摘要：目的：觀察川芎嗪(TMP)對大鼠腦血栓形成后血漿磷脂酸(PA)的影響。方法：采用頸內(nèi)動脈直接插管注入凝血酶建立腦血栓形成大鼠模型，并預(yù)防性給予TMP，觀察大鼠腦血栓形成后PA的水平。結(jié)果：實驗驗對照組血漿PA水平(10.51±0.73)μmol/L與正常對照組的(3.77±0.28)μmol/L相比有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，預(yù)防性給予TMP提前干預(yù)的川芎嗪組可以明顯降低血漿PA水平，為(4.28±1.02)μmol/L與實驗對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而生理鹽水組與實驗對照組相比無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：大鼠急性腦血栓形成后血漿PA水平升高，預(yù)防性給予TMP可以抑制血漿PA水平的升高。

關(guān)鍵詞：川芎嗪；大鼠；腦血栓形成；磷脂酸

中圖分類號：R743.P 285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1672－1349(2007)09－0846－02

腦血管病是神經(jīng)系統(tǒng)的常見病與多發(fā)病，其致殘率和致死率均較高，是目前人類疾病的三大致死病因之一，而腦卒中事件中80％為腦梗死。近年來的研究表明磷脂代謝的中間產(chǎn)物血漿磷脂酸(PA)和溶血磷脂酸(LPA)是重要的第二信使，在(心)腦疾病的發(fā)生過程中可能起重要作用。腦卒中時血漿中PA水平的增高與氧自由基的過度形成有關(guān)，PA水平的高低反映腦缺血缺氧的程度。目前針對PA的藥物干預(yù)的實驗報道尚比較缺乏，研究表明川芎嗪(tetramethylpyrazine，TMP)具有活血、化瘀、理氣功能，以及抗血小板聚集、擴(kuò)張小血管和改善微循環(huán)的作用，臨床上廣泛用于治療缺血性腦血管疾病，取得較好療效?；谝陨献饔每紤]川芎嗪是否有可能降低血漿PA的水平。本實驗通過建立大鼠腑血栓形成模型，并預(yù)防性給予川芎嗪，觀察大鼠腦血栓形成后PA的變化以及對PA的影響。

1 材料與方法

1．1 材 料

1．1．1 實驗動物：健康Wistal大鼠30只，體重280 g－300 g，雌雄不限．由山西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。

1．1．2 藥品、試劑及儀器：鹽酸川芎嗪注射液(2 mL含鹽酸川芎嗪40 mg，齊齊哈爾第二制藥廠)；血栓誘導(dǎo)劑凝血酶(500U，長春海王藥業(yè))，LPA測定套試劑(北京泰福仕科技開發(fā)有限公司)；其余普通試劑及儀器由山西醫(yī)科大學(xué)研究生實驗室提供。

1．2 方 法

1．2．1 大鼠腦血栓模型的建立，本實驗動物模型，參照張兆巖等的方法并加以簡化改進(jìn)。術(shù)前禁飲食12 h，大鼠用1％戊巴比妥鈉(30 mg/kg－40 mg/kg)腹腔注射麻醉后，仰臥位固定于手術(shù)臺上，頸正中部縱向切開皮膚，切口約2.5cm，分離頸部肌肉，游離出右側(cè)頸總動脈(CCA)，從CCA分叉處向上分離頸外動脈(ECA)和頸內(nèi)動脈(ICA)。結(jié)扎ECA，然后向顱底方向分離ICA，在顱底處小心分離出翼腭動脈，并結(jié)扎其根部，僅保留ICA入顱底主干，結(jié)扎CCA，暫用2只微型動脈夾間隔一定距離夾閉ICA，在近心端CCA處用眼科剪剪一小口，插入導(dǎo)管(內(nèi)已抽好血栓誘導(dǎo)劑凝血酶20 U加入生理鹽水0.01 mL)固定后，移去近導(dǎo)管端血管夾，少量血液流入導(dǎo)管頭端，放置約10min形成一小栓子，然后移去另一只血管夾，緩慢將此栓子和凝血酶注入ICA后，拔出導(dǎo)管，并將CCA切口處結(jié)扎，縫合切口；術(shù)后單籠飼養(yǎng)(假手術(shù)組手術(shù)操作過程同上，只是不注入血栓栓子和凝血酶，而僅注入等量生理鹽水)。

1．2．2 實驗分組：實驗動物共30只，隨機(jī)分為5組，每組6只。正常對照組；假手術(shù)組予以假手術(shù)，術(shù)后3 h，采血檢測PA；實驗對照組，參照上述方法建立模型，術(shù)后3 h采血檢測PA，川芎嗪組，0.2 ml/kg養(yǎng)血清腦顆粒以生理鹽水溶解，術(shù)前每日1次灌胃，連續(xù)7 d后建立模型，過程以后同實驗對照組；生理鹽水組實驗前每日等量生理鹽水腹腔注射7 d，其余過程同實驗對照組。

1．2．3 血漿PA的測定：使用專用試劑及特殊過濾器，按照操作規(guī)程，經(jīng)腹主動脈取全血約4 mL，置于加有專用抗凝劑的抗凝管中，4 000 r/mm離心10 min，準(zhǔn)確吸取上清1 mL，抽提磷脂成分、濃縮、分離、過濾。最后加入顯色劑于90℃水浴5 min，取出于室溫放置35 min后經(jīng)754紫外分光光度計測定吸光度(OD)值，單位用μmol/L表示。計算公式如下：

PA值=(OD觀測值-OD對照值)×標(biāo)準(zhǔn)濃度30/(OD標(biāo)準(zhǔn)值-OD)對照值)

1．3 統(tǒng)計學(xué)處理：采用SPSS 10.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計處理，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。組間比較用方差分析，兩兩比較用LSD法，P<0.05表示有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

假手術(shù)組PA水平為(3.31±0.44)μmmol/L，實驗對照組血漿PA的水平呈現(xiàn)升高趨勢，結(jié)果為(10.51±0.73)μmol/L，與正常對照組(3.77±0.28)μmoI/L相比，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而經(jīng)川芎嗪提前干預(yù)后，川芎嗪組PA水平升高趨勢得到抑制，為(4.28±1.02)μmol/L，與實驗對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；實驗對照組與生理鹽水組(3.97±0.37)mmol/L相比無統(tǒng)計學(xué)意義。

3 討 論

本研究結(jié)果表明：與正常列照組相比，大鼠腦血栓形成之后，實驗列照組PA明顯增高。在正常情況下，腦內(nèi)自由基被內(nèi)源性酶類迅速滅活。腦缺血后首先出現(xiàn)能量代謝障礙，短時間內(nèi)ATP、磷酸肌酸(CP)、葡萄糖、糖原等均減少，乳酸明顯增加。缺血時cAMP增加，cGMP減少，由于cAMP上升可導(dǎo)致磷脂酶(如磷脂酶A₂，磷脂酶C，磷脂酶D和鞘磷脂酶等)激活，激活后的磷脂酶可以分解磷脂膜，生成多種脂質(zhì)第二信使，如三磷酸肌醇(IP₃)、二酰甘油(DAG)、PA等。PA是PLD作用的直接產(chǎn)物，在細(xì)胞激活狀態(tài)下，PA能引起鈣離子動員，激活或協(xié)同激活細(xì)胞內(nèi)多種酶，如磷酸二酯酶(PDE)、蛋白激酶C(PKC)、還原型尼克酰胺腺膘呤二核昔酸磷酸(NADPH)氧化酶等。在此基礎(chǔ)上PA產(chǎn)生各種細(xì)胞效應(yīng)。因此PA的增高可能是由于缺血缺氧后，氧自由基大量釋放，使磷脂酶活性增高磷脂膜受損所致。所以從理論上講如果缺血始終得不到改善，氧自由基的釋放得不到抑制，PA就一直釋放，處于高水平狀態(tài)。

川芎嗪組PA水平明顯低于實驗對照組，且有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。表明川芎嗪對PA具有一定的降低作用?，F(xiàn)代藥理研究證明，川芎嗪具有不同程度的抑制血小板聚集、抗血栓形成、抑制自由基連鎖反應(yīng)、擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)、提高機(jī)體耐缺氧能力等作用。

本實驗亦觀察到川芎嗪能降低血漿PA水平，表明川芎嗪在防治血栓形成中具有一定的作用。

本文編輯 王雅潔