摘要：目的利用高脂飼料誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化(AS)大鼠模型，觀察益氣活血代表中藥黃芪、三七有效成分黃芪槲皮素(Que)和三七總皂甙(tPNs)抗AS的作用，探討二者單獨(dú)使用及不同比例組方對AS大鼠模型血清基質(zhì)金屬蛋白酶特異性抑制物(TIMP－1)表達(dá)的影響。方法將64只雄性健康wistar大鼠隨機(jī)分為正常組和造模組，正常組10只喂養(yǎng)普通飼料，造模組54只喂養(yǎng)高脂飼料。造模成功后，造模組大鼠停喂高脂飼料改為普通飼料喂養(yǎng)，剩余48只造模組大鼠再隨機(jī)分為6組，用不同藥物干預(yù)灌胃30 d后，取各組大鼠血清用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測血清TIMP－1的表達(dá)。結(jié)果Que、tPNS單用以及2:1組方、3:1組方皆可增加TIMP－1表達(dá)，以3:1組方為最優(yōu)組。結(jié)論Que、tPNS單用及2:1、3:1組方皆可增加TIMP－1表達(dá)，聯(lián)合用藥比單獨(dú)應(yīng)用抗AS效果好，并在一定范圍內(nèi)隨著益氣藥物劑量增加，抗AS作用增強(qiáng)。這可能是益氣活血法抗AS作用機(jī)制之一。

關(guān)鍵詞：動(dòng)脈粥樣硬化；槲皮素；三七總皂甙；基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物

中圖分類號：R543.5 R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1672—1349(2007)04—0326—03

動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是嚴(yán)重危害人類健康的因素之一，其形成涉及許多方面，目前大量研究已證實(shí)基質(zhì)金屬蛋白酶 (MBPs)及其特異性抑制物(TIMPs)在AS的發(fā)生發(fā)展過程中起著十分重要的作用。本實(shí)驗(yàn)通過建立大鼠AS模型，來研究黃芪槲皮素(Que)和三七總皂甙(tPNS)單用及2:1、3:1組方對大鼠血清TIMP－1表達(dá)的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性Wistar大鼠64只(由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，二級)，體重(180±20)g。各組動(dòng)物單籠飼養(yǎng)，自由飲水。

1.2 實(shí)驗(yàn)用藥品、試劑 槲皮素粉劑中西安華琦科技有限公司提供；三七總皂甙粉劑由云南玉溪市維和制藥有限公司提供；川芎嗪片劑由預(yù)新國際龍?jiān)此帢I(yè)有限公司提供；大鼠TIMP－1定量ELISA試劑盒購內(nèi)上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司；其余試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.3 主要儀器 Novapath TM全自動(dòng)酶標(biāo)儀(日本BIO－RAD公司生產(chǎn))，醫(yī)用低溫冰箱(青島海爾公司生產(chǎn))，高速低溫離心機(jī)(德國Eppendorf公司生產(chǎn))，均由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.4 動(dòng)物模型制作及分組

1.4.1 AS模型的建立 健康雄性Wistar大鼠64只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按體重編號，完全隨機(jī)分組，正常組l0只，造模組54只，均自由進(jìn)食、進(jìn)水。正常組喂養(yǎng)普通飼料，造模組喂養(yǎng)AS飼料(蛋黃粉10％、豬油5％、豬膽鹽0.5％、基礎(chǔ)飼料84.5％)，均喂養(yǎng)3個(gè)月。3個(gè)門后隨機(jī)處死2只正常組大鼠，6只造模組大鼠，以觀察造模是否成功。

1.4.2 實(shí)驗(yàn)分組及藥物干預(yù) 造模成功后，AS飼料組大鼠均停喂AS飼料，改為普通飼料喂養(yǎng)，剩余48只大鼠，再隨機(jī)分為6組，每組8只。槲皮素治療組：槲皮素100 mg/(kg·d)；三七總皂甙治療組：二七總皂甙I00 mg/(kg·d)；槲皮素、三七總皂甙2:1組(2:1組)：槲皮素100 mg/(kg·d)、三七總皂甙50 mg/(kg·d)；槲皮素、三七總皂甙3：1組(3:l組)：槲皮素150 mg/(kg·d)、三七總皂甙50 mg/(kg·d)；川芎嗪對照組：川芎嗪200 mg/(kg·d)；正常組：純凈水4 mL/d；模型組：純凈水4 mL/d。各組均灌胃30d。

1.5 標(biāo)本采集與檢測各組大鼠于藥物干預(yù)30 d后，禁食、禁水12 h，從腹主動(dòng)脈取血每只2 mL，注入試管中，2 000 r／min離心15 min，分離出血清，分別做好標(biāo)記，一40℃冷凍，用于檢測血清TIMP－l的表達(dá)。血清HMP－1的檢測采用ELISA法，嚴(yán)格按照說明進(jìn)行檢測。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差

表示，使用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用方差分析和SNK－q檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 藥物治療后各組大鼠血清TIMP－1表達(dá)量比較與模型組相比，各干預(yù)藥物及川芎嗪對照組均可增加AS大鼠血清TIMP－1的表達(dá)，3:1組血清TIMP－l表達(dá)量高于川芎嗪組及各藥物干預(yù)組(P＜0.05或P＜0.01)；槲皮素治療組和三七總皂甙組對增加AS大鼠血清TIMP－1表達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，故不能認(rèn)為槲皮素和三七總皂甙對促進(jìn)AS大鼠血清TIMP－1表達(dá)量不同；可認(rèn)為槲皮素、三七總皂甙、3:1組方、2:1組方與川芎嗪均可增加AS大鼠血清TIMP－1的表達(dá)，3:1組血清TIMP－1的表達(dá)最高，效果優(yōu)于其他干預(yù)藥物及川芎嗪對照組，3:1組為最優(yōu)組。詳見表1。

3 討 論

動(dòng)脈粥樣硬化是嚴(yán)重危害人類健康的因素之一，其形成涉及許多方面，目前大量研究已證實(shí)MMPs及其TIMPs在AS的發(fā)生發(fā)展過程中起著十分重要的作用。

TIMPs是新近發(fā)現(xiàn)的一個(gè)低分子量蛋白質(zhì)家族^[1]，是MMPs的天然性、生理性、內(nèi)源性抑制劑，它通過對MMPs的抑制，在AS病理過程中發(fā)揮重要作用。MMPs通過降解細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)以及影響ECM重建^[2]，導(dǎo)致血管中層平滑肌細(xì)胞(VSMC)侵襲和遷移至內(nèi)膜，VSMC增殖及其從動(dòng)脈中膜向內(nèi)膜遷移是AS斑塊形成的重要原因之一，而TIMPs則可抑制這一過程，這與AS斑塊形成病理過程密切相關(guān)。

AS屬于中醫(yī)學(xué)“胸痹”“中風(fēng)”“眩暈”等范疇，為本虛標(biāo)實(shí)之證，氣虛血瘀證是AS辨證臨床常見證型之一，因此，益氣活血是治療AS的中心環(huán)節(jié)。而通過益氣活血法達(dá)到標(biāo)本兼治的作用正是治療本病之關(guān)鍵。黃芪為補(bǔ)氣良藥，三七為祛瘀佳藥，槲皮素是益氣代表藥黃芪的有效成分，三七總皂甙是活血止血藥三七的主要成分，二藥有效成分合理配伍能明顯改善AS病人的臨床癥狀^[3，4]。槲皮素是益氣代表中藥黃芪所含黃酮類物質(zhì)的一種，是黃芪的有效成分之一。槲皮素有保護(hù)心肌，減輕心肌缺血再灌注損傷作用，能夠抑制脂質(zhì)過氧化物(LPO)，減少LPO含量，增加超氧化物歧化酶(SOD)的活性，保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞^[5，6]。通過抑制炎癥反應(yīng)，抑制SMC增殖和泡沫細(xì)胞形成而抗AS。三七總皂甙是三七的主要成分，可抑制血小板(PLT)聚集，增加心和腦血流量，有抗氧自由基，減輕缺血再灌注損傷，糾正細(xì)胞流變性異常，促進(jìn)血液循環(huán)，顯著抑制血栓形成^[7]，可提高纖溶酶原激活物的活性^[8]，起到抗栓抗凝的作用。川芎嗪^[9]是明確的可抗AS的藥物，有清除氧自由基，保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞，抗PLT聚集抗栓，降低血黏度而改善微循環(huán)，增強(qiáng)纖溶系統(tǒng)活性，增加心腦血流量，改善心肌細(xì)胞代謝^[10]，保護(hù)損傷的內(nèi)皮細(xì)胞等作用。

本實(shí)驗(yàn)表明：正常組TIMP－1表達(dá)最少，且少于AS模型組(P＜0.01)，這可能與正常組MMP－9表達(dá)很少有關(guān)。AS模型組TIMP－1表達(dá)很少，明顯少于藥物干預(yù)組(P＜0.05或P＜0.01)。這與Galis等^[11]的研究相一致。黃芪槲皮素、三七總皂甙單味用藥和二者2:1、3:1組方以及川芎嗪均能增加AS模型大鼠血清TIMP－l的表達(dá)，從而發(fā)揮抗AS的作用。二者有效成分配伍有協(xié)同作用，治療效果更佳，尤以3:1組療效最佳，并優(yōu)于對照組。這就提示：黃芪槲皮素、三七總皂甙單味用藥和二者2:1、3:1組方均對AS有治療作用，并在一定劑量范圍內(nèi)，隨著益氣藥物劑量的增加，其治療作用相應(yīng)增強(qiáng)。

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作者簡介：張永波(1981—)，男，現(xiàn)為山西醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院碩士研究生(郵編：030001)；李麗，工作于山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院。

(本文編輯 郭懷印)

注：“本文中所涉及到的圖表、注解、公式等內(nèi)容請以PDF格式閱讀原文”