陳秀琴　李景田　鄒錦慧　張慧明　黃　偉　李佰靈　周小璜

【摘要】 目的 觀察聯(lián)合用藥預(yù)防激素性股骨頭壞死對血漿NO含量的影響，探討聯(lián)合用藥預(yù)防的作用機制。方法 30只兔隨機分成三組：對照組同期肌內(nèi)注射生理鹽水；激素組是給予糖皮質(zhì)激素肌注；治療組在給予同劑量糖皮質(zhì)激素同時，每日使用血塞通、脂必妥和阿侖膦酸鈉；觀察股骨頭組織學(xué)變化，用免疫組化技術(shù)檢測血漿NO含量的變化。結(jié)果 激素組股骨頭軟骨下骨小梁稀疏、斷裂，脂肪細胞直徑增大，空骨陷窩較多，血漿NO含量顯著低于對照組；治療組股骨頭軟骨下骨小梁結(jié)構(gòu)較正常，血漿NO含量顯著高于激素組。結(jié)論 聯(lián)合應(yīng)用血塞通、脂必妥和阿侖膦酸鈉能預(yù)防和減緩激素性股骨頭的發(fā)生，血漿NO含量升高是聯(lián)合用藥預(yù)防的作用途徑之一。

【關(guān)鍵詞】糖皮質(zhì)激素；股骨頭壞死；一氧化氮

Effect of drugs preventing steroid-induced osteonecrosis of the femoral head on the content of nitric oxide in plasma

CHEN Xiu-qin,LI Jing-tian,ZOU Jin-hui,et al.Department of Physiology,Medical College of Shaoguan University,Guangdong 512026,China

【Abstract】 Objective To observe the effect of drugs preventing steroid-induced osteonecrosis of the femoral head on the content of nitric oxide in plasma in order to investigate the role of the joint drug in the prevention mechanism.Methods Thirty rabbits were divided randomly into 3 groups:group A,guoup B and group C.Rabbits in group A were injected with normal saline; rabbits in group B were treated with glucocorticoid; rabbits in group C were treated with glucocorticoid as that in group B,and meanwhile,orally received the panax notoginseng saponins,zhibituo and alenduonate for 8 weeks.Histopathological structure and the content of nitric oxide in plasma were observed.Results The trabecula of femoral head of the B group changedthinner and more sparse,the bone marrow cavity with edema and large fatty cells were also observed and the content of nitric oxide in plasma of group B was significantly lower than those of group A.The trabecula of femoral head of the C group was normal and the content of nitric oxide in plasma of group C was significantly higher than those of group B.Conclusion The Zhibituo,Panax notoginseng saponins and Alenduonate may prevent steroid-induced necrosis of femoral head and the rising of the content of nitric oxide in plasma was one of the way of drugs preventing steroid-induced osteonecrosis of the femoral head.

【Key words】Glucocorticoid; Necrosis of femoral; Nitric oxide

激素性股骨頭壞死的發(fā)病率占非創(chuàng)傷性股骨頭壞死首位，并有增高趨勢，已引起廣泛的重視。但目前關(guān)于激素性股骨頭缺血性壞死的研究多集中在治療已形成的壞死，對在使用激素過程中如何預(yù)防股骨頭壞死，研究較少^[1]。本課題組在建立激素性股骨頭壞死動物模型的過程中，采用血塞通、脂必妥和阿侖膦酸鈉聯(lián)合用藥進行預(yù)防性治療，結(jié)果證實聯(lián)合用藥預(yù)防可提高股骨頭血流量，改善骨組織結(jié)構(gòu)和血液流變學(xué)指標(biāo)，預(yù)防或減緩激素性股骨頭壞死^[2，3]。本實驗是進一步觀察聯(lián)合用藥對血漿一氧化氮(nitric oxide，NO)含量的影響，探討聯(lián)合用藥預(yù)防激素性股骨頭壞死的作用機制。

1 材料和方法

1.1 實驗動物 成年新西蘭大白兔30只，不分雌雄，體質(zhì)量(2.5±0.5)kg，普通級，所有動物在同等條件下飼養(yǎng)，自由攝水和攝食，動物和飼料均由廣東省實驗動物中心提供。

1.2 藥品 血塞通片(主要成分為三七總皂甙，玉溪市維和制藥有限公司，生產(chǎn)批號200410290，25 mg/片)；脂必妥片(主要成分為山楂、白術(shù)、紅曲，成都地奧九泓制藥廠，產(chǎn)品批號0410063，350 mg/片)；阿侖膦酸鈉片(主要成分為4-氨基-1-羥基亞丁基-1，海南曼克星制藥廠生產(chǎn)，批號 040501，5 mg/片)；(河南天康制藥有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號 040905，5 g /L)。

1.3 實驗方案 動物先適應(yīng)實驗環(huán)境1周后，隨機分為對照組、激素組、治療組，每組10只。對照組每周肌注1 ml生理鹽水2次(星期一和星期四，下同)；激素組每周2次肌注地塞米松磷酸鈉注射液1 ml；治療組每周2次肌注地塞米松磷酸鈉注射液1 ml，從注射地塞米松第1天開始每天灌喂血塞通25 mg、脂必妥350 mg和阿侖膦酸鈉5 mg。三組動物均每周2次肌注青霉素5萬U/只，預(yù)防感染，連續(xù)用藥8周。停藥1周后三組動物同時進行有關(guān)指標(biāo)檢測。

1.4 NO的測定 通過測定血漿的NO-3濃度間接反映NO的含量，試劑盒購自南京建成生物工程研究所，采用硝酸鹽還原酶還原法，應(yīng)用722光柵分光光度計進行自動比色讀數(shù)。

1.5 形態(tài)學(xué)觀察 將動物股骨頭沿冠狀面中間劈開，將一半股骨頭用10%福爾馬林固定、5%硝酸溶液脫鈣后，石臘包埋，蘇木精-伊紅染色，光鏡下觀察形態(tài)學(xué)變化，任取10個高倍視野內(nèi)的骨陷窩，計數(shù)空骨陷窩，求空骨陷窩率。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)均用SPSS 10.0軟件進行處理，多組間比較采用方差分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 光鏡觀察 對照組股骨頭軟骨下骨小梁結(jié)構(gòu)正常，脂肪細胞與造血細胞比例正常(圖1A)，空骨陷窩數(shù)為(10.38±3.78)；激素組股骨頭軟骨下骨小梁稀疏、斷裂，脂肪細胞直徑增大，空骨陷窩較多(24.78±7.87)，呈現(xiàn)出股骨頭壞死早期的病理變化(圖1B)；治療組股骨頭軟骨下骨小梁結(jié)構(gòu)較正常，脂肪細胞較少、較小，骨小梁較稀疏、未見斷裂，空骨陷窩較少(15.22±5.49)(圖1C)。

A：對照組骨小梁結(jié)構(gòu)和脂肪細胞比例正常；B：激素組股骨頭骨小梁稀疏、斷裂，脂肪細胞肥大；C：預(yù)防治療組骨小梁結(jié)構(gòu)正常，骨陷窩飽滿

圖1 光鏡下骨結(jié)構(gòu)(HE染色×100)

2.2 血漿NO含量 各組動物血漿NO含量見表1。激素組NO含量明顯低于對照組和治療組，而治療組的NO含量較對照組略低。激素組與對照組之間、激素組與治療組之間NO含量的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，而治療組與對照組之間NO含量無顯著性差異。

3 討論

有文獻報道，聯(lián)合運用血塞通、脂必妥和阿侖膦酸鈉進行預(yù)防性治療，可提高股骨頭血流量，既能改善骨組織結(jié)構(gòu)^[2]，又能改善血液流變學(xué)指標(biāo)^[3]，能預(yù)防或減緩激素性股骨頭壞死。本研究發(fā)現(xiàn)，激素組股骨頭軟骨下骨小梁稀疏、斷裂，脂肪細胞直徑增大，空骨陷窩較多；而聯(lián)合用藥進行預(yù)防性治療后，治療組股骨頭軟骨下骨小梁結(jié)構(gòu)較正常，提示聯(lián)合用藥能預(yù)防或減輕骨組織結(jié)構(gòu)改變。本結(jié)果符合上述研究結(jié)論。

NO是一種源于內(nèi)皮細胞的松弛因子(EDRF)^[4]，是L-精氨酸在NO合成酶和還原型輔酶Ⅱ作用下，通過體內(nèi)途徑合成的。內(nèi)皮細胞產(chǎn)生的NO能松弛血管平滑肌^[5]，使血管舒張，抑制血小板凝集^[6]，改善組織灌流。正常機體由于經(jīng)常受到搏動性血流的不斷刺激，血管內(nèi)皮細胞持續(xù)釋放NO，使血管系統(tǒng)維持一種松弛狀態(tài)，保證組織的正常灌注。本實驗觀察到，激素組血漿NO含量明顯低于對照組(P<0.01)，而聯(lián)合用藥進行預(yù)防性治療后，治療組血漿NO含量較激素組明顯上升(P<0.01)。激素性股骨頭壞死伴隨著血漿NO含量降低，說明NO含量減少是激素性股骨頭壞死的可能機制之一，這與劉長安等^[7]和沙啟樂等人^[8]的報道一致。而聯(lián)合用藥預(yù)防激素性股骨頭壞死的同時，血漿NO含量升高，說明NO含量升高是聯(lián)合用藥預(yù)防激素性股骨頭壞死的作用途徑之一。

在激素性股骨頭壞死中，由于血管內(nèi)皮細胞損害，處于血栓形成的高危狀態(tài)，任何原因引起上述異常的加劇，均可能導(dǎo)致股骨頭滋養(yǎng)血管內(nèi)微血栓形成，導(dǎo)致股骨頭的壞死。脂必妥具有調(diào)脂、降脂作用^[9]。血塞通的主要成份是三七總皂苷，能夠抑制血小板聚集，降低血漿黏度^[10]。聯(lián)合用藥預(yù)防激素性股骨頭壞死的可能機制是通過脂必妥與血塞通相互配合，既降低血脂，降低血漿黏度，又能改善微循環(huán)，改善血管內(nèi)皮功能，維持正常血漿NO水平，從而防止微血栓形成，改善股骨頭血供，預(yù)防了股骨頭的壞死。

參 考 文 獻

［1］ 劉慧松,董天華.藻酸雙酯鈉、二磷酸鹽聯(lián)合應(yīng)用對酒精性股骨頭壞死預(yù)防作用的實驗研究.蘇州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2003,23(5):525-528.

［2］ 李景田,鄒錦慧,吉燕翔,等.預(yù)防用藥對激素性股骨頭組織結(jié)構(gòu)和血流量的影響.解剖學(xué)研究,2006,28(2):100-102.

［3］ 李景田,鄒錦慧,吉燕翔,等.預(yù)防用藥對激素性股骨頭血流量和血液流變學(xué)的影響.中國血液流變學(xué)雜志,2006,16(2):178-181.

［4］ Palmer RMJ.Nitric Oxide release accounts for the biological activity of endothelium derived relaxing factor.Nature,1987,327:524-525.

［5］ Kisher CT,Robillard JE,Bohiken DP.Glucocorlicoid stinulation of blood coagulation factor activities in the fetal lanh.Lab Clin Med,1983,101:569.

［6］ Schultz R.Role of NO in vascular snooth muscle.Tips,1994,235:317.

［7］ 劉長安,張衛(wèi)平,周吉懷,等.激素性股骨頭壞死血漿一氧化氮含量的變化.中華實驗外科雜志,1998,15(6):547-548.

［8］ 沙啟樂,陳曉亮,王英振,等.激素性股骨頭壞死中內(nèi)皮素和一氧化氮含量的變化.中國骨傷,2002,15(6):349-351.

［9］ 徐濟民,陳曙霞,胡婉英,等.脂必妥與安慰劑治療高脂血癥的隨機雙盲多中心研究.新藥與臨床,1997,16:47-51.

［10］ 石淋,范盤生,吳玲,等.三七總皂苷升高頸動脈前列腺素I2及降低血栓素A2.中國藥理學(xué)報,1990,11:294-298.