李就文 陳昌達(dá) 陳超群

(廣東省東莞市常平醫(yī)院檢驗(yàn)科 廣東東莞 523573)

微柱凝膠檢測(cè)在新生兒溶血性疾病中的臨床應(yīng)用

李就文 陳昌達(dá) 陳超群

(廣東省東莞市常平醫(yī)院檢驗(yàn)科 廣東東莞 523573)

目的 探討微柱凝膠試驗(yàn)(MGT)技術(shù)在新生兒溶血病(HDN)中的應(yīng)用。方法 采用微柱凝膠試驗(yàn)技術(shù)對(duì)189例疑為HDN的高膽紅素患兒做“溶血三項(xiàng)試驗(yàn)”,即:(1)紅細(xì)胞抗球蛋白試驗(yàn);(2)抗體放散試驗(yàn);(3)血清游離抗體試驗(yàn)。結(jié)果 A型與B型2組患兒(母親O型)HDN檢驗(yàn)結(jié)果比較,2組HDN陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 MGT具有敏感度高,特異度顯著,操作簡(jiǎn)便,耗時(shí)40m in左右,標(biāo)本用量少,結(jié)果易判定等優(yōu)點(diǎn),值得臨床推廣應(yīng)用。

微柱凝膠試驗(yàn)技術(shù) 新生兒溶血病

新生兒溶血病又稱母子血型不合溶血病,是母親對(duì)胎兒紅細(xì)胞發(fā)生同種免疫反應(yīng)引起的溶血性疾病,RH血型和ABO血型不符都能引起這種疾病,但前者引起的比較嚴(yán)重,是新生兒病理性黃疸最常見(jiàn)的原因,也是引起新生兒高膽紅素的最重疾病,目前已發(fā)現(xiàn)26個(gè)血型系統(tǒng),160種血型抗原,在我國(guó)以ABO血型不合溶血病發(fā)生率最高,RH血型不合溶血病發(fā)生較少,但Rh溶血臨床表現(xiàn)比ABO血型不合溶血病重。MN溶血最為罕見(jiàn)。為了解微柱凝膠試驗(yàn)在新生兒溶血性疾病中的應(yīng)用,本研究采用MGT對(duì)189例疑為HDN的高膽紅素患兒進(jìn)行了檢測(cè),收到良好效果,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

189例疑為新生兒溶血病高膽紅素患兒均來(lái)自我院新生兒科自2009年9月至今的住院病人,出生10d內(nèi)的患兒為A型或B型,母親為O型。

1.2 儀器與試劑

(1)儀器:TD-3A型血型血清學(xué)多用離心機(jī)與FYQ免疫微柱孵育器(均由長(zhǎng)春博研科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn))。MATIC ⅡKA-200血庫(kù)專用離心機(jī)(日本KUBOTA公司)。(2)試劑:新生兒溶血病血型不完全抗體檢測(cè)卡(微柱凝膠檢測(cè)卡)和6%小牛血清(均由長(zhǎng)春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供)。標(biāo)準(zhǔn)ABO紅細(xì)胞(上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供)。試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.3 方法

表1 189例A型和B型2組患兒HDN檢測(cè)結(jié)果的比較

取患兒的壓積紅細(xì)胞洗滌3遍,制成0.5%～1%的紅細(xì)胞懸液備用。(1)直抗試驗(yàn):取Coombs卡1張,于一孔內(nèi)加入患者1%紅細(xì)胞懸液50μL,將卡放入專用離心機(jī)上離心5min后判讀結(jié)果。(2)游離試驗(yàn):取Coombs卡1張,分別標(biāo)記A、B、O,各加入1%A、B、O型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液50μL,再各加入乙二胺四乙酸二鉀抗凝的患兒血漿50μL,將此卡放入37℃專用孵育器孵育15m in,離心5m in后判讀結(jié)果。(3)熱放散試驗(yàn):取Coombs卡1張,分別標(biāo)記A、B、O,各加1%A、B、O型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液50μL,再各加入紅細(xì)胞放散液50μL,將此卡放入37℃專用孵育器孵育15m in,離心5m in后判讀結(jié)果。

1.4 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

3項(xiàng)試驗(yàn)以出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性(位于凝膠表面或凝膠中),紅細(xì)胞沉降到底部即為陰性。(1)游離和放散試驗(yàn)均以檢出可以和新生兒紅細(xì)胞反應(yīng)的抗體為陽(yáng)性。(2)單項(xiàng)放散試驗(yàn)陽(yáng)性及其他項(xiàng)目陽(yáng)性同時(shí)合并放散試驗(yàn)陽(yáng)性的結(jié)果均可判定為HDN陽(yáng)性。(3)直抗及游離試驗(yàn)2項(xiàng)同時(shí)陽(yáng)性可判定為HDN陽(yáng)性。(4)直抗或游離試驗(yàn)1項(xiàng)陽(yáng)性可疑為HDN。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所得數(shù)據(jù)采用卡方檢驗(yàn)方法,利用SPSS 14.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì),結(jié)果P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

189例高膽紅素患兒與其母均為ABO血型不合,即母親血型均為O型,RH(D)陽(yáng)性。母親血清中ABO血型以外抗體篩查均為陰性。其中母-嬰血型為OA者為96例,OB者為93例。采用MGT進(jìn)行溶血3項(xiàng)檢測(cè)證實(shí)為HDN者為152例,陽(yáng)性率為80.42%。母-嬰OA型和OB型2組溶血3項(xiàng)試驗(yàn)比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P均>0.05,見(jiàn)表1。

3 討論

隨著中國(guó)新生兒免疫學(xué)的進(jìn)步,已經(jīng)完全改變了過(guò)去認(rèn)為新生兒溶血病罕見(jiàn)的看法。過(guò)去未認(rèn)識(shí)本病病因時(shí),曾稱其為“胎兒全身性水腫”、“胎兒有核紅細(xì)胞增多癥”、“先天性新生兒重癥黃疸”、“新生兒溶血癥”等?，F(xiàn)在明確了解其發(fā)病機(jī)理而不是癥狀,故已統(tǒng)一命名為“新生兒溶血病”。新生兒溶血病(HDN)是指母嬰血型不合引起的新生兒免疫性溶血性疾病。在我國(guó)最常見(jiàn)于ABO血型系統(tǒng)不合,其次RH血型系統(tǒng)不合。HDN的發(fā)病主要原因是新生兒溶血病是因胎兒紅細(xì)胞具有從父親遺傳而來(lái),而又為母親紅細(xì)胞所缺乏的抗原,此種紅細(xì)胞血型抗原在胎兒時(shí)期進(jìn)入母體,刺激母體產(chǎn)生相應(yīng)的血型抗體,此種血型抗體中的IgG抗體透過(guò)胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)與胎兒紅細(xì)胞抗原產(chǎn)生抗原抗體反應(yīng),破壞胎兒紅細(xì)胞而引起新生兒溶血病。病情的嚴(yán)重程度不同,重者可在宮內(nèi)死亡,臨床上可根據(jù)“溶血3項(xiàng)試驗(yàn)”,即紅細(xì)胞抗球蛋白試驗(yàn)、抗體放散試驗(yàn)和血清游離抗體試驗(yàn)做出診斷[1]。RH新生兒溶血病因孕婦和胎兒的RH血型不符而引起的疾病。若孕婦為RH (-),胎兒為RH(+)(有D抗原),當(dāng)孕婦第一胎分娩胎盤剝離時(shí),胎兒的紅細(xì)胞進(jìn)入母體會(huì)刺激母體產(chǎn)生抗D抗體(IgG)?？笵抗體在母體懷第二胎時(shí)可通過(guò)胎盤進(jìn)入胎兒,與胎兒的紅細(xì)胞結(jié)合,引起胎兒發(fā)生溶血病。ABO新生兒溶血病因孕婦與胎兒ABO血型不符而引起的疾病。多見(jiàn)于O型孕婦,尤其多見(jiàn)于O型孕婦和A型胎兒。由于天然的抗A或抗B抗體(IgM)的分子大,不能通過(guò)胎盤進(jìn)入胎兒血循環(huán),而母親為O型者比A型或B型人更容易產(chǎn)生抗A或抗B的IgG抗體,IgG抗體則能通過(guò)胎盤進(jìn)入胎兒血循環(huán),引起胎兒發(fā)生溶血病。A或B抗原也與部分抗A或抗B抗體發(fā)生作用,而且抗A的量高于抗B。但這類病例不多,病情也比較輕,加以胎兒血管內(nèi)皮和組織細(xì)胞上有血型抗原,可部分吸收對(duì)應(yīng)抗體,以減少抗體對(duì)紅細(xì)胞的破壞。ABO血型的“天然”抗體主要是IgM類,但也有IgG類,后者有引起新生兒溶血病的可能[2～5]。微柱凝膠試驗(yàn)技術(shù)(MGT)是一種新的改良抗球蛋白試驗(yàn)技術(shù),在國(guó)外輸血領(lǐng)域已逐步作為常規(guī)應(yīng)用。采用MGT做HDN檢測(cè),對(duì)提高ABOHDN的診斷率有實(shí)際意義。本研究采用MGT法檢測(cè)189例ABO血型不合的新生兒標(biāo)本。母-嬰血型OA者96例,檢出HDN陽(yáng)性率為82. 29%;O-B者為93例,HDN陽(yáng)性率為78.49%。2組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P均>0.05。說(shuō)明ABO HDN的發(fā)生率與嬰兒A、B血型無(wú)關(guān),在ABO血型中呈正態(tài)分布。另處,母親血清中ABO血型以外抗體篩查均為陰性,未發(fā)現(xiàn)RHHDN,可能與檢測(cè)的病例較少有關(guān)。MGT作為一項(xiàng)十分必要的檢測(cè)手段,具有敏感度高,特異度顯著,操作簡(jiǎn)便,耗時(shí)40分鐘左右,標(biāo)本用量少,結(jié)果易判定等優(yōu)點(diǎn),對(duì)臨床早期診斷早期治療母嬰ABO血型不合引起的新生兒溶血病提供了重要的參考依據(jù),應(yīng)廣泛應(yīng)用于臨床。

[1]宋繼軍,趙鼎,岳曉紅.微柱凝膠檢測(cè)新生兒溶血病的使用[J].臨床醫(yī)學(xué),2009,29(5):86～87.

[2]張旭,彭獻(xiàn),劉雄偉,等.微柱凝膠檢測(cè)技術(shù)在新生兒溶血篩查試驗(yàn)中的應(yīng)用[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2008,6(10):583～584.

[3] 黎世杰,羅廣平,趙陽(yáng).微柱凝膠技術(shù)試驗(yàn)在新生兒溶血病檢測(cè)中的應(yīng)用[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志,2006,6(5):549～551.

[4] 羅梅,何靜,陳方祥,等.新生兒黃疸血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果分析[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2006,22(6):804～805.

[5] 張麗,馮強(qiáng).新生兒溶血病的檢測(cè)與防治進(jìn)展[J].實(shí)用醫(yī)技雜志,2005,12(1):254～255.

M icrobubes Gel Technology M easure in the Neonate Dissolving Clinical Practice of Hemolytic Disease

LI Jiuwen
Hospital of Changping of Dongguan,Dongguan 523573,China

【Abstrat】Objective Probe into M icrobubes gel technology(MGT) application of hemolytic disease of Newborn (HDN).Methods Adopt MGT do " 3 items of hemolytic test " high bilirubin infant of HDN to 189,i.e.:(1)The erythrocyte resists globulin to test;(2) The antibody diffuses and tests;(3)The free antibody of serum is tested.Results A type is compared w ith B type two group infant (mother w ith blood type O) HDN test results,two groups of HDN lead the comparative difference not to have statistics meaning positively.Conclusion MGT has sensitivities high,peculiar degree is prom inent,easy and simple to handle,time consum ing about 40 m in,there are few samples consumption,the apt advantage of judging etc.of the result,is worth popularizing and applying clinically.

M icrobubes gel technology;Hemolytic disease of the newborn

R446.6;R722.1

A

1674-0742(2011)05(a)-0007-02

2010-12-02