shí)按照試劑說(shuō)明書(shū)操作步驟每板設(shè)空白對(duì)照1孔（不加任何液體）、陰性對(duì)照3空、陽(yáng)性對(duì)照2孔，質(zhì)控弱陽(yáng)性對(duì)照血清1孔；嚴(yán)格掌握溫育時(shí)間，以免影響結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確性；置自動(dòng)洗板機(jī)上洗滌，洗板時(shí)應(yīng)保證洗板機(jī)管路暢通，加液量均勻；不得隨意加減洗板次數(shù)（洗板次數(shù)少出現(xiàn)假陽(yáng)性，洗板次數(shù)多又會(huì)使臨界弱陽(yáng)性變成陰性而漏檢）；拍板（以墊紙不濕為宜）；在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)置于酶標(biāo)儀讀數(shù)，雙波長(zhǎng)450/630nm測(cè)OD值。檢測(cè)結(jié)果正常情況下陽(yáng)性對(duì)照 OD值≥0.8，陰性對(duì)照OD值≤0.12，若實(shí)驗(yàn)結(jié)果不符合這些要求，就應(yīng)檢查原因并重新進(jìn)行檢測(cè)。不同批號(hào)試劑不得混用。

3.2 每一次實(shí)驗(yàn)必須使用室內(nèi)質(zhì)控品，以便監(jiān)控實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。對(duì)于我們基層HIV初篩實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō)，由于不是每天進(jìn)行HIV抗體的檢測(cè)，對(duì)外部質(zhì)控血清在常規(guī)條件下連續(xù)檢測(cè)20次繪制出質(zhì)控圖后才能進(jìn)入質(zhì)控狀態(tài)有很大難度，因此，我們采用了“即刻法”質(zhì)控，即在對(duì)同一外部質(zhì)控血清連續(xù)測(cè)定3次后，即可對(duì)第3次測(cè)定結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控，從而來(lái)保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

3.3 室內(nèi)質(zhì)控是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部對(duì)所有影響檢測(cè)質(zhì)量的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行系統(tǒng)控制，以提高日常檢測(cè)工作前后的一致性。該質(zhì)量控制主要通過(guò)質(zhì)控圖來(lái)實(shí)現(xiàn)，在ELISA法檢測(cè)HIV試驗(yàn)中，從第3次開(kāi)始就可以對(duì)每次測(cè)定的外部質(zhì)控血清值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，算出每次的SI上限值與SI下限值，查SI值表[1]，當(dāng)SI上限值與SI下限值＜N2s時(shí)，表示該數(shù)據(jù)處于控制范圍之內(nèi)，結(jié)果可靠可以繼續(xù)測(cè)定；當(dāng)SI上限值與SI下限值處于N2s與N3s之間時(shí)，表示該數(shù)據(jù)處于2s～3s范圍，處于“告警”狀態(tài)；當(dāng)SI上限值與SI下限有一值＞N3s時(shí)，表示該數(shù)據(jù)已在3s范圍之外，屬于“失控”狀態(tài)，應(yīng)重新測(cè)定該批樣品。實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)告警或失控狀態(tài)時(shí)，應(yīng)予注意，并及時(shí)分析原始數(shù)據(jù)及對(duì)具體檢驗(yàn)過(guò)程進(jìn)行回顧性分析，可能是系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差或外部質(zhì)控品穩(wěn)定性下降所致。查找出問(wèn)題發(fā)生的原因，找出解除問(wèn)題的方法后再繼續(xù)進(jìn)行測(cè)定。

4 影響因素分析

4.1 “即刻法”室內(nèi)質(zhì)控是適宜于基層初篩HIV實(shí)驗(yàn)室使用的一種較好的室內(nèi)質(zhì)量控制方法。為更好地做好室內(nèi)質(zhì)量控制，最好有專人負(fù)責(zé)質(zhì)量控制，制定質(zhì)量保證文件；篩查試劑必須經(jīng)食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)、批檢合格在有效期內(nèi)的試劑，建議長(zhǎng)期和穩(wěn)定地使用一種敏感性和特異性高的試劑盒，如更換不同廠家的試劑盒或改用新批號(hào)試劑盒應(yīng)重新制作質(zhì)控圖，且使用新批號(hào)或不同廠家的試劑盒必須在質(zhì)控圖上注明使用日期。另外，更換檢測(cè)人員及更換包裝的外部對(duì)照質(zhì)控物必須重新繪制質(zhì)控圖。每次測(cè)定時(shí)，試劑盒及外部質(zhì)控血清從冰箱取出后均應(yīng)在室溫下（18～23℃）平衡30min再使用；購(gòu)買來(lái)的外部對(duì)照質(zhì)控血清不能反復(fù)凍融，應(yīng)按實(shí)際實(shí)驗(yàn)用量分裝、分類、標(biāo)記、封口、-20℃凍存于自動(dòng)除霜冰箱中。一旦溶解，應(yīng)儲(chǔ)存于2～8℃的冰箱內(nèi)，并且每次使用前應(yīng)充分混勻。

4.2 室內(nèi)質(zhì)量控制是通過(guò)使用內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控血清和外部對(duì)照質(zhì)控血清來(lái)進(jìn)行質(zhì)量控制。試劑盒內(nèi)部對(duì)照用于判斷每次實(shí)驗(yàn)的有效性，內(nèi)部對(duì)照結(jié)果無(wú)效，必須重新試驗(yàn)。質(zhì)控弱陽(yáng)性對(duì)照血清是為了監(jiān)控檢測(cè)的重復(fù)性和穩(wěn)定性而設(shè)置的，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的2～3倍為宜。每一次實(shí)驗(yàn)都必須使用外部對(duì)照質(zhì)控血清，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，質(zhì)控物的管間或瓶間變異必須小于監(jiān)測(cè)系統(tǒng)預(yù)期的變異（cv＜20%），確定其在允許范圍內(nèi)，方可發(fā)出標(biāo)本檢測(cè)報(bào)告，這樣做可使檢測(cè)者及時(shí)分析質(zhì)量控制圖中出現(xiàn)的各種原因，以采取相應(yīng)措施。4.3 出現(xiàn)以下問(wèn)題，存在質(zhì)量隱患，應(yīng)引起重視：內(nèi)盒或試劑盒的物理?yè)p傷；在單包裝內(nèi)存在混雜物質(zhì)；標(biāo)簽出現(xiàn)錯(cuò)誤、缺失或字跡模糊[特別是產(chǎn)品名稱或出產(chǎn)廠家名稱，批號(hào)和貨號(hào)，失效期和（或）生產(chǎn)日期]；泄露或污染；不適宜的存放條件等。

4.4 引起室內(nèi)質(zhì)控失控的原因很多。如儀器設(shè)備未經(jīng)檢定、校準(zhǔn)或測(cè)試、使用新批號(hào)和不同廠家的試劑及試劑接近失效期、購(gòu)買不同廠家的外部質(zhì)控品及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)血清反復(fù)凍融、孵育時(shí)間和溫度不準(zhǔn)確、更換新的檢驗(yàn)人員等，此時(shí)要及時(shí)查找原因并予以糾正。

4.5 通常把臨界值上下10%的范圍定為檢測(cè)結(jié)果灰區(qū)。對(duì)于檢測(cè)過(guò)程中出現(xiàn)的灰區(qū)標(biāo)本均應(yīng)進(jìn)行重復(fù)測(cè)試，以減少假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果的出現(xiàn)，并對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果和過(guò)程進(jìn)行記錄存檔。

4.6 質(zhì)量控制是監(jiān)視全過(guò)程，排除誤差，防止變化，維持標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀的一個(gè)管理過(guò)程。要做好實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量保證，單純靠室內(nèi)質(zhì)控是不行的，還要有行政支持，保證實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和主要技術(shù)人員隊(duì)伍的穩(wěn)定，檢測(cè)技術(shù)人員需經(jīng)上崗培訓(xùn)和在崗持續(xù)培訓(xùn)。還要建立健全實(shí)驗(yàn)室的各項(xiàng)規(guī)章制度，掌握質(zhì)量控制知識(shí)，保證標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量等全過(guò)程的質(zhì)量控制，并參加艾滋病確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室職能工作考核和能力驗(yàn)證，從而提高檢驗(yàn)質(zhì)量。

[1]中國(guó)疾病預(yù)防控制中心.全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范(2009年修訂版)[S].2009.