開放科學（資源服務(wù)）標識碼（OSID）：

Studyon Tissue Cultureand Rapid Propagation System of Dendrolirium lasiopetalum

CHEN Mei-peng12，CHENGuan-ming1，，LIHong-yang12 etal（1.Snya Sci-TchAcademyofHainanNational Breedingand Multiolication，Sanya，Hainan572O;2.Sanya InstituteofBreedingandMultiplicatio，Hainan University，Sanya，Hainan500）

AbstractTheapsuleofDendodimlsiopetaumasusedasexplants，ndtesdgerinationtest，proliferationtestandotingseedlingestwerecariedoutbysinglefactorexperimentaldesign.TheesultsshowedthathehighestedgminationatesinNveberTe optimal medium for seed germination was 1/2 MS +25 g/L sugar +8g/L carrageenan +25g/L potato powder ^?+0 . 1 mg/L NAA and 1/2 MS + （20 25g/L sugar +8g/L carrageenan +25g/L potato powder+O.1 mg/L NAA+O.1 g/L AC.The maximum germination rate of seeds was 70% at 0.1g/L AC.The best proliferativehormones were6-BA，NAAand2，4-Dwerenotsuitablefor proliferation.Theoptimumculture medium was I /2MS+25g/L sugar +8g/L carrageenan+2 mg/L 6-BA. The subculture period was 9O days，the shoot bud multiplication coefficient of sedlingswas3.28；enthesdingsereuluredunderaklightcoditoswitoutcutingthoot，teotialultiplicationdi was1/2 MS + sugar 25g/L⁺ agar8 g/L+6-BA 3 mg/L，with a regenerationcycle of9O days，and the shoot bud multiplication coefficient was 3.60；the addition of 30g/L potato flour to the rooting and fattening medium hada significant efect on the shoot buds，with an average shoot of 2.43；the addition of 20g/L banana flour to the rooting and fattening medium had a significant effect onroot growth，with an average root coefficient of 2.42cm ； the optimal rooting and fattening medium combination was 1/2 MS + sugar 25g/L+ agar 8 potato flour + （20 20g/L bananaflour.ItishopedthatafastmultiplicationtechnologysystemforDendroliriumlsiopetalumcanbeestablished，itsenticre sourcescanbepreseved，andacertainasisfateralandtecnicalreferecevluecaeprovidedforfuturedevelopmennduilo Key wordsOrchidaceae;Dendrolirium lasiopetalum;Phenological period;Sprout;Multiplication;Roting and strong seedling

白綿毛蘭（Dendroliriumlasiopetalum）為蘭科絨蘭屬附生蘭，生長在海拔 1200～1700m ，附生于近溪流的樹木、巖石上，在中國分布于香港、海南東南部，野生的白綿毛蘭相繼在福建、廣東被發(fā)現(xiàn)[1-3]，在國外分布于尼泊爾、泰國、越南、不丹、柬埔寨、印度、老撾、緬甸。

根狀莖直徑約 5mm ，匍匐生長。假鱗莖為紡錘形，距根莖 1.5～5.0cm ，生于根莖上，長為 3.0～7.5cm ，粗為 1.5～ 3.5cm ，先端有3～5片葉子。葉長 12～30cm ，葉寬 1.5～ 5.0cm ，葉為長圓狀披針形或橢圓形，葉兩端漸尖，具8～14條主脈?；ㄐ驈募禀[莖基部發(fā)出，有1～2個，長 10～20cm 不超出葉面?；ㄐ蜉S有柔軟、厚密的白綿毛，白綿果成熟時毛脫落，僅在花序軸上半部殘存有白色綿毛，基部具6～8枚膜質(zhì)鞘。苞片長近 1cm ，寬 4～5cm ，為卵狀披針形，背面被白色綿毛，先端長漸尖?；ü！⒆臃烤鼙话拙d毛，長2～3cm 。背面萼片為披針形，密被白色或淡灰黃綿狀毛?；榛ò昃€形，長約 14mm ，寬 1mm ，先端漸尖。唇瓣輪廓為卵形，長約 11mm ，寬 1mm 。蒴果為圓筒狀， 2.5～4.0cm× 約4mm ，幼時具白色綿質(zhì)毛。花期1—4月，果期8月[4-5]。

目前我國對白綿毛蘭組織快繁研究還未有相關(guān)報道，缺少相關(guān)的科學參考依據(jù)，不利于白綿毛蘭資源保護與利用，筆者開展白綿毛蘭組培快繁技術(shù)研究，對保護白綿毛蘭種質(zhì)資源具有重要意義。

1材料與方法

1.1材料以海南文昌市蘭科植物種質(zhì)資源圃的白綿毛蘭蒴果為試驗材料。

1.2 方法

1.2.1白綿毛蘭花果物候期觀察。利用2年時間，觀察引種栽培于資源圃的白綿毛蘭開花結(jié)果的時間、果成熟時果皮的變化、種子的顏色。

1.2.2外植體清洗消毒。以白綿毛蘭蒴果為外植體，因其蒴果密被綿毛，果皮覆滿青苔和雜質(zhì)。將洗潔精涂于白綿毛蘭蒴果，用軟試管刷刷洗干凈蒴果，后將蒴果置于自來水流水下沖洗 1～2h 備用。

把沖洗干凈的白綿毛蘭果放置于無菌超凈工作臺中，先用 75% 乙醇消毒蒴果 30s ，再用 3% 次氯酸鈉消毒蒴果15min ，每個消毒步驟均用無菌水沖洗蒴果5～6遍。

1.2.3種子顯微觀察。選擇種子萌發(fā)率最高月份的白綿毛蘭蒴果，用手術(shù)刀切開果，在體視顯微鏡下觀察蒴果中種子的形態(tài)、顏色。

1.2.4種子萌發(fā)。把白綿毛蘭蒴果置于無菌接種盤中，用無菌濾紙吸干蒴果水分，再用無菌手術(shù)刀切除蒴果兩端，后切開果，把每個蒴果中的種子一分為二均勻播撒于種子萌發(fā)培養(yǎng)基上。培養(yǎng)基 pH 為 6.0，210°C 高壓滅菌 20min （下同）。篩選種子萌發(fā)最優(yōu)培養(yǎng)基，每個處理組各播種10瓶培養(yǎng)基，避光培養(yǎng)7d后光照培養(yǎng)，統(tǒng)計不同培養(yǎng)基白綿毛蘭種子的萌發(fā)率；篩選不同月份的白綿毛蘭種子的萌發(fā)率，每個試驗處理組各播種6瓶培養(yǎng)基，分別進行光照培養(yǎng)和避光培養(yǎng)，避光培養(yǎng)7、14d后光照培養(yǎng)，統(tǒng)計不同月份的白綿毛蘭蒴果中種子的萌發(fā)率，篩選蒴果中種子萌發(fā)最高的月份。1.2.5增殖試驗。白綿毛蘭增殖試驗采用種子無菌播種所獲的組培小苗進行不定芽增殖，對組培小苗采用切除苗根和不切除苗根處理，培養(yǎng)方式有光照培養(yǎng)和弱光培養(yǎng)。以1/2MS+25g/L 糖 +8g/L 卡拉膠作為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的激素6-BA、NAA和2，4-D，將白綿毛蘭組培小苗分別接種于添加不同濃度激素的培養(yǎng)基上，每個處理30株，每瓶5株，重復3次。培養(yǎng)室溫度 23°C ，光照強度 1000～2000lx 光照時間 12h/d 。培養(yǎng) 90d 統(tǒng)計白綿毛蘭組培小苗不定芽增殖系數(shù)。

1.2.6生根壯苗培養(yǎng)。挑選無菌健壯、長勢一致、株高 3cm 左右的白綿毛蘭組培小苗，切除小苗苗根，以 1/2MS+25g/L 糖 +8g/L 卡拉膠作為基本培養(yǎng)基，分別接種在添加不同濃度的馬鈴薯粉和香蕉粉的生根壯苗培養(yǎng)基上。光照培養(yǎng)條件下，每個處理30株，每瓶5株，重復3次。培養(yǎng)90d統(tǒng)計株高、葉數(shù)、芽數(shù)、根長、根數(shù)。

1.3數(shù)據(jù)分析采用SPSS26.0軟件對試驗數(shù)據(jù)進行顯著性差異分析。

2 結(jié)果與分析

2.1花果物候期 對引種栽培的白綿毛蘭進行花果物候期觀察。12月底至1月初左右，白綿毛蘭出現(xiàn)花苞。1月中旬左右，白綿毛蘭出現(xiàn)花芽。2月初左右，白綿毛蘭開花。3月中旬左右，白綿毛蘭花謝結(jié)果。從花苞發(fā)育到花芽需 15～ 20d，花期為45d左右，白綿毛蘭可以不借助外力進行自花授粉并結(jié)實，白綿毛蘭的花果均密被白色綿毛。

白綿毛蘭蒴果成熟時，顏色由綠色逐漸變?yōu)榈S色，果的白色綿毛逐漸脫落。果經(jīng)過200d左右成熟，10月種子逐漸成熟，成熟的種子顏色呈褐色。到12月蒴果開始出現(xiàn)開裂現(xiàn)象。通過對白綿毛蘭果物候期觀察，未成熟的種子顏色呈淡黃色，切開的種子會出現(xiàn)褐化變黑現(xiàn)象（圖1）。

圖1白綿毛蘭種子顏色

Fig.1Dendroliriumlasiopetalumseedcolor

2.2種子形態(tài)白綿毛蘭蒴果長 4cm 左右，寬 0.5cm 左右（圖2），將11月成熟未開裂的白綿毛蘭蒴果切開，置于體視顯微鏡下觀察，白綿毛蘭蒴果中種子數(shù)量極多、微小，形似稻谷籽粒狀，充滿整個果腔，呈褐色，種子吸附于白色銀絲上（圖3）。

2.3種子萌發(fā)培養(yǎng)基篩選以11月的白綿毛蘭蒴果作為外植體，篩選種子萌發(fā)最適培養(yǎng)基。種子萌發(fā)以1/2MS和MS作為基本培養(yǎng)基，添加有機物（馬鈴薯、香蕉、椰子水）、活性炭、生長激素NAA，共配制10種種子萌發(fā)培養(yǎng)基。在避光培養(yǎng)7d后光照培養(yǎng)條件下，種子萌發(fā)最優(yōu)的培養(yǎng)基為1/2MS+25g/L 糖 +8g/L 卡拉膠 +25g/L 馬鈴薯粉 +0.1mg/L NAA 和 1/2MS+25g/L 糖 +8g/L 卡拉膠 +25g/L 馬鈴薯粉 + 0.1mg/LNAA+0.1g/LAC （表14和5）。

白綿毛蘭種子在避光培養(yǎng)7d后光照培養(yǎng)條件下（表1），有機物只添加了馬鈴薯粉的種子萌發(fā)培養(yǎng)基，種子萌發(fā)率最高為 70% ，表1中4和5的種子萌發(fā)培養(yǎng)基的組培小苗長勢最好（圖4）。白綿毛蘭蒴果中的種子無菌播種48d萌發(fā)，原球莖顏色由白色逐漸變?yōu)樯罹G色，種子無菌播種 80d 由原球莖長成 1～2cm 的白綿毛蘭組培小苗。

圖2白綿毛蘭蒴果

圖3白綿毛蘭種子

Fig.3Dendroliriumlasiopetalumseed

表1種子萌發(fā)培養(yǎng)基篩選

Table1Selection ofseed germinationmedium

圖4白綿毛蘭組培小苗

Fig.4 Dendrolirium lasiopetalum tissue cultured seedlings

2.4不同月份白綿毛蘭蒴果中種子的萌發(fā)率以9、10、11、12月的白綿毛蘭蒴果作為外植體，播種不同月份的白綿毛蘭蒴果中的種子，以 1/2MS+25g/L 糖 +8g/L 卡拉膠 +25g/L 馬鈴薯粉 +0.1mg/L NAA作為基本培養(yǎng)基，培養(yǎng)方式有光照培養(yǎng)和避光培養(yǎng)，避光培養(yǎng)處理7和14d后光照培養(yǎng)，統(tǒng)計不同月份白綿毛蘭蒴果中種子的萌發(fā)率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，9月的白綿毛蘭種子萌發(fā)率最高為 17% ，10月的白綿毛蘭種子萌發(fā)率最高為 33% ，11月的白綿毛蘭種子萌發(fā)率最高為 67% ，12月的白綿毛蘭種子萌發(fā)率最高為 17% ，白綿毛蘭種子萌發(fā)率最高的月份為11月；11月的白綿毛蘭種子在避光培養(yǎng)7d后光照培養(yǎng)和光照培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，種子的萌發(fā)率均為67% ，避光培養(yǎng)7d后光照培養(yǎng)，種子萌發(fā)所需要的時間最短為 50d;10 月的白綿毛蘭種子在避光培養(yǎng)7d后光照培養(yǎng)和光照培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，種子的萌發(fā)率均為 33% ，避光培養(yǎng)7d后光照培養(yǎng)，種子萌發(fā)所需要的時間最短為 53d;9 月和12月的白綿毛蘭種子萌發(fā)率均為 17% ，避光培養(yǎng)7d后光照培養(yǎng)，9月、12月的種子萌發(fā)最短時間分別為54和 月的白綿毛蘭種子光照培養(yǎng)和避光培養(yǎng)7d后光照培養(yǎng)，種子萌發(fā)率無差異，但在小苗長勢上有明顯差異（表2、圖5）。

表2不同月份的白綿毛蘭蒴果中種子萌發(fā)率

Table2Seed germinationrateofDendroliriumlasiopetalumcapsulesindifferentmonths

2.5不同濃度激素對白綿毛蘭組培小苗增殖的影響

2.5.1 3cm 白綿毛蘭組培小苗增殖。在白綿毛蘭組培小苗增殖試驗中，株高 3cm 的白綿毛蘭組培小苗增殖培養(yǎng) 30d 左右，組培小苗開始有不定芽增殖， 90d 后不再有不定芽增殖。由表3可知，在光照培養(yǎng)條件下，以 1/2MS+25g/L 糖 + 8g/L 卡拉膠為基本培養(yǎng)基（CK），比較白綿毛蘭組培小苗切除苗根與不切除苗根對組培小苗不定芽增殖的影響，結(jié)果表明，6-BA濃度為 0.5，1.0，2.0，3.0mg/L ，切除苗根對白綿毛蘭組培小苗不定芽增殖系數(shù)無顯著影響（表31～5）；不切除白綿毛蘭組培小苗苗根時，當 0.5mg/L?6-BAlt;2.0mg/L 時，對白綿毛蘭組培小苗不定芽增殖有一定的抑制作用，當2.0mg/Llt;6-BA?3.0mg/L 時，對白綿毛蘭組培小苗不定芽增殖有顯著影響;當6-BA為 3.0mg/L 時，不定芽增殖系數(shù)最高達2.58（表36～10）。光照培養(yǎng)條件下，同一水平濃度的6-BA處理下，株高 3cm 左右的白綿毛蘭組培小苗不切除苗根相較于切除組培小苗苗根對不定芽增殖效果更好。

2.5.2 5cm 白綿毛蘭組培小苗增殖。為了再次驗證切除白綿毛蘭組培小苗苗根對不定芽增殖的影響，挑選株高 5cm 左右的白綿毛蘭組培小苗開展不定芽增殖試驗，白綿毛蘭組培小苗不定芽增殖培養(yǎng) 20d 左右開始有不定芽， 90d 后，不再有不定芽出現(xiàn)。以 1/2MS+25g/L 糖 +8g/L 卡拉膠作為基本培養(yǎng)基（CK），添加6-BA濃度為 0.5，1.0，2.0，3.0mg/L_o

比較白綿毛蘭組培小苗切除苗根與不切除苗根對不定芽增殖的影響。在光照培養(yǎng)條件下，切除白綿毛蘭組培小苗苗根時，當 6-BAgt;2.0mg/L 或 6-BA?0.5mg/L 時，切除白綿毛蘭組培小苗苗根對不定芽增殖無顯著影響;當 0.5mg/Llt; 6-BA?2.0mg/L 時，切除白綿毛蘭組培小苗苗根對不定芽增殖有顯著影響，當6-BA濃度為 1.0mg/L 時，切除白綿毛蘭組培小苗苗根時不定芽增殖系數(shù)最高達1.23。在光照培養(yǎng)條件下，不切除白綿毛蘭組培小苗苗根時，當 0.5mg/L? 6-BA?3.0mg/L 時，不切除白綿毛蘭組培小苗苗根對不定芽增殖有顯著影響，當6-BA濃度為 2.0mg/L 時，不切除白綿毛蘭組培小苗苗根的不定芽增殖系數(shù)最高達3.28（表4、圖6）。

注：1.代表光照培養(yǎng)；2代表避光培養(yǎng)7d后光照培養(yǎng);3代表避光培養(yǎng)14d后光照培養(yǎng)。

圖5不同月份的白綿毛蘭種子萌發(fā)

Noteepe;i light avoidance cultivation.

表3不同濃度的6-BA對不定芽增殖的影響

Table 3Effect of different concentrations of 6-BA on the proliferation of adventitious buds

注：+.植株矮小，無不定芽，葉片淡綠； .植株矮小，少數(shù)有不定芽，葉片淡綠； .植株矮小，大部分有不定芽，葉片淡綠。同列不同小寫字母表示 差異顯著（ Plt;0.05） 。 Note： + indicates that the plant is short，without any adventitious buds，and the leaves are light green; ⁺⁺ indicates that the plant is short in stature，with a few having adventitious buds and light green leaves ; ⁺⁺⁺ indicates that the plant is short and mostly has adventitious buds，with light green leaves.Different lowercase lettersin the same columnindicate significant difference（ Plt;0.05 ）

弱光培養(yǎng)條件下，同一濃度的6-BA處理下，不切除白綿毛蘭組培小苗苗根時，當 0.5mg/L?6-BAlt;3.0mg/L 時，對白綿毛蘭組培小苗不定芽增殖無顯著影響；當6-BA濃度為 3.0mg/L 時，不定芽增殖系數(shù)最高達3.60（表411～15）。光照培養(yǎng)條件下，同一濃度的 6-BA、NAA、2，4-D 處理下，不切除白綿毛蘭組培小苗苗根時，比較 6-BA、NAA、2，4-D 對白綿毛蘭組培小苗不定芽增殖的影響。當 0.5mg/L?6- BA?3.0mg/L 時，對白綿毛蘭組培小苗不定芽增殖有顯著影響；當6-BA為 2.0mg/L 時，白綿毛蘭組培小苗不定芽增殖系數(shù)最高達3.28。當 0.5mg/L?NAA?3.0mg/L 時，對白綿毛蘭組培小苗不定芽增殖有抑制作用。2，4-D對白綿毛蘭組培小苗不定芽增殖有毒害作用，添加2，4-D的增殖培養(yǎng)基，白綿毛蘭組培小苗接種后根莖部發(fā)黃，增殖培養(yǎng) 30d 后接種的組培小苗全部死亡（圖7）。光照培養(yǎng)條件下，同一濃度的 6-BA，NAA，2，4-D 處理下，對白綿毛蘭不定芽增殖效果最好的是6-BA，NAA對不定芽有抑制作用，2，4-D不宜用于白綿毛蘭不定芽增殖階段。光照培養(yǎng)條件下，同一水平濃度的6-BA處理下，株高 5cm 左右的白綿毛蘭組培小苗不切除苗根相較于切除組培小苗苗根對不定芽的增殖效果更好、增殖系數(shù)更高；光照培養(yǎng)和弱光培養(yǎng)條件下，同一水平濃度的6-BA處理下，不切除白綿毛蘭組培小苗苗根時，弱光培養(yǎng)相較于光照培養(yǎng)對不定芽的增殖效果更好、增殖系數(shù)更高（表4）。

表4添加不同濃度的激素對增殖的影響

Table 4Effects of adding hormones of different concentrations on proliferation

注：+.植株矮小，葉片淡綠，葉子卷曲，無不定芽； ++. 植株矮小，根部有褐化現(xiàn)象，葉片稍發(fā)黃，有少數(shù)不定芽； ⁺⁺⁺ 葉片翠綠，少數(shù)不定芽，植株較健壯； ++++ 葉片翠綠，多數(shù)不定芽，植株較健壯； +++++ 葉片翠綠，少數(shù)不定芽，植株徒長； +++++++ 葉片翠綠，多數(shù)不定芽，植株徒長。同列不同小寫字母表示差異顯著（ Plt;0.05） 。

Note ： + .The plant is short in stature，with light green leaves，curled leaves，and no adventitious buds; ⁺⁺ .The plant isshort，with brownish roots，slightly yellowishleaves，andafew adventitiousbuds; ⁺⁺⁺ .Theleavesare emerald green，with a few adventitiousbuds，and theplant isrelatively robust; ⁺⁺⁺⁺⁺ . The leaves are emerald green，with many adventitious buds，and the plants are relatively robust; ⁺⁺⁺⁺⁺⁺ . The leaves are emerald green，with a few adventitious buds ，and the plants are excessively long; ^+++++++ .The leaves are emerald green，with many adventitious buds and excessively long plants.Different lowercases in the same column indicate significant difference at O.O5 level.

圖66-BA對白綿毛蘭組培小苗切根與不切根增殖的影響

Fig.6Effects of6-BA onrootcuting andnon rootcuting proliferation of Dendrolirium lasiopetalumtsue culture seedligs

2.6不同有機添加物對生根壯苗的影響生根壯苗試驗培養(yǎng)基中不添加有機物（CK）與添加香蕉粉和馬鈴薯粉時，比較白綿毛蘭組培苗的平均葉數(shù)和平均根數(shù)。每株白綿毛蘭組培苗的平均葉數(shù)為5～6片，每株平均根數(shù)為5～8根，不添加有機物（CK）和添加香蕉粉、馬鈴薯粉在平均葉數(shù)和平均根數(shù)上無顯著差異（表5）。

生根壯苗試驗培養(yǎng)基中不添加有機物（CK）與添加香蕉粉和馬鈴薯粉時，比較白綿毛蘭組培苗的平均芽數(shù)。添加香蕉粉的生根壯苗培養(yǎng)基與CK比較，白綿毛蘭組培苗平均芽數(shù)無顯著差異；當生根壯苗培養(yǎng)基中添加馬鈴薯粉與CK比較，當 10g/L? 馬鈴薯粉 lt;20g/L 時對白綿毛蘭組培苗平均芽數(shù)有一定的抑制作用，當 20g/L? 馬鈴薯粉 ?30g/L 對白綿毛蘭組培苗平均芽數(shù)有促進作用，當馬鈴薯粉為 30g/L 時，白綿毛蘭組培苗平均芽數(shù)達2.43（表5）。

生根壯苗試驗培養(yǎng)基中不添加有機物（CK）與添加香蕉粉和馬鈴薯粉時，比較白綿毛蘭組培苗的平均根長。當生根壯苗培養(yǎng)基中添加香蕉粉與CK比較，當 10g/L? 香蕉粉 ? 30g/L 時對白綿毛蘭組培苗根的生長有顯著影響，當添加香蕉粉為 20g/L ，白綿毛蘭組培苗的平均根長達 2.42cm 。當生根壯苗培養(yǎng)基中添加馬鈴薯粉與CK比較，當 10g/Llt; 馬鈴薯粉 lt;20g/L 對白綿毛蘭組培苗根的生長有顯著影響，當生根壯苗培養(yǎng)基中添加馬鈴薯粉為 10g/L 時，白綿毛蘭組培苗的平均根長達 1.85cm ，當生根壯苗培養(yǎng)基中 20g/Llt; 馬鈴薯粉 ?30g/L ，對白綿毛蘭組培苗根的生長有一定的抑制作用（表5）。

生根壯苗培養(yǎng)基中不添加有機物（CK）與添加香蕉粉、馬鈴薯粉時，比較白綿毛蘭組培苗的平均株高。生根壯苗培養(yǎng)基中添加香蕉粉、馬鈴薯粉時，香蕉粉對白綿毛蘭組培苗株高的生長有一定的抑制作用，而添加馬鈴薯粉對白綿毛蘭組培苗的株高無顯著影響（表5）。

圖7NAA和2，4-D對白綿毛蘭組培小苗不切根增殖的影響

表5不同有機添加物對生根壯苗的影響

Table 5Effects of different organic additives on rooting and strong seedlings

注： 植株株高較高，不定芽數(shù)少，根長一般； ++. 植株株高一般，不定芽數(shù)少，根長較長； 植株株高一般，不定芽數(shù)多，根長一般。同列不同小寫 字母表示差異顯著（ （Plt;0.05） 。 Note ： + . The plant height is relatively high，the number of adventitious buds is few，and the root length is average; ⁺⁺ .The plant height is average，with few adventitious buds and longer roots; ⁺⁺⁺ .The plant height isaverage，with alarge numberof adventitious budsand average rotlength.Diffrent lowercase： in the same column indicated significant difference at O.O5 level.

3討論

蘭科植物，在自然環(huán)境下繁殖以分株繁殖為主，繁殖速度慢系數(shù)低，種子極細小，無胚乳，需與真菌共生才能萌發(fā)，種子萌發(fā)率極低[6-7]，要實現(xiàn)短期內(nèi)快速繁殖獲得大量種質(zhì)資源通常需借助無菌組織培養(yǎng)技術(shù)，組培外植體材料有種子、葉片、花梗等[8-i0]。該研究以白綿毛蘭蒴果為外植體，研究種子萌發(fā)試驗、增殖試驗、生根壯苗試驗，以期建立白綿毛蘭組培快繁技術(shù)體系，保存白綿毛蘭的種質(zhì)資源及為今后開發(fā)利用提供基礎(chǔ)研究材料。

研究表明，影響蘭科植物結(jié)實物候重要的氣候因子有氣溫和水分，而氣溫和空氣相對濕度變化對蘭科附生型種類的結(jié)實物候更敏感[1]。引種栽培在資源圃中的白綿毛蘭花果物候期與植物志記錄在自然野生環(huán)境下的白綿毛蘭花果物候期在時間上存在一定的差異性，栽培在資源圃中的白綿毛蘭有人為控制氣溫和空氣相對濕度，而自然生境下降雨量、溫度、空氣濕度人為不可控，資源圃和自然環(huán)境下的氣溫和水分不同，可能是影響野生和引種栽培的白綿毛蘭開花結(jié)果有差異性的重要因子。

避光培養(yǎng)是蘭科植物中部分種屬誘導種子萌發(fā)[12-14]、不定芽[15]常見方法。在白綿毛蘭種子萌發(fā)試驗中發(fā)現(xiàn)，光照培養(yǎng)和避光培養(yǎng)7d后光照培養(yǎng)處理在種子萌發(fā)率上無差異性，但萌發(fā)的組培小苗在長勢上存在差異性，避光培養(yǎng)7d后光照培養(yǎng)相較于光照培養(yǎng)萌發(fā)的組培小苗在生長勢上較旺盛、葉片較濃綠。

將株高 5cm 左右的白綿毛蘭組培小苗接種在添加了不同濃度的6-BA培養(yǎng)基中，在不切除白綿毛蘭組培小苗苗根時，比較光照培養(yǎng)和弱光培養(yǎng)對組培小苗不定芽增殖的影響。在不切除組培小苗苗根時，光照培養(yǎng)條件下，當6-BA為 2mg/L 時，對白綿毛蘭組培小苗不定芽增殖有顯著影響，而弱光培養(yǎng)條件下，需添加6-BA濃度為 3mg/L 時，對白綿毛蘭組培小苗不定芽增殖才有顯著影響，弱光培養(yǎng)比光照培養(yǎng)條件下需要添加更高濃度的細胞分裂素，這與茄子在花藥離體培養(yǎng)再生試驗中發(fā)現(xiàn)細胞分裂素對愈傷組織誘導與分化的結(jié)果一致[16]

研究光照因素對白綿毛蘭組培小苗不定芽增殖的影響，當光照培養(yǎng)和弱光培養(yǎng)在同一激素水平下，當6-BA濃度為3mg/L 時，弱光培養(yǎng)條件下，白綿毛蘭組培小苗不定芽增殖系數(shù)比光照培養(yǎng)增殖系數(shù)略高，這與麗格海棠葉片離體再生試驗中，光照強度對不定芽增殖的結(jié)果一致，40d弱光培養(yǎng)更有利于誘導麗格海棠不定芽的再生[1]，但在弱光培養(yǎng)條件下，由于組培苗光照不足，會導致白綿毛蘭組培苗徒長成為徒長苗[18]

馬鈴薯粉、香蕉粉常用于蘭科植物種子萌發(fā)[19]、不定芽增殖分化[20]、生根壯苗[21]等組培快繁試驗。在白綿毛蘭的生根壯苗試驗中發(fā)現(xiàn)，對平均芽數(shù)影響：當添加 20g/L? 馬鈴薯粉時，馬鈴薯粉 gt; 基礎(chǔ)培養(yǎng)基（CK）；對平均根長影響：當添加 20g/L? 香蕉粉時，香蕉粉 gt; 基礎(chǔ)培養(yǎng)基（CK）;在平均葉數(shù)和平均根數(shù)則無顯著差異。蘭科植物品種眾多，不同品種間添加有機物對生根壯苗的結(jié)果并不都有一致性影響，添加馬鈴薯粉和香蕉粉對蘭科植物生根壯苗會產(chǎn)生不同的影響，有的促進生根壯苗，有的抑制生根壯苗，導致不同品種間組培快繁體系技術(shù)存在一定差異性[22-23] 。

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