金桂花，韓映晨，徐蓮花

（吉林省延邊食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 延吉 133000）

毛脈酸模是蓼科酸模屬多年生草本植物，主要分布于我國(guó)東北、華北等地區(qū)，其中黑龍江省又主要分布于大、小興安嶺地區(qū)。毛脈酸模在民間以根入藥，對(duì)淋病、上呼吸道感染、癬病和瘡毒有確切療效，但目前對(duì)毛脈酸模果實(shí)成分的含量研究報(bào)道極少。毛脈酸模中含有白藜蘆醇及其苷等二苯乙烯類成分及大黃素等蒽醌類成分。白藜蘆醇是植物界分布較廣的二苯乙烯類化合物，具有多種藥理活性，包括抗腫瘤活性[1-3]、抗氧化性和抗血小板活性，以及保肝利肝作用[4]、鎮(zhèn)咳平喘作用、抗病原微生物作用[5]等。大黃素的生物活性表現(xiàn)在抑制胰酶作用[6]、抑菌、抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用[7-10]、肝腎保護(hù)作用[11-12]及胃腸道雙向調(diào)節(jié)作用[13]，并且是很好的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑[14-15]。本試驗(yàn)利用高效液相色譜（HPLC）法對(duì)毛脈酸模果實(shí)不同部位（包括3個(gè)等級(jí)種子、果皮及花被片）中大黃素及白藜蘆醇的含量進(jìn)行了分析，為毛脈酸模果實(shí)及種子的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

YoungLin高效液相色譜儀，YoungLin Autochro-2000型色譜工作站。大黃素對(duì)照品、白藜蘆醇對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)分別為 110756-200110，111535-200301）；甲醇、乙腈為色譜醇；水為超純水；其他試劑均為分析純。毛脈酸模種子為市售，采后室內(nèi)自然陰干。按毛脈酸模種子的性狀特征將其分為3個(gè)等級(jí)，并將3個(gè)等級(jí)的毛脈酸模種子、花被片及果皮分別粉碎成細(xì)粉（過(guò)80目篩），見(jiàn)表1。

表1 3個(gè)等級(jí)毛脈模種子清水浸酸種的發(fā)芽情況表

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

大黃素：流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸水（25∶75），柱溫為40℃，流速為0.8 mL/min，進(jìn)樣量為10 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm。

白藜蘆醇：流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸水（70∶30），柱溫為40℃，流速為0.8 mL/min，進(jìn)樣量為10 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為365 nm。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

分別精密稱取毛脈酸模3個(gè)等級(jí)種子、花被片、果皮粉末（過(guò)80目篩）500 mg，加50%乙醇70 mL，索氏法提取4 h，過(guò)濾，蒸干。用甲醇溶解，并定容至25 mL，即為供試品溶液。精密稱取在60℃減壓干燥至恒重的大黃素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.14 mg的大黃素對(duì)照品溶液。精密稱取在60℃減壓干燥至恒重的白藜蘆醇對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.36 mg的白藜蘆醇對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：精密吸取大黃素對(duì)照品溶液2，4，6，8，10 mL及白藜蘆醇對(duì)照品溶液 1，2，3，4，5 μL，分別注入高效液相色譜儀測(cè)定。以進(jìn)樣量 X（μg）為橫坐標(biāo)、峰面積 Y為縱坐標(biāo)分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，白藜蘆醇回歸方程為 Y=8 106.06 X+62 574，r=0.999 8（n=5）；大黃素回歸方程為 Y=4 106.06X+102 416，r=0.999 7（n=5）。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一份一等種子供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10 h時(shí)進(jìn)樣，記錄峰面積。結(jié)果大黃素的 RSD=1.3%（n=6），白藜蘆醇的 RSD=0.8%（n=6），表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：精密稱取毛脈酸模一等種子粉末5份，按供試品溶液制備方法制備溶液并測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果大黃素的 RSD=1.1% （n=5），白藜蘆醇的 RSD=1.8% （n=5），表明方法重現(xiàn)性良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取各對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次。大黃素和白藜蘆醇峰面積的 RSD分別為1.6%和1.4%（n=6），表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取毛脈酸模一等種子粉末一定量，加入一定量混合對(duì)照品溶液，按供試品溶液方法制備溶液并測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4 樣品含量測(cè)定

取各樣品，依法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表3。可見(jiàn)，毛脈酸模種子中大黃素及白藜蘆醇的含量與種子的發(fā)育及次生代謝產(chǎn)物的積累有關(guān)，一等種子中大黃素的含量較二、三等種子含量較高，大黃素在花被片中的含量明顯高于種子及果皮；白藜蘆醇在一等種子中的含量頗高，而二、三等種子及花被片中未檢測(cè)到其特征峰，果皮中含量較低。

表2 大黃素和白藜蘆醇加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

表3 毛脈酸模種子、花被片及果皮中大黃素、白藜蘆醇的含量（‰）

3 討論

種子中大黃素和白藜蘆醇含量與種子的成熟度正相關(guān)，種子發(fā)育較成熟的，其含量也相應(yīng)較高，即次生代謝產(chǎn)物的含量與種子的生長(zhǎng)及發(fā)育有關(guān)。由毛脈酸模果實(shí)不同部位中的大黃素和白藜蘆醇的含量測(cè)定可知，種子中大黃素和白藜蘆醇的含量與種子的飽滿度及發(fā)育程度有關(guān)，種子發(fā)育的好，子粒飽滿，則其含量也會(huì)相應(yīng)較高；相反，種子發(fā)育不成熟，子粒干癟，其含量會(huì)較低甚至檢測(cè)不到。

選擇種子入藥時(shí)，需盡量選擇飽滿的種子，以保證有效成分（活性成分）的含量及藥效。此外，花被片及果皮中含有較多的大黃素，尤其是花被片中的大黃素含量幾乎達(dá)到一等種子中大黃素含量的5倍，且花被片較種子易得，故當(dāng)以大黃素為有效成分（活性成分）入藥時(shí)，選用花被片較種子更佳。

二、三等種子及果皮中檢測(cè)不到白藜蘆醇成分的特征峰，分析其原因：一是種子中所含的白藜蘆醇成分原本較少，二、三等種子的發(fā)育及飽滿度均較一等種子差，故白藜蘆醇成分的蓄積量則更少；二是由于植物次生代謝途徑在植物體內(nèi)或細(xì)胞中并不全部開(kāi)放，而是定位于某一器官、組織、細(xì)胞或細(xì)胞器中并受到獨(dú)立的調(diào)控，推測(cè)果皮中不存在白藜蘆醇的次生代謝途徑。在操作中，分離果皮與種子頗為困難，因此，生產(chǎn)中選擇果實(shí)入藥較種子更經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便。

[1]王 征，羅澤民，鄧林偉.白藜蘆醇的藥理作用機(jī)理和合成途徑[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2003，15 （2）:178-181.

[2]胡 躍，張?zhí)K展.白藜蘆醇抗腫瘤作用研究新進(jìn)展[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)·腫瘤學(xué)分冊(cè)，2002，29 （3）:174-176.

[3]閆 靜，王振月.白藜蘆醇及其甙的生物活性研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2000 ，28 （2）:39-40.

[4]童 平，張振濤.虎杖中白黎蘆醇甙對(duì)脂質(zhì)體脂質(zhì)過(guò)氧化物的抑制作用[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，1991，26 （6）:363.

[5]陰 健，郭立弓.中藥現(xiàn)代研究與臨床應(yīng)用[M].北京:學(xué)苑出版社，1993:435.

[6]焦東海，蔣小維，阮宜吾，等.全國(guó)首屆大黃學(xué)術(shù)研討會(huì)文獻(xiàn)概述[J].中醫(yī)雜志，1988，29 （11）:66-68.

[7]李成林，葉于薇，孫菊英.大黃素和蘆薈大黃素的抗菌活性研究[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，1989，5（6）:381-384.

[8]祁 紅.大黃素的抗炎作用[J].中草藥，1999，30（7）:522-524.

[9]Chang CH，Lin CC，Yang JJ，et al.Antrinflammatory effect s of emodinfrom ventilago Ieiocarpa[J].Am J Chin Med，1996，24（2）:139-142.

[10]王文俊，吳咸中，姚 智，等.大黃素、丹參素對(duì)單核細(xì)胞分泌炎性細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志，1995，11（6）:370-372.

[11]展玉濤，李定國(guó)，魏紅山，等.大黃素對(duì)大鼠肝纖維化形成的影響[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2000，20 （4）:276-278.

[12]王 軍，魯 盈，楊汝春，等.大黃素防治糖尿病大鼠早期腎損傷的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 浙江醫(yī)學(xué)，2000，22 （12）:723-726.

[13]呂金勝，何鳳慈，劉震東，等.大黃素對(duì)動(dòng)物離體回腸收縮作用的影響[J].中國(guó)藥業(yè)，2000，9（11）:25-27.

[14]陳家坊，吳中亮.大黃素對(duì)人肺癌A-549細(xì)胞殺傷作用的研究[J].中草藥，1991，22 （12）:543-546.

[15]孫維廣，廖慧麗，黃兆勝.蓼屬藥用植物化學(xué)與藥理[J].國(guó)外醫(yī)藥·植物藥分冊(cè)，2001，16 （3）:101-105.