蘇 瑾,于德成,曲楠楠

(佳木斯大學(xué)藥學(xué)院黑龍江省生物藥制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,黑龍江 佳木斯 154007)

功能性消化不良(functional dyspesia,FD),是指具有腹痛、腹脹、早飽、噯氣、食欲不振、惡心嘔吐等不適癥狀,經(jīng)檢查排除引起這些癥狀的器質(zhì)疾病的一組臨床綜合征。歐美的流行病組織調(diào)查表明,普通人群中有消化不良癥狀者占19%～ 41%[1]。其病因和發(fā)病機(jī)制至今尚未清楚,一般認(rèn)為,上胃腸動(dòng)力障礙是 FD的主要病理生理學(xué)基礎(chǔ)?！拌讓?shí)健胃顆?！笔怯晒欧健拌讓?shí)消痞湯”[2]變化而來(lái),選擇將其制成顆粒劑,作用迅速且克服了湯劑煎煮不便的缺點(diǎn),服用、貯藏及運(yùn)輸均較方便[3]。組方中君藥枳實(shí)為蕓香科植物酸橙 Citrus aurantium L.及其栽培變種或甜橙 Citrus sinensis Osbeck的干燥幼果。味苦、辛、酸 ,性微寒,歸脾、胃經(jīng),具有有理氣寬中,行滯消脹等功能,用于胸脅氣滯,脹滿疼痛,食積不化,痰飲內(nèi)停等癥[4]。本文通過(guò)對(duì)枳實(shí)藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究,為保證制劑質(zhì)量和開(kāi)發(fā)新藥奠定基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥品與試劑

辛弗林對(duì)照品(批號(hào) 120936-200404,含量測(cè)定用 ),中國(guó)藥品生物制品檢定所;枳實(shí)藥材(購(gòu)于佳木斯市金天醫(yī)藥公司,經(jīng)佳木斯大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室劉娟鑒定為正品);其他試劑均符合規(guī)定。

1.2 儀器

Agilent1100高效液相色譜儀,美國(guó) Agilent公司;Olympus顯微成像系統(tǒng),U-CMAD3型,日本。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 枳實(shí)的性狀鑒別

取枳實(shí)藥材三批,與《中國(guó)藥典》(2005年版)特征對(duì)照。

2.2 枳實(shí)的顯微鑒別

分別取枳實(shí)藥材橫切片和粉末進(jìn)行顯微鏡觀察。

2.3 枳實(shí)的理化鑒別

取本品粉末0.5g,加甲醇 10mL,加熱回流10min,濾過(guò)。取濾液1mL,加四氫硼鉀約5mg,搖勻,加鹽酸數(shù)滴,觀察溶液顏色。

2.4 辛弗林的定性鑒別和含量測(cè)定

2.4.1 辛弗林的定性分析

取本品粉末0.5g,加甲醇 10mL,超聲處理20min,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?.5mL使溶解,作為供試品溶液。另取辛弗林對(duì)照品,加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各2 μL,分別點(diǎn)于同一以含1%氫氧化鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠 G薄層板上,以正丁醇-冰醋酸-水(4:1:5)的上層溶液為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以0.5%茚三酮乙醇溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。

2.4.2 辛弗林的含量測(cè)定

色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;甲醇-水(0.18%含磷酸和0.22%十二烷基磺酸鈉)(55:45)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng) 274nm。理論板數(shù)按辛弗林峰計(jì)算,應(yīng)不低于4000[5]。

對(duì)照品溶液的制備:精密稱取在80℃干燥至恒重的辛弗林對(duì)照品適量,加甲醇溶解,搖勻,制成每1mL含辛弗林0.1mg的溶液 ,即得。

供試品溶液的制備:將藥材粉碎成細(xì)粉,混勻,取0.1g,精密稱定 ,加甲醇 40mL,加熱回流90min,濾過(guò),濾液蒸干 ,殘?jiān)蛹状际谷芙?定量轉(zhuǎn)移至2mL量瓶中 ,加甲醇至刻度。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 性狀觀察

呈半球形,少數(shù)為球形,直徑 0.5～ 2.5cm。外果皮黑綠色或暗棕綠色,具顆粒狀突起和皺紋,有明顯的花柱殘跡或果梗痕。切面中果皮略隆起,黃白色或黃褐色,厚0.3～ 1.2cm,邊緣有 1～ 2列油室,瓤囊棕褐色,質(zhì)堅(jiān)硬,氣清香 ,味苦、微酸。

3.2 顯微鑒別

本品中果皮細(xì)胞類圓形或形狀不規(guī)則,壁大多呈不均勻增厚。果皮表皮細(xì)胞表面觀多角形、類方形或長(zhǎng)方形,氣孔近環(huán)式,直徑18～ 26μ m,副衛(wèi)細(xì)胞5～ 9個(gè);側(cè)面觀外被角質(zhì)層。草酸鈣方晶存在于果皮和汁囊細(xì)胞中,呈斜方形、多面形或雙錐形 ,直徑2～ 24 μm。橙皮苷結(jié)晶存在于薄壁細(xì)胞中,黃色或無(wú)色,呈圓形或無(wú)定形團(tuán)塊,有的顯放射狀紋理。油室碎片多見(jiàn),分泌細(xì)胞狹長(zhǎng)而彎曲。螺紋、網(wǎng)紋導(dǎo)管和管胞細(xì)小。

3.3 理化鑒別結(jié)果

溶液顯櫻紅色至紫紅色。

3.4 辛弗林的定性和定量鑒別結(jié)果

供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)[6]。定量鑒別結(jié)果,見(jiàn)表1。

表1 辛弗林的進(jìn)樣量與峰面積

以測(cè)定的峰面積積分值為縱坐標(biāo),進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,Y= 36.07556+ 226.50556X,r= 0.9999。測(cè)定三批供試品含量?！吨袊?guó)藥典》(2005年版)規(guī)定“本品按干燥品計(jì)算,含辛弗林不得少于0.30%”,三批藥材中辛弗林含量分別為0.39%,0.41%,0.41%,符合規(guī)定。

4 討論

枳實(shí)的商品規(guī)格通常按直徑大小區(qū)分等次,從檢查結(jié)果來(lái)看,三批枳實(shí)藥材的在性狀鑒別及顯微特征上均符合《中國(guó)藥典》中枳實(shí)項(xiàng)下規(guī)定;枳實(shí)藥材中揮發(fā)油含量和辛弗林含量有明顯差異,其含量高低與傳統(tǒng)等次劃分相符。因辛弗林等生物堿為枳實(shí)的主要有效成分,因此枳實(shí)藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中可選擇辛弗林為指標(biāo)并規(guī)定其限量。與現(xiàn)行藥典標(biāo)準(zhǔn)中枳實(shí)項(xiàng)下規(guī)定相比,本文探討了高效液相色譜法測(cè)定辛弗林的色譜條件,可更有效地評(píng)價(jià)枳實(shí)藥材的質(zhì)量,為枳實(shí)藥材的商品流通和研究開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。

[1]聶玉強(qiáng).羅馬Ⅱ功能性胃腸疾病分類及診斷標(biāo)準(zhǔn) [J].國(guó)外醫(yī)學(xué)內(nèi)科冊(cè),2001,28(4):147-150

[2]鄭宏斌,趙茂森.枳實(shí)消痞湯治療功能性消化不良療效觀察 [J].四川中醫(yī),2007,25(3):61

[3]張保國(guó),王學(xué)禮,劉慶芳.中藥顆粒劑研究的現(xiàn)狀與發(fā)展動(dòng)態(tài) [J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2000,(07):57-59

[4]中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京:化學(xué)工業(yè)出社,2005

[5]劉振麗,宋志前,張玲,等.枳實(shí)飲片中3類化學(xué)成分含量測(cè)定 [J].中國(guó)中藥雜志,2006,31(17):1425-1427

[6]許妍,付輝政.RP-HPLC法測(cè)定枳實(shí)中辛弗林的含量 [J].藥品評(píng)價(jià),2005,(06):39-40