李雅欣 陳 靜 湖南環(huán)境生物職業(yè)技術(shù)學院 護理學院遺傳學教研室 中職部解剖教研組,湖南省衡陽市 400

促血管生成素對早期妊娠的影響

李雅欣1陳 靜2湖南環(huán)境生物職業(yè)技術(shù)學院 1 護理學院遺傳學教研室2 中職部解剖教研組,湖南省衡陽市 421001

促血管生成素 早期妊娠 影響

促血管生成素(ang lopoietin,Ang)是由血管內(nèi)皮分泌的促血管生成的一組生長因子,主要作用是促進血管成熟和重塑,在妊娠過程中胎兒胎盤均有較高的表達。

1 材料與方法

1.1 材料 由湖南環(huán)境生物職業(yè)技術(shù)學院實驗動物部提供的健康成熟小鼠72只,體重20～25g。于動情期晚上按雌雄1∶1合籠,次日晨用顯微鏡檢查陰栓或精子,陽性者即定為妊娠第1天(D1)。將受孕小鼠隨機分為4組,每組18只。分別將妊娠小鼠于妊娠D2、D4、D6、D8以斷臼法處死,獲取胚胎著床部位的子宮內(nèi)膜。取0.5cm×0.5cm的內(nèi)膜或蛻膜組織,PBS緩沖液清洗,放入10%中性福爾馬林液固定,常溫制備成石蠟蠟塊,4℃冰箱保存。取動情期同系種同數(shù)量小鼠子宮內(nèi)膜做對照。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法。用免疫化SP法。Ang-1為濃縮型按1∶100稀釋使用。以PBS代替-抗體陰性對照。嚴格按試劑盒說明書操作。特異性免疫反應產(chǎn)物為棕黃色顆粒定為陽性。

1.2.2 圖像分析。使用Leiz Asm圖像分析系統(tǒng)檢測Ang的光密度假(OD值),每張切片隨機選取7個視野(×20),取其平均OD值終為該片的代表值。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理。對測得數(shù)據(jù)運用SPSS13.0軟件進行多個樣本均數(shù)比較的配伍設(shè)計,以配對t檢驗做統(tǒng)計學處理,以P＜0.01為顯著性檢驗水準。

2 結(jié)果

Ang-1在著床期子宮內(nèi)膜表達情況：Ang在D2組的基質(zhì)細胞及血管內(nèi)皮細胞中表達,分泌期表達增強,但腺上皮細胞僅表達Ang-2[1]。Ang在D4組廣泛分布于蛻膜細胞及腺上皮細胞;D6組在血管基質(zhì)細胞和內(nèi)皮細胞內(nèi)強表達; D8Ang-1在蛻膜細胞中表達極強。D2、D4組Ang的OD值均低于D6、D8組(P＜0.01),見表1。

表1 Ang-1在著床期子宮內(nèi)膜表達的平均吸光度值(x ±s,n=15)

3 討論

著床是胚泡與子宮內(nèi)膜相互接觸、識別,并最終被子宮內(nèi)膜所容納的、涉及到復雜的“胎-母”對話的過程。其中血管發(fā)生是這一對話過程中的重大事件,起著至關(guān)重要的作用。囊胚附著部位的子宮內(nèi)膜血管新生、血液循環(huán)加強、血供豐富是保證胚胎著床成功的重要因素。血管基膜降解、內(nèi)皮細胞增殖、遷移、聚集和成熟,從而使母體蛻膜中螺旋動脈重構(gòu),為胚胎的植入提供了豐富而必需的物質(zhì)基礎(chǔ)。因而著床成功與否取決于豐富的血管生成[2]。

Ang-1作為重要的促血管生成因子,是分子量為70 KD的糖蛋白,其cDNA編碼498個氨基酸,具有氨基端的螺旋-螺旋功能域和羧基末端的纖維蛋白原樣結(jié)構(gòu)域。在氨基末端螺旋結(jié)構(gòu)的介導下,Ang-1通過二硫鍵形成同源二聚體或多聚體復合物。而羧基末端的纖維蛋白原樣結(jié)構(gòu)域具有激活受體2內(nèi)皮特異性酪氨酸激酶受體Tie-2的功能,使之磷酸化[3],進而通過 P125FAK、PECAM-1、PI3K/AKT和Caspase等信號傳導通路促進血管的生成,維持血管壁的穩(wěn)定性和內(nèi)皮細胞的完整性。在促進血管生成過中,Ang-l基因的表達受PDGF-B、TGF-B等生長因子的調(diào)控。而這些細胞因子都是“胎-母”對話過程中的重要信號分子。因此Ang-1作為血管生成的一個重要信號分子,必然在胚泡著床過程中起著決定性的作用[4]。

結(jié)果顯示,妊娠第2天,Ang-1主要在基質(zhì)細胞中表達,第4天即著床開始時則在子宮內(nèi)膜上皮細胞及基質(zhì)細胞中較強表達,此時正是胚泡與子宮內(nèi)膜相互識別、接觸、發(fā)生對話的時間[5]。隨著滋養(yǎng)細胞的生長、入侵,第6天Ang-1在血管基質(zhì)細胞和內(nèi)皮細胞中強表達,第8天Ang-1在蛻膜細胞中表達極強[6]。Ang-1基因的表達情況與小鼠胚胎著床進程相一致,隨著滋養(yǎng)細胞的不斷生長,擴展,逐漸植入子宮內(nèi)膜;并在蛋白水解酶的協(xié)同作用下,細胞滋養(yǎng)層細胞不斷分化、融合、發(fā)生中空形成初級絨毛,對胚胎起營養(yǎng)和錨定作用,以保證著床成功。這個過程的有序進行是以血管新生為前提。即在胎-母對話信號作用下,Ang-1基因表達上調(diào),通過旁分泌和自分泌機制、發(fā)揮其強有力的趨化因子樣作用[7],促進細胞增殖、趨化、聚集和黏附而調(diào)控著床部位血管生成。同時在整合素的介導下,Ang-1發(fā)揮黏附蛋白樣作用[8],促進內(nèi)皮細胞間相互接觸,建立信號聯(lián)系,從而促進了胚泡與蛻膜間的信息交流,胚泡最終被具有容受性的子宮內(nèi)膜所容納。

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2011-03-31

(編輯羽飛)