夏賽忠

（浙江省嵊泗縣人民醫(yī)院，浙江 舟山 202450）

鹽酸川芎嗪化學(xué)名為2，3，5，6-四甲基吡嗪鹽酸鹽，具有抗血小板聚集作用，且對已聚集的血小板有解聚作用，還可擴張小動脈、改善微循環(huán)和增加腦血流量，從而產(chǎn)生抗血栓和溶血栓的作用，臨床主要用于治療閉塞性血管疾病、腦血栓形成、冠心病、心絞痛等[1-2]。本試驗建立了鹽酸川芎嗪氯化鈉注射液的含量測定及有關(guān)物質(zhì)檢查的高效液相色譜（HPLC）法，報道如下。

1 儀器與試藥

LC-2010C型高效液相色譜儀（日本島津），N2000色譜工作站；日本A&D電子分析天平（0.1 mg）。鹽酸川芎嗪對照品（成都曼思特生物科技有限公司，純度為99.0%）；鹽酸川芎嗪氯化鈉注射液（四川三精升和制藥有限公司，批號為050201，050511，051025，規(guī)格為100 mL：鹽酸川芎嗪40 mg與氯化鈉0.9 g）；水為重蒸餾水，乙腈為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Hypersil C18柱（250 mm ×4.6 mm，10 μm）；流動相：乙腈 -水（40 ∶60）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：295 nm；柱溫：30 ℃。理論塔板數(shù)按鹽酸川芎嗪峰計算應(yīng)不低于4 000。

2.2 含量測定

2.2.1 測定法

精密量取鹽酸川芎嗪氯化鈉注射液5 mL（相當于鹽酸川芎嗪2 mg），加流動相制成每1 mL中含鹽酸川芎嗪20 μg的溶液，作為供試品溶液。另取鹽酸川芎嗪對照品適量，加流動相制成每1 mL中含20 μg的溶液，作為對照品溶液。取供試品和對照品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算鹽酸川芎嗪的含量。

2.2.2 方法學(xué)考察

專屬性考察：取供試品溶液、對照品溶液及空白流動相適量，依法進樣，色譜圖見圖1?？梢?，流動相在鹽酸川芎嗪峰處無干擾，鹽酸川芎嗪峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度大于1.5。

圖1 鹽酸川芎嗪高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：取鹽酸川芎嗪對照品適量，精密稱定，用流動相制成質(zhì)量濃度分別為 2.5，5.0，10.0，20.0，40.0 μg/mL 的溶液，各精密吸取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積 Y對鹽酸川芎嗪質(zhì)量濃度 X進行線性回歸，得回歸方程 Y=72 580 X-717.9，r=0.999 9（n=5）。結(jié)果表明，鹽酸川芎嗪質(zhì)量濃度在2.5～40.0 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：取鹽酸川芎嗪對照品適量，精密稱定，用流動相制成含鹽酸川芎嗪15.0，20.0，25.0 μg/mL的溶液，各精密吸取20 μL重復(fù)進樣5次。結(jié)果3種質(zhì)量濃度峰面積的 RSD分別為0.8% ，1.1%，1.2% （n=5）。

重現(xiàn)性試驗：取同一批樣品（批號為050201），按2.2項下方法平行制備供試品溶液并依法測定。結(jié)果平均標示含量為99.5%，RSD=0.56% （n=6）。

回收率試驗：在已知含量（10 μg/mL）供試品溶液中，分別加入一定量的鹽酸川芎嗪對照品，配成高、中、低3種質(zhì)量濃度溶液（15，20.0，25 μg/mL），按 3.1 項下試驗，測得回收率分別為 99.6%，100.2%，100.3%，RSD 分別為 0.69%，0.54%，0.82%（n=3）。

穩(wěn)定性試驗：取2.2.1項下同一供試品溶液（批號為050201），置室溫下于不同時間（1，2，3，4，6，8 h）分別進樣 20 μL。結(jié)果峰面積的 RSD為1.02%（n=6），表明供試品溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.3 樣品含量測定

取3批樣品，照2.2.1項下方法測定。結(jié)果見表1。

2.3 有關(guān)物質(zhì)檢查

2.3.1 測定法

將鹽酸川芎嗪氯化鈉注射液（0.4 mg/mL）作為供試品溶液；精密量取供試品溶液適量，加流動相稀釋成每1 mL中含鹽酸川芎嗪4.0 μg的溶液，作為對照品溶液。取對照品溶液20 μL，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的20%～25%；再取供試品溶液20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍。供試品溶液色譜圖中若顯示雜質(zhì)峰，則各雜質(zhì)峰面積總和不得大于對照品溶液主峰的面積（1.0%）。

2.3.2 方法學(xué)考察

專屬性考察：分別將樣品在60℃溫度、強光[照度為（4 500±500）lx]、相對濕度為95%的環(huán)境下放置10 d，各取上述破壞試驗溶液20 μL注入色譜儀，記錄色譜圖至鹽酸川芎嗪峰保留時間的3倍。結(jié)果樣品的破壞產(chǎn)物和主峰可實現(xiàn)基線分離，分離度均大于1.5，不干擾有關(guān)物質(zhì)的測定，說明本色譜條件適用性良好，可用于鹽酸川芎嗪注射液有關(guān)物質(zhì)的檢查。

檢測限確定：取鹽酸川芎嗪對照品適量，精密稱定，用流動相制成每1 mL中含0.01 mg的溶液，精密吸取5 μL，注入液相色譜儀，此時信噪比約等于3，故檢測限為50 ng。

進樣精密度試驗：取質(zhì)量濃度為4.0 μg/mL的對照品溶液，依法測定。結(jié)果對照品溶液主峰面積的 RSD為0.81%（n=5），表明方法的進樣精密度良好。

重現(xiàn)性試驗：精密吸取樣品20 μL，依法測定。結(jié)果雜質(zhì)含量的RSD為2.06%（n=6），表明方法重現(xiàn)性良好。

2.3.3 樣品有關(guān)物質(zhì)測定

依法對3批樣品進行有關(guān)物質(zhì)檢查。結(jié)果見表1。

表1 3批樣品測定結(jié)果（n=3）

3 討論

目前測定川芎嗪含量的方法有HPLC法[3-4]、紫外分光光度法[5]、毛細管電泳法[6]等。2005年版《中國藥典（二部）》[7]也收錄了磷酸川芎嗪片、磷酸川芎嗪膠囊、磷酸川芎嗪注射液，分別采用電位滴定法和紫外分光光度法進行含量測定，但沒有對有關(guān)物質(zhì)進行控制。本試驗所建立的HPLC法方法簡便、快速、準確，對鹽酸川芎嗪氯化鈉注射液質(zhì)量的全面控制提供了一個有價值的參考。

[1]張國清，趙江花.川芎嗪在心血管疾病中的藥理作用研究進展[J].中國當代醫(yī)藥，2009，16（4）：142.

[2]何 晶.川芎嗪的藥理作用及臨床應(yīng)用[J].首都醫(yī)藥，2005，12（23）：31-32.

[3]李小燕.RP-HPLC法測定鹽酸川芎嗪注射液的含量[J].廣西醫(yī)學(xué)，2003，25（6）：925-927.

[4]王貴發(fā).高效液相色譜法測定磷酸川芎嗪葡萄糖注射液中川芎嗪的含量[J]. 醫(yī)藥導(dǎo)報，2004，23（8）：583-584.

[5]吳 艷，劉建輝，吳 振.注射用磷酸川芎嗪凍干粉含量測定的研究[J]. 黑龍江醫(yī)藥，2006，19（2）：81-82.

[6]韓風(fēng)梅，楊 新，李 捃，等.鹽酸川芎嗪注射液中鹽酸川芎嗪的毛細管電泳測定[J]. 湖北大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），1999，21（1）：67.

[7]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：89.