黃德元 汪虹彬

近年來，由于激素、免疫抑制劑及廣譜抗生素的廣泛應(yīng)用，真菌感染日益增多。其中器官移植受者和惡性腫瘤中真菌感染患病率高達20%～40%，而且往往是致命的［1］。同時由于新的抗真菌藥物不斷涌現(xiàn)，致使近年來耐藥真菌數(shù)量及種類迅速增長［2］。因此抗真菌藥物體外藥敏試驗對真菌耐藥性的研究及監(jiān)測耐藥菌株的出現(xiàn)具有重要的意義［3］。蘇丹虹等同時采用E試驗法、美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)認可的紙片擴散法、ROSCO公司紙片擴散法來檢測52株酵母菌的藥物敏感性，結(jié)果顯示:ROSCO紙片擴散法與E試驗法、NCCLS認可的紙片擴散法結(jié)果符合率基本一致，且操作簡單，結(jié)果直觀，藥物選擇種類多，適用于臨床實驗室常規(guī)抗真菌藥敏試驗［4］。金蘭等應(yīng)用ROSCO紙片擴散法和NCCLS推薦的M27-A大量肉湯稀釋法測定76株酵母樣真菌對氟康唑的藥敏狀況，結(jié)果顯示:ROSCO紙片擴散法可以代替NCCLSM27-A大量肉湯稀釋法在臨床推廣使用［5］。我室自制一種真菌藥敏培養(yǎng)基，同樣應(yīng)用丹麥ROSCO藥敏紙片，與改良SHADOMY藥敏培養(yǎng)基進行比較，探討其結(jié)果的一致性和準確性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 2008年1月至2009年4月期間從臨床分離的138株酵母樣真菌，分別來自痰、咽拭子、尿液、血液等標本。包括白色假絲酵母菌83株，熱帶假絲酵母菌48株，克柔氏假絲酵母菌3株，近平滑假絲酵母菌2株，光滑假絲酵母菌2株。

1.1.2 質(zhì)控菌株 采用標準菌株白色假絲酵母菌(ATCC90028)和熱帶假絲酵母菌(ATCC750)。

1.1.3 培養(yǎng)基 ①改良SHADOMY培養(yǎng)基:丹麥ROSCO公司生產(chǎn)的成品培養(yǎng)基;②自制真菌藥敏培養(yǎng)基:每100 ml水中，加入胰蛋白胨1.0 g，葡萄糖2.0 g，氯化鈉0.5 g，磷酸二氫鉀 0.1 g，瓊脂 1.5 g，調(diào)節(jié) PH7.0，121℃，15 min 高壓滅菌，水浴55℃，倒4 mm厚平皿備用。

1.1.4 藥敏紙片 丹麥ROSCO公司生產(chǎn)的抗真菌藥敏紙片，氟康唑(15 μg/片)、氟胞嘧啶(1 μg/片)、酮康唑(15 μg/片)、兩性霉素 B(10 μg/片)、伊曲康唑(8 μg/片)。

1.2 方法

1.2.1 臨床菌株分離鑒定 生物梅里埃Vitek-32全自動細菌鑒定儀及YBC卡進行鑒定。

1.2.2 藥敏試驗 采用瓊脂擴散法。①將改良的SHADOMY培養(yǎng)基和自制真菌培養(yǎng)基兩種培養(yǎng)基平板先置35℃培養(yǎng)箱內(nèi)干燥20～30 min;②配制待檢菌接種濃度為5×105cfu/ml;③用無菌棉拭子蘸取菌液均勻涂布于上述兩種培養(yǎng)基平板上，將平板置35℃干燥10 min后貼抗真菌藥敏紙片，并用質(zhì)控菌株進行檢測;④35℃培養(yǎng)18～24 h判斷結(jié)果。

1.3 試驗結(jié)果判讀 測量抑菌環(huán)直徑，按照ROSCO抗真菌藥敏紙片抑菌環(huán)基本判讀標準進行判讀。

表1 138株酵母樣真菌在改良SHADOMY培養(yǎng)基上的藥敏結(jié)果(%)

1.4 統(tǒng)計學方法 應(yīng)用配對χ2檢驗進行數(shù)據(jù)處理。

2 結(jié)果

2.1 質(zhì)控菌株在2種培養(yǎng)基上的測定結(jié)果:分別應(yīng)用SHADOMY培養(yǎng)基和自制真菌藥敏培養(yǎng)基對質(zhì)控菌株進行重復(fù)檢測，抑菌環(huán)直徑均在規(guī)定范圍內(nèi)。

2.2 138株酵母樣真菌在改良SHADOMY培養(yǎng)基上藥物敏感結(jié)果見表1。

2.3 38株酵母樣真菌在自制真菌藥敏培養(yǎng)基上藥物敏感結(jié)果見表2。

2.4 對138株酵母樣真菌在改良SHADOMY培養(yǎng)基和自制真菌藥敏培養(yǎng)基上的敏感菌株進行χ2檢驗，P＞0.05，即138株酵母樣真菌在自制真菌藥敏培養(yǎng)基與改良SHADOMY培養(yǎng)基上的藥物敏感率具有一致性。

表2 138株酵母樣真菌在自制真菌藥敏培養(yǎng)基上藥物敏感結(jié)果(%)

3 討論

3.1 應(yīng)用丹麥ROSCO抗真菌藥敏紙片，138株酵母樣真菌在改良SHADOMY培養(yǎng)基上的藥敏結(jié)果顯示:白色假絲酵母菌對氟康唑、氟胞嘧啶、酮康唑、兩性霉素B、伊曲康唑的敏感率分別為94.0%、95.2%、94%、91.6%、96.4%，熱帶假絲酵母菌對氟康唑、氟胞嘧啶、酮康唑、兩性霉素B、伊曲康唑的敏感率分別為93.7%、91.7%、89.0%、98.0%、95.8%。138株酵母樣真菌在自制真菌藥敏培養(yǎng)基上的藥物結(jié)果顯示:熱帶假絲酵母菌對氟康唑、氟胞嘧啶、酮康唑、兩性霉素B、伊曲康唑的敏感率分別為92.8%、91.4%、95.2%、94.0%、96.4%，熱帶假絲酵母菌對氟康唑、氟胞嘧啶、酮康唑、兩性霉素B、伊曲康唑的敏感率分別為 89.6%、93.8%、93.8%、98.0%、95.8%。可見臨床上二種常見病原性真菌在自制真菌藥敏培養(yǎng)基與改良SHADOMY培養(yǎng)基上的藥敏敏感率具有一致性。這與國內(nèi)蘇丹虹等報道的ROSCO紙片擴散法藥敏試驗結(jié)果也基本接近。說明ROSCO藥敏紙片在兩種培養(yǎng)基上的重復(fù)性、準確性、可靠性較好，兩者具有較高的符合率。

3.2 近年來，隨著醫(yī)院內(nèi)真菌感染的逐漸增多，抗真菌藥物的大量應(yīng)用，真菌的耐藥情況也日趨嚴重［6］。體外藥敏試驗對抗真菌藥物的合理選擇及發(fā)現(xiàn)耐藥菌株具有重要意義。因此建立簡便易行及準確可靠的抗真菌藥敏試驗迫在眉睫。ROSCO藥敏紙片和SHADOMY成品藥敏瓊脂，操作簡單，容易使用，抑菌環(huán)結(jié)果清晰，容易讀取，不受儀器設(shè)備及讀取時間的限制和影響，國內(nèi)一些實驗室已在應(yīng)用。但作為成品培養(yǎng)基，在一些經(jīng)濟落后地區(qū)，價格偏貴。而自制真菌藥敏培養(yǎng)基成本低，材料易采購，能滿足不時之需，且操作簡單，結(jié)果可信。經(jīng)試驗顯示與改良SHADOMY藥敏培養(yǎng)基對真菌藥敏結(jié)果有較高的一致性，適合做真菌藥敏試驗，可代替SHADOMY藥敏培養(yǎng)基使用。在經(jīng)濟落后地區(qū)，研制出這樣一種低成本、高品質(zhì)、易操作，與相應(yīng)標準培養(yǎng)基有較高符合率的真菌藥敏培養(yǎng)基，適合于臨床實驗室常規(guī)抗真菌藥敏試驗，可在臨床上推廣應(yīng)用。

［1］李若瑜，王端禮.密切結(jié)合臨床，提高真菌學檢驗水平.中華檢驗醫(yī)學雜志，2003，26(9):521-523.

［2］張曉冬，李若瑜.微量法檢測念珠菌對三唑類藥物敏感性與交叉耐藥性.中華醫(yī)學檢驗雜志，1998，21(2):76-78.

［3］張青，汪定成，張惠中，張周良.兩種酵母樣真菌藥敏培養(yǎng)基檢測氟康唑藥敏試驗的比較.中國血液流學雜志，2007，17(2):293-295.

［4］蘇丹虹，鄔全會，王華成.ROSCO真菌藥敏試驗與其他方法的比較研究.檢驗醫(yī)學，2004，19(4):291-294.

［5］金蘭，蔣新良，張嶸.ROSCO紙片擴散法檢測酵母樣真菌對氟康唑藥敏試驗的評價.中華檢驗醫(yī)學雜志，2004，27(1):46-48.

［6］張建平，張春盛，辛德清，等.酵母樣真菌的病原分布與耐藥性監(jiān)測.中國感染控制雜志，2005，4(1):61-63.