陳秀蓮

(吉林省敦化市中醫(yī)院 吉林敦化 133700)

瀉痢消丸是復(fù)方制劑,具有清熱燥濕、行氣止痛、化濁止痢之功效。用于急性腸炎、結(jié)腸炎、痢疾等癥的治療。為控制其內(nèi)在質(zhì)量，我們對(duì)其采用高效液相色譜法對(duì)鹽酸小檗堿進(jìn)行了含量測(cè)定及相應(yīng)的方法學(xué)考察。

1 含量測(cè)定[1]

1.1 溶液的制備和測(cè)定

1.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1mL含0.08mg的溶液，備用。

1.1.2 供試品溶液的制備 取樣品10丸,研細(xì)，取約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸(100∶1)溶液50mL，密塞，稱定重量，置60℃水浴中溫浸30min，超聲處理1h，放冷，再稱定重量，用甲醇-鹽酸(100∶1)溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

1.1.3 陰性對(duì)照品溶液的制備 按處方比例,取缺黃連的樣品約0.3g，精密稱定，按“1.1.2”項(xiàng)下的方法操作，制備陰性對(duì)照品溶液。

1.1.4 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。

1.1.5 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.033mol/L磷酸二氫鉀(25∶75)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為345nm；柱溫：40.0℃；流量：1.0mL/min；理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

1.2 方法學(xué)考察及結(jié)果

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含0.08mg的溶液，精密吸取此溶液各5、7.5、10、12.5、15μL分別注入液相色譜儀，測(cè)定。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積值為縱坐標(biāo)作圖，得一條近似通過原點(diǎn)的直線,回歸方程為:Y=2 531380X-50594.92，r=0.9994。結(jié)果表明,鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.4～1.2μg之間,進(jìn)樣量與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

1.2.2 穩(wěn)定性考察 分別取放置4、8、12、16、20、24h的供試品溶液,測(cè)定瀉痢消丸中鹽酸小檗堿的含量，以考察其穩(wěn)定性。RSD值為1.24%，表明供試品溶液至少在24h內(nèi)穩(wěn)定。

1.2.3 精密度考察 吸取同一供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，則鹽酸小檗堿的RSD為0.85%，表明儀器精密度良好。

1.2.4 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取樣品內(nèi)容物粉末6份，每份3.0g，精密稱定，按“1.1.2”項(xiàng)下“供試品溶液的制備”方法操作。吸取供試液和對(duì)照液各10μL，注入高效液相色譜儀,測(cè)定樣品中鹽酸小檗堿的含量。結(jié)果樣品中鹽酸小檗堿的平均含量為18.34 mg/g，RSD值為0.85%。

1.2.5 回收率的測(cè)定 精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加入到已知鹽酸小檗堿含量的瀉痢消丸（批號(hào)20041201,丸中鹽酸小檗堿含量為18.34mg/g,詳見重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)）中，按“含量測(cè)定”項(xiàng)下方法操作，制備供試品溶液,測(cè)定瀉痢消丸中鹽酸小檗堿的含量，計(jì)算回收率。

1.2.6 鹽酸小檗堿含量測(cè)定 精密吸取“1.1.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液和“1.1.2”項(xiàng)下供試品溶液各10μL,注入高效液相色譜儀，進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算樣品中鹽酸小檗堿的含量。

1.2.7 陰性干擾試驗(yàn) 取“1.1.3”項(xiàng)下的陰性對(duì)照品溶液,按樣品中鹽酸小檗堿含量測(cè)定項(xiàng)下的方法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果供試品色譜圖中,在與鹽酸小檗堿對(duì)照品色譜峰相應(yīng)的位置上，沒有色譜峰出現(xiàn)，表明處方中其他藥味對(duì)其測(cè)定無(wú)干擾。

2 討論

高效液相色譜法測(cè)定黃連中鹽酸小檗堿含量時(shí)，曾采用0.1mol/L的磷酸二氫鉀溶液與乙腈的混合溶液,發(fā)現(xiàn)磷酸二氫鉀溶液的濃度較高時(shí)，容易發(fā)生阻塞,原因是磷酸二氫鉀為緩沖鹽溶液，鹽類易溶于水，而遇到乙腈等有機(jī)溶劑則析出結(jié)晶而阻塞,致使壓力升高，儀器不能正常運(yùn)轉(zhuǎn)。經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，磷酸二氫鉀溶液濃度低于0.05mol/L,乙腈的比例不超過30%時(shí)，不會(huì)發(fā)生阻塞現(xiàn)象。后經(jīng)多次試驗(yàn),采用本法測(cè)定，色譜峰峰形良好，分離度達(dá)到要求(>1.5)，故列入正文。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(一部)[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005:118,213～214,68,166,118.