陳映

(四川省什邡市人民醫(yī)院 四川什邡 618400)

血小板輸注作為一種重要治療手段,在治療因血小板減少或血小板功能障礙引起的出血性疾病方面顯得尤為重要,但是反復(fù)輸注導(dǎo)致的同種免疫,易使患者體內(nèi)產(chǎn)生血小板相關(guān)抗體,影響血小板輸注效果,導(dǎo)致血小板輸注無(wú)效(PTR)。為此,筆者對(duì)已發(fā)生血小板輸注無(wú)效的患者進(jìn)行血小板相關(guān)抗體分析后,并根據(jù)抗體類(lèi)型進(jìn)行配合輸注,效果明顯,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

2008年2月至2009年12月以來(lái)在本院住院并發(fā)生PTR的患者共12例,其中男性8例,女性4例,年齡20～63歲,平均42.5歲;血液病患者7例,其他腫瘤患者5例,所有患者均經(jīng)過(guò)多療程放療和化療后出現(xiàn)血小板減少,外周血小板計(jì)數(shù)<50×109／L,臨床表現(xiàn)為體表有出血點(diǎn)、紫癜、鼻衄、血尿、消化道出血等,患者均有多次輸血史或血小板輸注史,并在最近1次血小板輸注時(shí)發(fā)生PTR。所有患者出現(xiàn)PTR時(shí)均排除感染、發(fā)熱、脾腫大、DIC等影響血小板輸注療效的非免疫因素。

1.2 方法

對(duì)所有PTR患者首先進(jìn)行HLA抗體和HPA抗體檢測(cè)與分類(lèi),(血小板抗體檢測(cè)試劑盒由美國(guó)GTI公司提供)。取患者3mL血小板血漿6000r/min離心5min,棄血漿,用血小板保護(hù)液洗2次,然后取100μL,6000 r/min離心5min,洗2次,瀝干,加120μL細(xì)胞離子緩沖液,混勻備用。將試劑盒復(fù)溫至室溫,取對(duì)應(yīng)的反應(yīng)條,分別用50μL上述的血小板加入對(duì)應(yīng)孔中,37℃孵育30min,洗滌,顯色,室溫避光孵育30min,終止反應(yīng)后于450nm測(cè)A值,判斷結(jié)果。當(dāng)患者檢出HPA抗體時(shí),對(duì)患者及供者血小板進(jìn)行交叉配合,做單克隆抗體固相血小板抗體試驗(yàn)(MASPAT)(試劑盒由德國(guó)歐蒙醫(yī)學(xué)試驗(yàn)診斷公司提供)。如患者檢測(cè)出HLA-I類(lèi)抗體,對(duì)患者進(jìn)HLA-A、B SSP分型(試劑盒由美國(guó)TBG公司提供)。當(dāng)患者既有HLA-I類(lèi)抗體又有HPA抗體,首先對(duì)患者進(jìn)行HLA-A、B分型,然后進(jìn)行血小板交叉配合試驗(yàn)。患者所輸注血小板來(lái)源于德陽(yáng)市中心血站,血小板計(jì)數(shù)≥2.5×1011,體積200mL。所有患者在血小板輸注前及靜注后1h和24h分別采集靜脈血作外周血小板計(jì)數(shù)(Sysmex XT-1800i全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀)。

1.3 療效評(píng)定

評(píng)價(jià)血小板輸注無(wú)效采用校正血小板數(shù)增值(CCI)[1],若1h CCI＜7.5,24hCCI＜4.5,則判為血小板輸注無(wú)效。

2 結(jié)果

(1)12例PTR患者檢出HLA抗體陽(yáng)性共8例,陽(yáng)性率為66.7%,HPA抗體陽(yáng)性1例,陽(yáng)性率為8.3%,HLA抗體合并HPA抗體陽(yáng)性共3例,陽(yáng)性率為25.0%。

(2)對(duì)8例HLA抗體陽(yáng)性患者,在已建立的血小板庫(kù)中查詢(xún),其A、B位點(diǎn)4個(gè)抗原供受者相合情況見(jiàn)表1。上述PTR患者經(jīng)過(guò)HLA配合選擇后輸注C級(jí)以上配合血小板,除1例存在輸注無(wú)效外,其余7例均有效,有效率為87.5%,其1hCCI值為(18.2±2.2),24hCCI值為(12.1±1.6)。對(duì)于1例存在HPA抗體的患者,采用血小板交叉配合后輸注有效,其1hCCI值為18.5,24hCCI值為11.3。

(3)對(duì)于3例既有HLA抗體又有HPA抗體的患者,首先在血小板庫(kù)中找到C級(jí)以上配合供者,然后分別與其進(jìn)行血小板交叉配合,交叉反應(yīng)陰性后再輸注,結(jié)果輸注有效2例,有效率為66.7%,有效者其1hCCI值為(19.5±1.7),24hCCI值為(11.3±1.4)。

3 討論

臨床上引發(fā)PTR的原因很多,其中以非免疫性因素為主,但對(duì)于反復(fù)輸血或輸血小板的患者,多以免疫因素為主,主要原因是反復(fù)輸血后引發(fā)同種免疫反應(yīng)所致。文獻(xiàn)[2]報(bào)道反復(fù)輸注血小板的患者中HLA抗體陽(yáng)性率占80%,而單純HPA抗體陽(yáng)性?xún)H占少數(shù)。從本次研究結(jié)果看,36例PTR患者體內(nèi)血小板抗體檢出類(lèi)別及陽(yáng)性率與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致。對(duì)于已發(fā)生PTR的患者,在排除非免疫因素后,如何進(jìn)行血小板供者篩選至關(guān)重要。文獻(xiàn)[3]報(bào)道,用于PTR患者血小板供者篩選的方法主要有2種:(1)基于HLA配型原則的篩選;(2)基于血小板交叉配合的篩選。美國(guó)的一項(xiàng)調(diào)查曾認(rèn)為2種篩選策略一樣有效。但是,血小板交叉配合試驗(yàn)僅對(duì)有單純HPA抗體的患者有價(jià)值,而HLA配型篩選也僅對(duì)有HLA抗體的患者適用,上述2種篩選策略對(duì)具有聯(lián)合抗體患者的應(yīng)用是有局限性的。為此,首先對(duì)發(fā)生PTR的患者進(jìn)行抗體分類(lèi),然后有針對(duì)性地篩選供者,效果良好[4]。但是,對(duì)于具有HLA抗體或聯(lián)合抗體的患者,當(dāng)選擇C級(jí)以上配合并進(jìn)行血小板交叉配合時(shí),并未完全解決PTR問(wèn)題,可能原因?yàn)槭荏w除了有HLA抗體外,還可能有未被檢出的血小板特異性抗體和／或粒細(xì)胞抗體等存在。

表1 8例HLA抗體陽(yáng)性患者在血小板庫(kù)中查詢(xún)結(jié)果

[1]Muller—Steinhardt M,Schlenke P,Wagner T,et a1.Transfusion of platelet concentrates from pooledbuff-coats:comparson of beside VS prestorageleukofiltration[J].Transfu Med,2000,10(1):59～65.

[2]劉達(dá)莊,包于勤,陸萍,等.血小板抗體檢測(cè)在輸血中的重要意義[J].中國(guó)輸血雜志,1999,12(2):116～119.

[3]張志華,郝長(zhǎng)來(lái).血小板無(wú)效輸注的研究進(jìn)展EJ3[J].臨床血液學(xué)雜志,2007,20(3):186～188.

[4]張獻(xiàn)清,穆士杰,夏愛(ài)軍,等.血小板輸注無(wú)效患者的供者篩選策略及臨床研究[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2009,11(2):126～128.