申衛(wèi)和

（海南省第二人民醫(yī)院，海南五指山 572200）

在做ABO血型鑒定時，臨床廣泛應(yīng)用的玻片法雖操作簡單、方便快捷，但在臨床實際工作中卻時有發(fā)生血型鑒定錯誤現(xiàn)象，而且往往是在患者需要輸血治療申請配血時被發(fā)現(xiàn)錯定血型，導(dǎo)致臨床科室對檢驗科產(chǎn)生不良印象，認(rèn)為檢驗質(zhì)量差，檢驗結(jié)果不準(zhǔn)確、不可靠。對檢驗科工作會產(chǎn)生很大的負(fù)面影響。試管法是傳統(tǒng)經(jīng)典的ABO、RhD血型鑒定方法，其結(jié)果準(zhǔn)確可靠，但與微柱凝膠法相比，敏感性較差，操作難以規(guī)范化、自動化、檢測結(jié)果不易保存，而微柱凝膠法用于ABO、RhD血型鑒定易于自動化、標(biāo)準(zhǔn)化、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，特異性強(qiáng)等優(yōu)點被許多大醫(yī)院所采用。筆者在湘雅三院輸血科進(jìn)修學(xué)習(xí)期間，對于門診每天送檢血型鑒定標(biāo)本同時采用手工微柱凝膠法鑒定ABO、RhD血型結(jié)果與試管和玻片法進(jìn)行ABO、RhD血型鑒定結(jié)果進(jìn)行比較。

1 材料與方法

1.1 材料

湖南省湘雅三院輸血科2009年1月~2009年6月門診血型鑒定1 193例，抽取靜脈血1 ml用EDTA-K2抗凝，年齡 1 d～90歲。

1.2 試劑

ABO、RhD血型定型微柱凝膠試劑卡 （單克隆抗體）（長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供）反定型用的A型標(biāo)準(zhǔn)試劑細(xì)胞、B型標(biāo)準(zhǔn)試劑細(xì)胞由本實驗室自制2%~5%試劑紅細(xì)胞，按第一版《臨床輸血手冊》[1]操作。

1.3 設(shè)備

TD－3A型血型血清學(xué)專用離心機(jī)（長春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)）

1.4 方法

對門診送檢血樣同時采用手工微柱凝膠法及手工鹽水試管法進(jìn)行ABO、RhD正反定型鑒定。用玻片進(jìn)行ABO、RhD正定型鑒定。

1.4.1 微柱凝膠法 ①正定型，將受檢者0.5%的紅細(xì)胞生理鹽水懸液，加入抗A、抗B、抗D、陰性對照微管凝膠孔中，每孔50μl即可使用微柱凝膠離心機(jī)，以900 r/min離心2 min；以1 500 r/min離心3 min，取出肉眼觀察結(jié)果。②反定型，先將受檢者血漿標(biāo)本加注Ac、Bc兩孔內(nèi)，每孔50μl。后在2孔標(biāo)本中分別加入相應(yīng)的A型B型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液50μl即可使用微柱凝膠離心機(jī)，以900 r/min離心2 min，1 500 r/min離心3 min取出觀察結(jié)果[2]。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)按試劑盒說明書。陽性：紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在微柱凝膠中形成的特異性抗原抗體復(fù)合物浮在凝膠表面或膠中。反應(yīng)強(qiáng)度：特異性紅細(xì)胞抗原抗體復(fù)合物位于凝膠表面為強(qiáng)陽性反應(yīng)，復(fù)合物在膠中為弱陽性反應(yīng);愈靠近膠底部顆粒愈小，反應(yīng)愈弱。陰性：被檢紅細(xì)胞抗原無相應(yīng)的抗體結(jié)合，不出現(xiàn)特異性抗原抗體復(fù)合物，紅細(xì)胞沉于微柱凝膠的尖底部。

1.4.2 試管法 ①查抗原（正定型）：取潔凈小試管2支，分別標(biāo)明抗A、抗B，用滴管加入抗A和抗B分型試劑2滴于試管底部，再分別加入受檢者5%紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，混勻。②查抗體（反定型）取潔凈小試管2支，分別標(biāo)明A型、B型細(xì)胞。用滴管加入受檢者血清2滴于試管底部，再分別以滴管加入A、B型5%試劑紅細(xì)胞懸液1滴，混勻與正定型2管，立即放入離心機(jī)內(nèi)以1 000 r/min離心5 min。取出輕輕搖動試管，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，以肉眼觀察來判斷結(jié)果[2]。

1.4.3 玻片法 正定型取清潔玻片用蠟筆標(biāo)明抗A、抗B，并加入抗A、抗B分型試劑各1滴于玻片標(biāo)記相對應(yīng)處，再以滴管分別加入受檢者10%紅細(xì)胞鹽水懸液1滴充分混勻，連續(xù)約15 s以肉眼觀察來判斷結(jié)果[2]。

2 結(jié)果

在1 193例送檢血樣中，一次性正確率：微柱凝膠法正定型率100%、反定型率99.92%；試管法一次性正確率也分別達(dá)到99.92%、99.83%；玻片法一次性正確率為98.91%。這與張悅，張國平研究結(jié)果基本相符[3]。3種檢測方法結(jié)果見表1。

表1 3種血型鑒定方法比較

3 討論

在上述3種方法血型鑒定不符17例。對可疑結(jié)果及時進(jìn)行復(fù)查其結(jié)果，①1例微柱凝膠法正反不符情況是：抗A（-）、抗 B（4+）、A 型（1+）、B 型（3+），后經(jīng)待檢者的血清與已知血型的試劑紅細(xì)胞即篩選紅細(xì)胞（I、Ⅱ、Ⅲ套）起反應(yīng)抗體篩查顯陽性，表明有其他不規(guī)則抗體存在。后確定血型是“B”（已查到的抗原定型[2]）。微柱凝膠法是應(yīng)用分子排阻層析原理，通過微小的凝膠顆粒構(gòu)成的濾網(wǎng)，在離心條件下，將與抗體反應(yīng)的紅細(xì)胞浮于膠表面或膠中，將未與抗體反應(yīng)的紅細(xì)胞沉至微柱凝膠的尖底部。結(jié)果可以由自動化儀器判讀，也可以由肉眼直視判讀。目前國內(nèi)一些大醫(yī)院主要用該法進(jìn)行ABO、RhD血型抗原鑒定，該法有自動化和手工兩種，三院輸血科采用的是手工微柱凝膠法。②三例試管法正反不符多由操作繁瑣易出現(xiàn)漏加、錯加抗A、抗B試劑或試劑紅細(xì)胞懸液濃度度不夠造成肉眼觀察困難。③對于13例玻片法判斷困難的可疑結(jié)果后經(jīng)試管法和、微柱凝膠法復(fù)查證實有8例定型錯誤。這可能由亞型紅細(xì)胞抗原與抗體的凝集反應(yīng)慢、凝集強(qiáng)度弱，而造成誤判。此外還有一些疾病，如白血病、惡性腫瘤也會使RBC抗原變?nèi)?；而某些自身免疫性疾病或新生兒溶血患者的RBC會發(fā)生自發(fā)性凝集[4]。有時還可因為紅細(xì)胞濃度過高或低，以及玻片、吸管、試管等污染造成假凝集，引起血型鑒定錯誤[5-6]。

本研究表明，手工微柱凝膠免疫檢測ABO、RhD血型鑒定，其靈敏度、準(zhǔn)確性均與試管法一致，其反應(yīng)強(qiáng)度高于試管法、優(yōu)于玻片法。微柱凝膠法操作簡便、快速、省時、省力，易于觀察結(jié)果，并可以長時間保存血型鑒定樣本（保存7 d以上），有利于事后復(fù)查。該法樣本、試劑用量少，結(jié)果的判讀易于標(biāo)準(zhǔn)化，最大限度減少了操作者主觀因素的影響。玻片法正定型雖操作簡單、方便快捷被廣泛應(yīng)用于臨床，可在操作時，是一塊玻片只能做一個人，做血型鑒定一個一個做，如標(biāo)本量大時就不便于操作，費(fèi)時費(fèi)力。在實際工作中很少同時做反定型，由于沒有指控（反定型），如遇弱凝集、冷凝集、或假凝集時容易對結(jié)果誤判出錯，而不能及時發(fā)現(xiàn)。再有，做過的玻片放置時間稍長就會因液體揮發(fā)而凝集也給審核簽發(fā)人員（主管檢驗師）帶來不便。為確保血型鑒定的準(zhǔn)確性，避免血型差錯。建議手工微柱凝膠法血型鑒定技術(shù)應(yīng)在二甲以上醫(yī)院推廣使用。考慮到微柱凝膠法成本略高的關(guān)系，對門診用可采用試管法、而對住院患者則采用手工微柱凝膠法分步實施的辦法。

[1]王寶燕.輸血手冊[M].北京：科學(xué)出版社,2008:129-132.

[2]夏琳.臨床輸血診療技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2008:62-64.

[3]張悅,張國平.ABO血型2種檢測方法比較[J].職業(yè)與健康,2008,24(14):1393-1397.

[4]王琳.抗M引起ABO血型鑒定困難分析[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生,2009,47(2):91.

[5]陳希元.ABO血型鑒定中應(yīng)注意的問題及解決方法[J].社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志,2009,7（2）:39.

[6]余海燕,王席,丁后明.高效價冷凝集素患者引起的血型鑒定困難1例報道[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生,2008,46(22):130.