林向前

（福建省漳州市中醫(yī)院，福建 漳州 363000）

頸康片是我院省級(jí)重點(diǎn)?？瓶祻?fù)科的醫(yī)院特色制劑，由馬錢子、白芍、葛根、天麻等藥材組方，具有解肌鎮(zhèn)痛、舒筋通絡(luò)、祛風(fēng)除濕的功效，用于治療頸椎病、頸背肌筋膜炎、肩周炎。為控制制劑質(zhì)量，筆者參考有關(guān)文獻(xiàn)對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

2F-2型三用紫外儀；TG328B型電光分析天平（上海天平儀器廠）；BP211D型電子天平（Sarhorius公司）；UV-160A型紫外分光光度計(jì)（Shimadzu公司）；KQ5200DB型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。馬錢子堿對(duì)照品（批號(hào)為0706-200104）、芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)為 110736-200422）、士的寧對(duì)照品（批號(hào)為0705-200005）均由中國藥品生物制品檢定所提供；薄層用硅膠G（青島海洋化工有限公司）；頸康片（本院制劑室，批號(hào)為20021201，20030801，20040101）；試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別[1]

馬錢子：取樣品15片，研細(xì)，置具塞錐形瓶中，加氯仿30 mL，濃氨試液1 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)勇确? mL使溶解，作為供試品溶液。同法制備缺馬錢子的陰性對(duì)照品溶液。取馬錢子堿對(duì)照品，加氯仿制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-乙醇-濃氨試液（16∶12∶1∶4）的上層液為展開劑，展開，取出，晾干。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液色譜中則無此斑點(diǎn)（圖1 A）。

白芍：取樣品10片，研細(xì)，加乙醇20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液。同法制備缺白芍的陰性對(duì)照品溶液。另取芍藥苷對(duì)照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15∶1∶1∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液色譜中則無此斑點(diǎn)（見圖1 B）。

2.2 士的寧含量測(cè)定

2.2.1 溶液制備[2]

取樣品100片，稱定質(zhì)量，求得平均片重，將藥片研細(xì)，精密稱取相當(dāng)于40片重的量，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入氯仿25mL與濃氨水試液4 mL，密塞，搖勻，稱定質(zhì)量；冷浸1 h后，超聲處理30 min，放冷，用氯仿補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過；將該濾液置分液漏斗中，以3%硫酸溶液萃取3次，每次15 mL，萃取液均以3%硫酸預(yù)先濕潤的濾紙濾入50 mL量瓶中，并以3%硫酸適量洗滌濾器，洗液并入量瓶中，再加3%硫酸稀釋至刻度，搖勻；精密量取續(xù)濾液2 mL，置25 mL量瓶中，加3%硫酸稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。取缺馬錢子的陰性樣品，同法操作，制得陰性對(duì)照品溶液，注意陰性樣品稱取量與供試品的量應(yīng)相近（小于0.5%）。取士的寧對(duì)照品適量（5.455 mg），精密稱定，置50 mL量瓶中，用稀硫酸（3→100）溶解并稀釋至刻度，配成質(zhì)量濃度為0.1091 g/L的對(duì)照品貯備液。

2.2.2 測(cè)定波長(zhǎng)選擇[2]

精密量取對(duì)照品貯備液3 mL，置 25 mL量瓶中，加3%硫酸稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。以稀硫酸為空白，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)檢測(cè)對(duì)照品、供試品及陰性對(duì)照品溶液的紫外吸收光譜。結(jié)果顯示，士的寧對(duì)照品溶液在254 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，樣品中士的寧在259 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，而陰性對(duì)照品在254 nm及259 nm波長(zhǎng)處均無干擾（圖2），且259 nm波長(zhǎng)下士的寧質(zhì)量濃度在一定范圍內(nèi)與吸收度有良好的線性關(guān)系，故選擇259 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖2 紫外吸收?qǐng)D譜

2.2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密量取士的寧對(duì)照品貯備液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，4.5 mL，分別置 25 mL量瓶中，用稀硫酸稀釋至刻度，搖勻，配制成系列質(zhì)量濃度的溶液，以稀硫酸為空白，在259 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度 A。以吸收度 A對(duì)質(zhì)量濃度 C作線性擬合，得回歸方程 A=0.034 1 C+0.000 1（n=6）。結(jié)果表明，士的寧質(zhì)量濃度在2.18～19.64 μg/mL范圍內(nèi)與吸收度呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：取質(zhì)量濃度為13.092 μg/mL的士的寧對(duì)照品溶液，重復(fù)測(cè)定5次。結(jié)果平均吸收度值為0.448，RSD為0.12%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，8，16，24 h 時(shí)依法測(cè)定。結(jié)果士的寧吸收度的 RSD為0.28%（n=6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：精密稱取同一批供試品，分別制備5份供試品溶液并在259 nm波長(zhǎng)處測(cè)定。結(jié)果士的寧平均含量為0.062 0%，RSD=3.40%（n=5），表明該方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取對(duì)照品貯備液（0.109 1 g/L）2，3，4 mL各兩份，分別裝入50 mL量瓶中，然后往其中加入已知質(zhì)量濃度的供試品提取物的續(xù)濾液2 mL，用稀硫酸稀釋至刻度。在259 nm波長(zhǎng)處依法測(cè)定含量并計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 士的寧加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.2.4 樣品含量測(cè)定

精密稱取3批樣品，按供試品溶液制備方法制備溶液，在259 nm波長(zhǎng)處以陰性對(duì)照品溶液為空白，同法測(cè)定供試品溶液的吸收度值，代入回歸方程計(jì)算。結(jié)果批號(hào)為20021201，20030801，20040101的3批樣品中士的寧相對(duì)百分含量分別為0.063 1%，0.064 5%，0.062 0%。

3 討論

士的寧最小中毒劑量為5～10 mg，頸康片每天服用量約3.6 g，其士的寧含量約為2.232 mg，遠(yuǎn)小于最小中毒劑量，由此可見，該藥常用量服用是安全的。在供試品溶液制備過程中，曾使用回流法提取，但與超聲法比較相對(duì)費(fèi)時(shí)，且兩法效果基本一致，故選用浸漬加超聲法進(jìn)行樣品提取。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：34.

[2]林向前，何鴻欽，范展霞.紫外分光光度法測(cè)定接骨丹中士的寧的含量[J]. 中國藥業(yè)，2005，14（8）：27-28.