陳映

(四川省什邡市人民醫(yī)院 四川什邡 618400)

血小板輸注作為一種重要治療手段,在治療因血小板減少或血小板功能障礙引起的出血性疾病方面顯得尤為重要,但是反復(fù)輸注導(dǎo)致的同種免疫,易使患者體內(nèi)產(chǎn)生血小板相關(guān)抗體,影響血小板輸注效果,導(dǎo)致血小板輸注無效(PTR)。為此,筆者對已發(fā)生血小板輸注無效的患者進(jìn)行血小板相關(guān)抗體分析后,并根據(jù)抗體類型進(jìn)行配合輸注,效果明顯,現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 對象

2008年2月至2009年12月以來在本院住院并發(fā)生PTR的患者共12例,其中男性8例,女性4例,年齡20～63歲,平均42.5歲;血液病患者7例,其他腫瘤患者5例,所有患者均經(jīng)過多療程放療和化療后出現(xiàn)血小板減少,外周血小板計數(shù)<50×109／L,臨床表現(xiàn)為體表有出血點、紫癜、鼻衄、血尿、消化道出血等,患者均有多次輸血史或血小板輸注史,并在最近1次血小板輸注時發(fā)生PTR。所有患者出現(xiàn)PTR時均排除感染、發(fā)熱、脾腫大、DIC等影響血小板輸注療效的非免疫因素。

1.2 方法

對所有PTR患者首先進(jìn)行HLA抗體和HPA抗體檢測與分類,(血小板抗體檢測試劑盒由美國GTI公司提供)。取患者3mL血小板血漿6000r/min離心5min,棄血漿,用血小板保護(hù)液洗2次,然后取100μL,6000 r/min離心5min,洗2次,瀝干,加120μL細(xì)胞離子緩沖液,混勻備用。將試劑盒復(fù)溫至室溫,取對應(yīng)的反應(yīng)條,分別用50μL上述的血小板加入對應(yīng)孔中,37℃孵育30min,洗滌,顯色,室溫避光孵育30min,終止反應(yīng)后于450nm測A值,判斷結(jié)果。當(dāng)患者檢出HPA抗體時,對患者及供者血小板進(jìn)行交叉配合,做單克隆抗體固相血小板抗體試驗(MASPAT)(試劑盒由德國歐蒙醫(yī)學(xué)試驗診斷公司提供)。如患者檢測出HLA-I類抗體,對患者進(jìn)HLA-A、B SSP分型(試劑盒由美國TBG公司提供)。當(dāng)患者既有HLA-I類抗體又有HPA抗體,首先對患者進(jìn)行HLA-A、B分型,然后進(jìn)行血小板交叉配合試驗?；颊咚斪⒀“鍋碓从诘玛柺兄行难?血小板計數(shù)≥2.5×1011,體積200mL。所有患者在血小板輸注前及靜注后1h和24h分別采集靜脈血作外周血小板計數(shù)(Sysmex XT-1800i全自動血細(xì)胞分析儀)。

1.3 療效評定

評價血小板輸注無效采用校正血小板數(shù)增值(CCI)[1],若1h CCI＜7.5,24hCCI＜4.5,則判為血小板輸注無效。

2 結(jié)果

(1)12例PTR患者檢出HLA抗體陽性共8例,陽性率為66.7%,HPA抗體陽性1例,陽性率為8.3%,HLA抗體合并HPA抗體陽性共3例,陽性率為25.0%。

(2)對8例HLA抗體陽性患者,在已建立的血小板庫中查詢,其A、B位點4個抗原供受者相合情況見表1。上述PTR患者經(jīng)過HLA配合選擇后輸注C級以上配合血小板,除1例存在輸注無效外,其余7例均有效,有效率為87.5%,其1hCCI值為(18.2±2.2),24hCCI值為(12.1±1.6)。對于1例存在HPA抗體的患者,采用血小板交叉配合后輸注有效,其1hCCI值為18.5,24hCCI值為11.3。

(3)對于3例既有HLA抗體又有HPA抗體的患者,首先在血小板庫中找到C級以上配合供者,然后分別與其進(jìn)行血小板交叉配合,交叉反應(yīng)陰性后再輸注,結(jié)果輸注有效2例,有效率為66.7%,有效者其1hCCI值為(19.5±1.7),24hCCI值為(11.3±1.4)。

3 討論

臨床上引發(fā)PTR的原因很多,其中以非免疫性因素為主,但對于反復(fù)輸血或輸血小板的患者,多以免疫因素為主,主要原因是反復(fù)輸血后引發(fā)同種免疫反應(yīng)所致。文獻(xiàn)[2]報道反復(fù)輸注血小板的患者中HLA抗體陽性率占80%,而單純HPA抗體陽性僅占少數(shù)。從本次研究結(jié)果看,36例PTR患者體內(nèi)血小板抗體檢出類別及陽性率與文獻(xiàn)報道基本一致。對于已發(fā)生PTR的患者,在排除非免疫因素后,如何進(jìn)行血小板供者篩選至關(guān)重要。文獻(xiàn)[3]報道,用于PTR患者血小板供者篩選的方法主要有2種:(1)基于HLA配型原則的篩選;(2)基于血小板交叉配合的篩選。美國的一項調(diào)查曾認(rèn)為2種篩選策略一樣有效。但是,血小板交叉配合試驗僅對有單純HPA抗體的患者有價值,而HLA配型篩選也僅對有HLA抗體的患者適用,上述2種篩選策略對具有聯(lián)合抗體患者的應(yīng)用是有局限性的。為此,首先對發(fā)生PTR的患者進(jìn)行抗體分類,然后有針對性地篩選供者,效果良好[4]。但是,對于具有HLA抗體或聯(lián)合抗體的患者,當(dāng)選擇C級以上配合并進(jìn)行血小板交叉配合時,并未完全解決PTR問題,可能原因為受體除了有HLA抗體外,還可能有未被檢出的血小板特異性抗體和／或粒細(xì)胞抗體等存在。

表1 8例HLA抗體陽性患者在血小板庫中查詢結(jié)果

[1]Muller—Steinhardt M,Schlenke P,Wagner T,et a1.Transfusion of platelet concentrates from pooledbuff-coats:comparson of beside VS prestorageleukofiltration[J].Transfu Med,2000,10(1):59～65.

[2]劉達(dá)莊,包于勤,陸萍,等.血小板抗體檢測在輸血中的重要意義[J].中國輸血雜志,1999,12(2):116～119.

[3]張志華,郝長來.血小板無效輸注的研究進(jìn)展EJ3[J].臨床血液學(xué)雜志,2007,20(3):186～188.

[4]張獻(xiàn)清,穆士杰,夏愛軍,等.血小板輸注無效患者的供者篩選策略及臨床研究[J].臨床輸血與檢驗,2009,11(2):126～128.