方偉達(dá)，梁文勇，余其昌

（廣東省開平市中心醫(yī)院腫瘤科，廣東開平 529300）

乳腺癌是引起我國女性死亡率最高的腫瘤疾病之首，早期診斷和早期治療是提高其療效的最有效手段。腫瘤型M2丙酮酸激酶（TuM2-PK）是近年來研究發(fā)現(xiàn)的一種新的腫瘤標(biāo)志物[1]，最近研究發(fā)現(xiàn)，TuM2-PK在肺癌、腎細(xì)胞癌、胰腺癌和胃腸道惡性腫瘤等輔助診斷中具有很高的敏感性，但國內(nèi)關(guān)于TuM2-PK與乳腺癌之間關(guān)系的報(bào)道較少。因此，本研究檢測乳腺癌患者手術(shù)前血漿中TuM2-PK表達(dá)水平，從而評估其在乳腺癌診斷中的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院2008年6月～2009年10月女性乳腺疾病行手術(shù)治療的患者，病理組織學(xué)或細(xì)胞學(xué)檢查確診為乳腺癌52例，年齡34～66歲；確診為乳腺良性病變36例，年齡28～60歲；另取健康對照組60例，均為門診健康體檢者，年齡30～64歲。

1.2 方法

抽取待檢者空腹無菌外周靜脈血2 ml，根據(jù)ELISA原理，用EDTA抗凝處理，標(biāo)本采集后1～2 h內(nèi)3 100 r/min離心10 min，分離血漿保存至-70℃冰箱待測。因?yàn)槊割怲M不穩(wěn)定，易降解，應(yīng)及時(shí)測定或分離低溫保存[2]。采用雙抗體夾心ELISA法定量測定血漿中的TuM2-PK濃度，微孔中包被的單克隆抗體能特異地捕獲TuM2-PK[3]，所用的兩種單克隆抗體分別針對TuM2-PK的不同部位，并且這些特異性的抗體不與PK的其他異構(gòu)體結(jié)合[4]。腫瘤患者取樣前均未經(jīng)過任何抗腫瘤治療，所有標(biāo)本均無溶血、脂血。

1.3 試劑

用德國ScheBo Tech公司制備的抗TuM2-PK單克隆抗體和相應(yīng)的二抗，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。試劑盒規(guī)定的 TuM2-PK 參考值為 0～15 U/ml，TuM2-PK＞15 U/ml判斷為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。標(biāo)本均數(shù)間比較采用t檢驗(yàn)，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TuM2-PK水平在血漿中的比較

乳腺癌組TuM2-PK水平均明顯高于乳腺良性病變組和健康對照組（P＜0.01），乳腺良性病變組與健康對照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 TuM2-PK水平在不同組織中的表達(dá)Tab.1 Expression of TuM2-PK levels indifferent tissues

2.2 TuM2-PK的表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系

對乳腺癌的診斷價(jià)值評價(jià)以血漿TuM2-PK≥15 U/ml為陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果顯示乳腺癌患者血漿中TuM2-PK與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.01），而年齡、性別、病理類型、TNM分期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)（均 P＞0.05）（表2）。

表2 TuM2-PK表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系Tab.2 Relation of TuM2-PK expression and clinical pathological features of breast cancer

3 討論

丙酮酸激酶（PK）是糖酵解過程中的一個(gè)關(guān)鍵酶[5]，哺乳型的丙酮酸激酶有4種同工酶，它們常均以酶的活性四聚體形式存在，并呈組織特異性，分別為R型、L型、M1型和M2型，其中R型存在于紅細(xì)胞；L型主要存在于腎臟的近曲小管和正常的肝臟；M1型主要存在于腦、心臟和骨骼肌；M2型主要表達(dá)于腎臟的遠(yuǎn)曲小管、正常肺、胚胎和未分化或增生的組織。目前研究表明，在惡性腫瘤組織中，PK的組織特異性同工酶（L型、R型、M1型PK等）表達(dá)減少，但是在癌基因onc-gene編碼激酶的作用下，M2-PK的Ser和Tyr位點(diǎn)均發(fā)生了磷酸化，使原先具有高度活性的四聚體解離為無活性的二聚體形式，并占主導(dǎo)地位，稱之為腫瘤型M2-PK（TuM2-PK）[6]。

許多研究表明，TuM2-PK對于監(jiān)測乳腺癌疾病的活動(dòng)性和患者對化療藥物的敏感性具有一定的臨床價(jià)值。Hoopmann等[7]檢測了轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者接受trastuzumab治療的的血清M2-PK水平，發(fā)現(xiàn)63%的患者M(jìn)2-PK水平變化與腫瘤臨床變化（根據(jù)UICC標(biāo)準(zhǔn)消退或進(jìn)展）相平行；Luftner等[8]在進(jìn)展期乳腺癌患者和健康志愿者中分別測定血腫瘤型M2-PK及血CA 27.29。結(jié)果顯示，CA 27.29對乳腺癌的陽性預(yù)測值為92%，特異性為91%，而腫瘤型M2-PK對乳腺癌的陽性預(yù)測值為81%，特異性為85%。

本研究結(jié)果顯示，TuM2-PK在乳腺癌患者的血中表達(dá)水平明顯高于乳腺良性疾病組或健康對照組 （P＜0.01）；患者TuM2-PK隨著TNM分期越晚表達(dá)水平則越高；且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血漿水平顯著高于未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移患者，這些與 Schneider等[9]報(bào)道一致，Luftner等[10]在進(jìn)展期乳腺癌中也觀察到同樣的結(jié)果。這可能是因?yàn)殡S著腫瘤的進(jìn)展，大量腫瘤細(xì)胞壞死后或轉(zhuǎn)移過程中繼發(fā)釋放出大量的TuM2-PK，導(dǎo)致其在血漿濃度逐步增加，說明TuM2-PK表達(dá)水平與腫瘤分期有關(guān)，其陽性率隨疾病的進(jìn)展而相應(yīng)升高。

綜上所述，本研究證明TuM2-PK將可能成為一種很有前途的新型腫瘤標(biāo)志物，對乳腺癌早期診斷及治療療效等臨床應(yīng)用上具有很好的前景[11]，但由于研究時(shí)間不長，TuM2-PK在乳腺癌組織中與其他各腫瘤標(biāo)志物的關(guān)系的了解還不夠徹底和深入，需要以后進(jìn)行更深入的研究。

[1]胡志樂,王金良.一種新的腫瘤標(biāo)志物TuM2-PK的研究進(jìn)展[J].國外醫(yī)學(xué):臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊,2005,26(3):162-164.

[2]吳健民.影響腫瘤標(biāo)志物檢測的因素[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2005,28(4):352-354.

[3]Eigenbrodt E,Reinacher M,Scheefers-Borchel U,et al.Double role for pyruvate kinase type M2 in the expansion of phosphometabolite pools found in tumor cells[J].Crit Rev Oncog,l992,3(1-2):91-115.

[4]Hugo F,Fischerg,Eigenbrodt E.Quantitativedetection of tumor M2-PK in serum and plasma[J].Anticancer Res,1999,19(4A):2753-2757.

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[9]Schneider J,Peltrig,Bitterlich N,et al.Fuzzy logic-based tumor marker profiles including a new marker Tumor M2-PK improved sensitivity to thedetection of progression in lung cancer patients [J].Anticancer Res,2003,23(2A):899-906.

[10]Luftnerd,Mesterharm J,Akrivakis C,et al.Tumor type M2 pyruvate kinase expression in advanced breast cancer [J].Anticancer Res,2000,20(6D):5077-5082.

[11]賈芳,楊永豐.腫瘤M2型丙酮酸激酶的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)研究與教育,2009,26(2):82-84.