中圖分類號：R541 R256.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1672—1349(2007)04—0283—03

動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)導(dǎo)致的心腦血管疾病是嚴(yán)重危害人類健康的一大類疾病，病死率和致殘率居所有疾病之首，在發(fā)達(dá)國家被稱為“頭號殺手”，是世界范圍的主要死亡原因。近年來有關(guān)AS的發(fā)生機(jī)制提出了新的學(xué)說，該學(xué)說以損傷應(yīng)答和炎癥學(xué)說為中心，而內(nèi)皮祖細(xì)胞介導(dǎo)的損傷和修復(fù)反應(yīng)則為AS的始動因素和重要環(huán)節(jié)，內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial pro-genitor cells，EPCs可能成為中醫(yī)藥抗動脈粥樣硬化研究的新方向。

1 當(dāng)代醫(yī)學(xué)對內(nèi)皮祖細(xì)胞的研究現(xiàn)狀

1.1 內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能損害是動脈粥樣硬化疾病的重要病理機(jī)制近年來研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)皮細(xì)胞不僅僅是血管壁的單層細(xì)胞，而且是一個具有內(nèi)分泌功能的器官，各種冠心病危險因素導(dǎo)致的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能損傷是動脈粥樣硬化、冠心病介入治療后再狹窄(restenosis，RS)共有的始動病理機(jī)制^[1－3]。各種心血管危險因素可對內(nèi)皮細(xì)胞造成過度損害，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞凋亡和內(nèi)皮完整性喪失，從而引起血管內(nèi)皮的滲透性增加和平滑肌細(xì)胞增生，使得單核細(xì)胞易于遷移，并伴有脂質(zhì)的沉積和炎癥因子的激活，最后形成動脈粥樣斑塊。

加速損傷內(nèi)皮的修復(fù)可有效抑制動脈粥樣硬化的進(jìn)展和平滑肌細(xì)胞的增殖，對于動脈粥樣硬化早期和經(jīng)皮冠狀動脈介入(percutaneous coronary intervention，PCI)治療后再狹窄的防治有重要意義。藥物涂層支架(drug－eluting stent，DES)通過抑制平滑肌細(xì)胞的增殖而降低再狹窄的發(fā)生率，然而，DES的藥物涂層也嚴(yán)重抑制了內(nèi)皮細(xì)胞的修復(fù)，這是造成DES置入后支架內(nèi)遲發(fā)性血栓事件增多的重要病理環(huán)節(jié)^[4]。由于成熟的內(nèi)皮細(xì)胞為終末分化細(xì)胞，其受損后自我增生、分化、修復(fù)能力有限，因而如何加速受損內(nèi)皮的修復(fù)成為動脈粥樣硬化疾病和再狹窄治療領(lǐng)域一個迫切需要解決的重大問題^[5]。

1.2 內(nèi)皮祖細(xì)胞在內(nèi)皮細(xì)胞的損傷修復(fù)中發(fā)揮重要作用 研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮祖細(xì)胞在受損血管內(nèi)皮的自我修復(fù)中發(fā)揮重要作用，EPCs是指出生后機(jī)體中存在的能特異性歸巢于血管新生組織并分化成內(nèi)皮細(xì)胞的一群干／祖細(xì)胞，它不僅參與胚胎時期血管生成(angiogenesis)，還與損傷的血管內(nèi)皮的愈合和血管新生(neovascularization)密切相關(guān)^[6]，尤其是對于前者具有重要的促進(jìn)作用。Asahara等^[7]于1997年首先發(fā)現(xiàn)成體外周血中存在能分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞(表面標(biāo)志為CD34^＋)，并將其稱為EPCs。成人EPCs主要定居于骨髓，在某些生理、病理狀態(tài)下，可從骨髓釋放，并在外周血循環(huán)中運(yùn)行，遷移到局部血管損傷處，分化成成熟的血管內(nèi)皮細(xì)胞，從而修復(fù)損傷內(nèi)皮、促進(jìn)血管再內(nèi)皮化。由于內(nèi)皮損傷是動脈粥樣硬化和再狹窄的始動機(jī)制，而內(nèi)皮祖細(xì)胞在內(nèi)皮的結(jié)構(gòu)和功能損傷中的修復(fù)具有重要的作用，因而內(nèi)皮祖細(xì)胞成為心血管基礎(chǔ)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)和關(guān)鍵問題之一。

日益增多的證據(jù)^[8－10]顯示，通過各種途徑向體內(nèi)移植或動員機(jī)體自身的EPCs可以促進(jìn)損傷血管內(nèi)膜的再內(nèi)皮化、抑制內(nèi)膜的超常增生，提高缺血組織的血管新生能力，從而為治療缺血性心臟病、血管介入治療后再狹窄防治和糖尿病血管病變提供了新思路。利用lacZ基因編碼的β—半乳糖苷酶可與x－gal接觸后呈現(xiàn)藍(lán)色，且不受細(xì)胞分化影響的這一特性，lacZ基因被廣泛用于細(xì)胞的譜系分析，有作者將轉(zhuǎn)Tie2/lacZ基因小鼠的骨髓移植給裸鼠(或FVB/N小鼠)，并行頸動脈損傷，予他汀類藥物干預(yù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)他汀類藥物能夠明顯促進(jìn)裸鼠(或小鼠)損傷內(nèi)膜的再內(nèi)皮化，且再內(nèi)皮化的組織中x－gal染色陽性的細(xì)胞數(shù)也明顯多于對照組，從而證實(shí)再內(nèi)皮化的內(nèi)皮細(xì)胞多來源于骨髓細(xì)胞，而他汀類藥物通過動員骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞能加速損傷內(nèi)膜的再內(nèi)皮化^[11]。運(yùn)用同一方法證實(shí)雌激素、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和基質(zhì)細(xì)胞衍生因子－1(SDF－1)均具有動員骨髓EPCs，修復(fù)損傷內(nèi)皮細(xì)胞的能力^[12－14]，尤其是VEGF和RDF－1對于EPCs動員、分化和歸巢均有促進(jìn)作用^[15]。此外，EPCs可以促進(jìn)人工移植物的內(nèi)皮化，動物實(shí)驗(yàn)顯示利用EPCs體外擴(kuò)增后再注射入體內(nèi)方法都可以促進(jìn)移植物內(nèi)皮化^[16]。關(guān)于EPCs的臨床研究業(yè)已初步開展，小規(guī)模研究發(fā)現(xiàn)自身動員或移植EPCs能夠用改善心肌梗死后心功能和外周血管疾病血管新生^[17]。

1.3 冠心病人群中內(nèi)皮祖細(xì)胞的數(shù)量和功能受損 冠心病病人的外周循環(huán)中EPCs數(shù)量和功能受到不同程度的損傷，vasa等^[18]發(fā)現(xiàn)冠心病病人外周血EPCs數(shù)量較正常人減少40％，后續(xù)研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)冠心病病人循環(huán)血液中的EPCs數(shù)量和遷移能力與Framingham心血管危險因子呈負(fù)相關(guān)^[19]。老年和糖尿病也是冠心病的重要危險因索，研究者發(fā)現(xiàn)老年和糖尿病病人組的EPCs的數(shù)量減少，其遷移、歸巢、分化功能均明顯受到限制^{[20、21]}。故可以推測在心血管高危人群中由于循環(huán)EPCs的數(shù)量和功能均受到不同程度的抑制，內(nèi)皮細(xì)胞損傷后不能得到有效修復(fù)，最終導(dǎo)致動脈粥樣硬化進(jìn)展和再狹窄的發(fā)生。

鑒于以上問題，深入研究骨髓中內(nèi)皮祖細(xì)胞遷移、歸巢、黏附和修復(fù)損傷內(nèi)皮作用的分子機(jī)制和調(diào)控因素，及開發(fā)平臺以篩選能夠動員骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞修復(fù)損傷內(nèi)皮細(xì)胞的藥物，對于動脈粥樣硬化疾病和PCI術(shù)后再狹窄的防治具有重要創(chuàng)新性價值和社會經(jīng)濟(jì)價值。

2 內(nèi)皮祖細(xì)胞的中醫(yī)藥研究現(xiàn)狀

近年來的一系列研究發(fā)現(xiàn)，某些活血化瘀、益氣、補(bǔ)腎類中藥具有良好的內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用。黃芪的主要成分黃芪多糖^[22]對動脈粥樣硬化內(nèi)皮細(xì)胞和對抗氧化損傷具有良好的內(nèi)皮保護(hù)功能；丹參水溶性成分丹酚酸B^[23]能夠減少動脈粥樣硬化家兔血漿血栓素B₂(TXB₂)、ET濃度，對家兔動脈粥樣硬化模型內(nèi)皮細(xì)胞具有保護(hù)作用；水蛭素可以拮抗凝血酶誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生和活化基質(zhì)金屬蛋白酶－2，從而保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞^[24]。既然中藥能夠抑制球囊損傷血管后的內(nèi)膜增殖，對內(nèi)皮細(xì)胞具有保護(hù)作用，而EPCs在內(nèi)皮損傷后的修復(fù)過程中扮演著重要的角色，中藥的內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用是否通過動員骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞修復(fù)損傷內(nèi)皮而達(dá)到的，從而發(fā)揮保護(hù)血管內(nèi)皮、防治動脈粥樣硬化和PCI術(shù)后再狹窄的作用，是一個值得探索的重耍問題。日前，關(guān)于內(nèi)皮祖細(xì)胞的中醫(yī)藥研究業(yè)已引起研究者拘重視。文獻(xiàn)報道，丹參素^[25，26]干預(yù)組可促進(jìn)外周血EPCs擴(kuò)曾，并顯著改善外周血EPCs的黏附、遷移和增殖能力，丹參酮ⅡA則無明顯影響，低劑量復(fù)方丹參注射液^[27]顯著提高培養(yǎng)EPCs數(shù)量和功能，高劑量復(fù)方丹參注射液則反之。有學(xué)者建立映血后肢大鼠模型^[28]，補(bǔ)腎生血藥通過動員骨髓EPCs的遷移、分化，促進(jìn)局部的血管新生，達(dá)到改善供血目的。然而，目前關(guān)于EPCs的中醫(yī)藥研究尚處于起步狀態(tài)，無論是理論和實(shí)驗(yàn)研究均需進(jìn)一步深入。

3 內(nèi)皮祖細(xì)胞的中醫(yī)藥研究思路

3.1益氣活血法“邪之所湊，其氣必虛”，從微觀辨證分析，正是由于正氣不足，防御功能減弱，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞易于被外邪損傷，引起功能和結(jié)構(gòu)的障礙，進(jìn)一步可導(dǎo)致動脈粥樣硬化和血栓形成，引起瘀血內(nèi)停，因而內(nèi)皮損傷多表現(xiàn)為氣虛血瘀證，其修復(fù)需以益氣活血法為主。當(dāng)代多個研究發(fā)現(xiàn)益氣活血中藥能夠調(diào)節(jié)骨髓干細(xì)胞的生理活性，李連達(dá)等^[29]研究發(fā)現(xiàn)雙龍方(人參、丹參)則能夠促進(jìn)骨髓單核細(xì)胞在心肌梗死梗死區(qū)域歸巢、分化、擴(kuò)增，產(chǎn)生大量新生的心肌細(xì)胞及心肌小血管，促進(jìn)梗死心肌的修復(fù)。有文獻(xiàn)報道^[30]自體骨髓單核細(xì)胞抑制聯(lián)合益氣話血中藥治療可以迅速改善下肢缺血病人的局部血液循環(huán)，從而改善病人的疼痛及冷感；益氣活血中藥能夠減輕及治療骨髓基質(zhì)細(xì)胞的放射損傷^[31]。因而，認(rèn)為益氣活血法對于EPCs具有潛在的動員作用。通冠膠囊具有良好的內(nèi)皮保護(hù)作用，實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)抑制兔髂動脈球囊血管損傷后的早期內(nèi)膜增殖，減少內(nèi)膜／中層面積比，抑制血管中層平滑肌細(xì)胞增生，抑制血管內(nèi)膜PDGF－B mRNA及TGF－β₁的表達(dá)，抑制內(nèi)膜細(xì)胞外基質(zhì)合成^[32，33]。在預(yù)試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)通冠膠囊能夠增加急性冠脈綜合征病人外周內(nèi)皮祖細(xì)胞的數(shù)量和功能的作用，其動員EPCs的作用值得進(jìn)一步探討。

3.2補(bǔ)腎活血法由于年老是冠心病的重要的危險因素，而人的衰老決定于腎氣的盛衰，即《內(nèi)經(jīng)》所謂：“年四十而陰氣自半也”“丈夫……五八腎氣衰”“女子……七七任脈虛，太沖脈衰少，天癸竭，地道不通，故形壞而無子”。這些皆說明冠心病的發(fā)生與腎中精氣的虛衰有著密切的關(guān)系。若腎陰虧虛，不能滋養(yǎng)五臟之陰，心陰虧虛，脈道失潤，心臟及其血脈失其濡養(yǎng)，而發(fā)“心痛”，即所謂“不榮則痛”；命火式微，不能上濟(jì)心陽，引起心氣不足，鼓動無力而為瘀血；腎陽虛衰，脾陽亦衰，陰寒內(nèi)盛，痰濁宜生。上述過程中產(chǎn)生的血瘀、痰濁、寒凝等病理產(chǎn)物，痹阻心脈，即發(fā)心痛，即所謂“不通則痛”，故腎臟陰陽的虛衰和失調(diào)是為冠心病的重要病理基礎(chǔ)。因而，以補(bǔ)腎為基礎(chǔ)的補(bǔ)腎活血法為冠心病治療的重要治法^[34]。而“腎主骨生髓”，只有腎中經(jīng)氣充盈，才能充盈骨髓，EPCs來源于骨髓，因而可以推測補(bǔ)腎活血對于EPCs具有動員作用。

愈來愈多的證據(jù)顯示，內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡和再生的平衡可能決定AS的進(jìn)程和程度，來自骨髓的EPCs對于動脈“樹”自穩(wěn)態(tài)的維持至關(guān)重要。所以，利用EPCs來平衡內(nèi)皮細(xì)胞的再生和凋亡，恢復(fù)內(nèi)皮細(xì)胞的功能，修復(fù)損傷的血管有望成為將來治療的重要手段和策略。初步研究發(fā)現(xiàn)某些補(bǔ)腎、益氣、活血中藥對于EPCs的增殖和功能具有動員作用，為中藥抗動脈粥樣硬化作用提供了新的作用靶點(diǎn)。今后，將在建立動脈內(nèi)膜損傷模型的基礎(chǔ)上，結(jié)合細(xì)胞譜系分析的方法進(jìn)一步探討中藥動員EPCs的作用。

參考文獻(xiàn)：

[1] Endemann DH，Schiffrin EL．Endothelial dysfunction[J]．J Am SocNephrol．2004，15：1983—1992．

[2] Lenman Amir．Restenosis：Another“dysfunction”of the endothelium[J]．Circulation，2005，111(1)：8—l0．

[3] Ross R．Atherosclerosis：An inflammatory disease[J]．N Engl J Med，1999，340：115—126．

[4] Joner M，F(xiàn)inn AV，F(xiàn)arb A，et al．Pathology of drug－during stentsin humans：Delayed healing and late thrombotic risk[J]．J Am CollCardiol，20(16，48(1)：193—202．

[5] Losordo DW，lsner JM，Diaz－Sandoval LJ．Endothelial Recovery：The next target in restenosis preventon[J]．Circulation，2003，107：2635—2637．

[6] Miail H，Wolfgang F，Peter CW．Endothelial progenitor cells：Mobi-lization，differentiation and homing[J]．Arterioscler Thromb Vasc Bi-ol，2003，23：1185—1189．

[7] Asahara T，Murobara T，Sullivan A，et al．Isolation of putativeve pro-genitor endothelial cells for angiogenesis[J]．Science，1997，275：964—967．

[8] lwakura A，Luedemann C，Shastry S，et al．Estrogen－mediated，en-dothelial nitric oxide synthase－dependent mobilization of bone marrow－derived endothelial progenitor cells contributes to reendothelialization afterarteral injury[J]．Circulation，2003，108(25)：3115—3121．

[9] Walter DH，Zeiher A，Dimmeler s Effects of statins on endothelitun andtheir contribution to noavascularization by mobilization of endothelial pro-genitor cells[J]．Coronary Artery Discase，2004，5(5)：235—242．

[10] Naruse K，Hamada Y，Nakashima E．Therapeutic neovascularization usingcord blood－derived endothelial Progenitor cells for diahetic neuropathy[J]．Diabetes，2005，54(6)：1823—1828．

[11] Walter DH，Ritting K，Bahlmann FH．et al．Statin therapy acceleratesreendothelialization：A novel effect involving mobilization and incorporati‘onOf bone marrow－derived endothelial progenitor cells[J]．Circulation，2002，105：3017—3024．

[12] Strchlow K，Wemer N，Berweiler J，et al Estrogen increases bone－marrow derived endothelial progenitor cell production and diminishesneointima formation[J]．Circulation，2001，103：634—637．

[13] Tafuro S，Zentilin L，Arsic N，et al．Recruitment of bone marrowstem cells in postnatal neovascularization induced by VEGF genetransfer using AAV vectors and characterization of circulating en-dothelial progemtor cells[J]．Gene Therapy，2004，1：S125—S126．

[14] Yamaguchi J．Kusano KF．Masuo()，et al．Stromal cell－derivedfactor－l effects on ex vivo expanded endothelialprogenitor cell re-crultlllenl for ischemic neovasularizafiou[J]．Circulation，2003，107：1322—1328

[15] Askari AT，Unzeks，Popovic ZB，et al Effect of stromal cell－de-rived factor 1 on stem cell homing and tissue regeneration in ischemiccardiomyopathy[J]．Lancet，2003，362：697—703．

[16] Grime DP，Ehsan A，Melo LG，et al．Isolation and tranplantion ofautologous circulation endothelial cells into denuded vessels and pros-thetic grafts：Implications for cell－based vascular therapy[j]．Cir－cuation，2003，108：2710—2715．

[17] Victor J，Massimiliano G，Alok S，et al．Therapeutic potential of e-dothelial progemtor cells in cardiovascular diseases[J]．Hyperten-sion．2005，46：7—18．

[18] Vasa M，F(xiàn)ichtlscherer s，Aicher A，et al．Number and mtgratoryactivity of circulation endothelial progenitor cells inversely correateswith risk factors for coronary artery disease[J]．Cir Res，2001，89：el—e7．

[19] Wemer Nikos，Nickenig Georg．Influence of cardiovascular risk fac-tors on endothelial progenitor cells：Limitations for therapy[J]．Arte-riosclerosis，Thrombosis Vascular Biology，2006，26(2)：257—266．

[20] Rauscher FM，Goldschmidt－Clermont PJ，Davis BH，et al．Aging，progenitor cell exhaustion and atherosclerosis[J]．Circulation，2003，108：475—463．

[21] Tepper OM，Galiano RD，Capla JM，et al．Human endothelial pro-gemtor cells from typeⅡdiabetes exhibit impaired proliferalion．a(chǎn)d-hesion，and incorporation into vascular structures[J]．Circulation，2002，106：2781—2786．

[22] 楊五彪，陳群力，馬靈筠．黃芪多糖對兔動脈粥樣硬化血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響[J]．陜西醫(yī)學(xué)雜志，2005，34(8)：914—918．

[23] 張艷軍，張發(fā)艷，范英昌．丹酚酸B、丹參酮ⅡA對家兔動脈粥樣硬化模型內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響[J]．天津中醫(yī)藥，2005，22(4)：328—330．

[24] 王敏，張維東，崔連群，等．水蛭素抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶－2的生成及活化[J]．細(xì)胞生物學(xué)雜志，2004，26(4)：409—412．

[25] 肖剛峰，張懷勤，黃曉燕，等．丹參的兩種主要成分對培養(yǎng)內(nèi)皮祖細(xì)胞藥理作用研究[J]．中醫(yī)藥學(xué)刊，2006，24(6)：1035—1037．

[26] 肖剛峰，張懷勤，季亢挺，等．丹參素對體外培養(yǎng)內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量和功能的影響[J]．華西藥學(xué)雜志，2006，21(3)：232—234．

[27]季亢挺，張懷勤，楊鵬麟，等．復(fù)方丹參注射液對內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量和功能的影響[J]中國中藥雜志，2006，31(3)：246—249． [28]梁天成，黃家應(yīng)，向友，等．補(bǔ)腎生血藥促進(jìn)大鼠缺血后肢血管新生的實(shí)驗(yàn)研究[J]．中國現(xiàn)代普通外科進(jìn)展，2006，9(3)：165—167．

[29] 李連達(dá)，張榮利，劉成源，等．雙龍方與自體骨髓單個核細(xì)胞經(jīng)心導(dǎo)管移植對中國小型豬心肌梗死的影響[J]．中國處方藥，2003，12(12)：999—1004．

[30] 楊博華，秦建輝，朱齡群，等，自體骨髓單個核細(xì)胞移植聯(lián)合益氣活血中藥治療下肢動脈缺血性疾病23例[J]．中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報，2005，l(3)：28—30．

[31] 王炳勝，劉秀芳，王濤，等．益氣活血中藥對小鼠放射損傷骨髓基質(zhì)細(xì)胞生長的影響[J]．中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2001，7(3)：46—47．

[32] 祁建勇，張敏州，程康林，等．通冠膠囊對球囊成形術(shù)后血管病理形態(tài)的影響[J]．中國中醫(yī)急癥，2006，15(6)：630—631．

[33] 程康林，張敏州，李新梅，等．通冠膠囊對血管成形術(shù)后血管平滑肌細(xì)胞凋亡的影響[J]．中華實(shí)用中西醫(yī)雜志，2005，18(24)：1957—1958．

[34]段景文，王旨洲．補(bǔ)腎活血法治療冠心病心絞痛56例[J]．陜西中醫(yī)，2006，27(2)：131—132．

作者簡介：張敏州(1953—)，男，畢業(yè)于中山醫(yī)科大學(xué)，教授，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，本刊編委，現(xiàn)工作于廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院(郵編：510120)；王磊、曹愛琴，工作于廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院。

(本文編輯 郭懷印)