吳愛軍 汝秋明

胃痛平糖漿是以白屈菜為君藥的制劑，具有緩解止痛、止咳的療效;用于慢性胃炎，胃潰瘍，十二指腸潰瘍，胃腸痙攣引起的疼痛及百日咳，支氣管炎等。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法對(duì)胃痛平糖漿中原阿片堿建立了測(cè)定方法，為完善該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

日本島津LC-2010 hT全自動(dòng)高效相色譜儀，原阿片堿對(duì)照品(由中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所提供)批號(hào)：110853-200402，規(guī)格：20 mg，供含量測(cè)定用。乙腈為色譜純，水為純化水，其他為分析醇。

2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜條件：色譜柱為迪馬C18(4.6×250 mm，5 μm);流動(dòng)相：乙腈-三乙胺醋酸溶液(取三乙胺1 ml，冰乙酸3.5 ml加水至1000 ml)(16：84)流速：0.8 ml/min;柱溫：30℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：290 nm。

3 方法與結(jié)果

3.1 對(duì)照品溶液的制備 取原阿片堿對(duì)照品10 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，加1%鹽酸溶液5 ml使溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取適量，加甲醇制成每1 ml含60 μg的溶液，即得。見圖1。

圖1 對(duì)照品色譜圖

3.2 供試品溶液的制備 精密量取本品2 ml，加水20 ml，用氨水調(diào)至pH 9～10，用乙醚提取4次，30 ml/次，分取乙醚層，用同一份無(wú)水硫酸鈉脫水，容器、硫酸鈉用少量乙醚洗滌，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移置5 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，用0.45 μm濾膜濾過(guò)，即得見圖2。

圖2 供試品色譜圖

3.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方(不含白屈菜藥材)比例及生產(chǎn)工藝配制陰性，并用供試品溶液制備方法處理陰性對(duì)照溶液。依上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果陰性對(duì)照色譜在與原阿片堿峰相應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)干擾峰檢出，從而證明本方法是合理可行的見圖3。

圖3 陰性對(duì)照色譜圖

3.4 測(cè)定法 分別精密量取對(duì)照品溶液供試品溶液及陰性對(duì)照注液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。供試品溶液與對(duì)照品溶液的保留時(shí)間一致。陰性對(duì)照無(wú)干擾測(cè)定。

3.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取原阿片堿對(duì)照品9.66 mg，置100 ml量瓶中，1%鹽酸溶液5 ml溶解，用甲醇稀釋至刻度，精密量取6 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，分別精密量取 2、4、6、8、10、12、14、16、18 μl注入液相色譜儀，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=3190+1612986X、r=0.9999，結(jié)果原阿片堿進(jìn)樣量在0.1159～1.0433 μg范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。

3.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10 μl，注入液相色譜儀，重復(fù)6次，測(cè)定其色譜峰面積，平均峰面積為940172，RSD=0.3%。

3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取取供試品溶液，分別在0、8、16、24、32、40、48、56 h 測(cè)定原阿片堿峰面積，平均峰面積為828443，RSD=0.7%。

3.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號(hào)20061003供試品6份，分別按供試品溶液制備方法處理并測(cè)定，計(jì)算得原阿片堿含量(mg/ml)分別為 0.1388、0.1428、0.1418、0.1405、0.1405、0.1406，平均含量0.1408，RSD=1.0%。

3.9 加樣回收試驗(yàn) 精密量取已知含量的供試品(批號(hào)為20061003，含量為0.1408 mg/ml)1 ml，共6份，分別精密加入原阿片堿對(duì)照品溶液(0.0483 mg/ml)3 ml，加水20 ml，按供試品溶液制備方法處理并測(cè)定，計(jì)算回收率，測(cè)得原阿片堿的平均回收率為99.4%，RSD=1.0% 結(jié)果見表1。

3.10 樣品測(cè)定結(jié)果 取三批樣品按供試品溶液制備方法處理并測(cè)定，結(jié)果見表2。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 三批樣品中原阿片堿含量測(cè)定結(jié)果

4 討論

4.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 取原阿片堿對(duì)照品的甲醇溶液，經(jīng)UV-2201紫外-可見分光光度計(jì)在200～350 nm范圍內(nèi)掃描，原阿片堿在290 nm和241 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，考慮290 nm波長(zhǎng)處干擾較小，故選擇290 nm為本試驗(yàn)的測(cè)定波長(zhǎng)。

4.2 流動(dòng)相的選擇 參考文獻(xiàn)［1］，通過(guò)試驗(yàn)選擇乙腈-三乙胺醋酸溶液(取三乙胺1 ml，冰乙酸3.5 ml加水至1000 ml)(16：84)為流動(dòng)相，此流動(dòng)相的分離效果好，出峰較快，故選擇此為流動(dòng)相。

4.3 提取方法的考察 曾試驗(yàn)加大取樣量，溶液乳化非常嚴(yán)重，不易分層;而減少取樣量后，再用乙醚提取，溶液不乳化且分層較快，重現(xiàn)性好，故采取此方法。

［1］顧孝紅.反相高效液相色譜法測(cè)定夏無(wú)天中原阿片堿的含量.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，200213(10)：608 ～609.