摘" 要:乙烯利作為橡膠生產中廣泛應用的增產劑,在促進橡膠樹高效采膠中發(fā)揮了重要作用。然而,乙烯利刺激增產具有明顯的劑量效應,過度施用會造成橡膠樹死皮等副作用。本研究以熱研73397橡膠樹為試驗材料,建立了基于超高效液相色譜串聯質譜技術(UPLC-MS/MS)的樹皮中乙烯利痕量檢測方法,并系統(tǒng)研究了外施乙烯利后不同時間和樹干不同部位樹皮的乙烯利含量分布規(guī)律。樣品前處理采用甲醇∶1%甲酸(9∶1,V/V)溶液勻漿浸提,過濾后直接進行定量分析。樣品經Waters CORTECS HILIC C18色譜柱(100 mm×2.1 mm, 1.6 μm)分離,以0.01%氨水溶液、乙腈∶水(80∶20, V/V)為流動相,流速為1.0 mL/min,在電噴霧離子源、負離子掃描和多反應監(jiān)測模式(MRM)下進行檢測,外標法定量,定量離子為107。結果表明:乙烯利在0.02~1.00 μg/mL濃度范圍內線性關系良好(R2=0.9997),在0.1~1.0 μg/kg添加水平下,回收率為85.3%~101.2%,相對標準偏差為1.14%~7.28%,檢出限為0.1 μg/kg。應用該方法研究了橡膠樹涂施不同濃度乙烯利(0.5%、2.0%、4.0%)0~96 h后割線及其上下5、10 cm樹皮中乙烯利的分布特征。結果顯示:外施的乙烯利在橡膠樹中分布不均勻,施藥部位的含量顯著高于其他部位,且近施藥部位含量高于遠施藥部位,施藥部位下方的含量高于上方。施藥部位的乙烯利含量與外施乙烯利濃度呈顯著正相關,且隨著施藥時間的延長呈先增后降的趨勢,3種濃度均在施藥后12~24 h達到峰值,隨后逐漸下降,96 h仍能檢測到較高濃度的乙烯利。與氣相色譜法間接測定乙烯釋放速率相比,本研究建立的檢測方法具有簡便快速、重現性好、靈敏度高等優(yōu)勢,為橡膠樹中乙烯利的定量分析提供了可靠的技術支撐。研究初步揭示了橡膠樹割線外施乙烯利后的吸收、分布及運輸規(guī)律,發(fā)現其擴散運輸不明顯,主要集中在施藥部位,可為深入解析乙烯利刺激增產的劑量效應及指導其安全高效施用提供理論依據。
關鍵詞:橡膠樹;乙烯利;超高效液相色譜串聯質譜;分布規(guī)律中圖分類號:S794.1 """""文獻標志碼:A
Trace Detection and Distribution Dynamics of Externally Applied Ethrel in Rubber Tree Tapping Cuts
YANG Wenfeng, FAN Ruishen, GAO Honghua, WEI Fang, WAN Jiong, QIU Jian*
Rubber Research Institute, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences / Key Laboratory of Biology and Genetic Resources of Rubber Tree, Ministry of Agriculture and Rural Affairs / Hainan Key Laboratory for Cultivation amp; Physiology of Tropical Crops / State Key Laboratory Incubation Base for Cultivation and Physiology of Tropical Crops, Haikou, Hainan 571101, China
Abstract: Ethrel is widely used as a stimulant in rubber tree plantations, which plays an important role in increaisng latex yield effectively and reducing labor requirements for tapping. However, the stimulatory effect of ethrel exhibits a pronounced dose-response relationship, excessive application may lead to adverse effects, such as tapping panel dryness (TPD). In this study, rubber tree clone Reyan 73397 was used as the experimental material, and an ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) method for the trace determination of ethrel in the bark was developed. The distribution of ethrel at various time points and different parts of the bark following its application was investigated. The samples were extracted using a methanol∶1% formic acid aqueous solution (9∶1, V/V), and directly analyzed after filtration. The samples were separated by waters CORTECS HILIC C18 column (100 mm × 2.1 mm, 1.6 μm ) with mobile phase A (0.01% ammonia solution) and mobile phase B (acetonitrile∶water 80∶20, V/V) at a flow rate of 1.0 mL/min. The detection was performed under electrospray ion source, negative ion scanning and multiple reaction monitoring (MRM) mode. Quantitative analysis was conducted using external standard calibration curves, quantitative ion was 107. The results showed a good linear relationship for ethrel within the range of 0.02 μg/mL to 1.00 μg/mL, with coefficient of determination (R2) of 0.9997. Recoveries ranged from 85.3% to 101.2% at spiked levels 0.1 μg/kg to 1.0 μg/kg, with relative standard deviations of 1.14%–7.28%, and limits of quantification (LOQ) of 0.1 μg/kg. This method was applied to study the distribution characteristics of ethrel in stimulated bark rings, both above and below the ethrel-treated 5 cm and 10 cm areas, after applying different concentrations of ethrel (0.5%, 2.0%, 4.0%) over 0-96 h. The results revealed that ethrel was unevenly distributed in the rubber tree, the concentration at the stimulated area was significantly higher than that in other areas, areas closer to the stimulated bark were higher than that in distant areas, and the areas below the stimulated bark were higher than that above it. The concentration of ethrel at the stimulated area showed a significant positive correlation with the stimulated ethrel concentration. Additionally, the concentration displayed an initial increase followed by a gradual decline over time. For the three concentrations, peak levels were observed between 12 h and 24 h post-stimulation, after which a gradual decrease occurred, with relatively high concentrations still detectable at 96 h. Compared to the indirect measurement of ethylene release rates by gas chromatography, this method has many significant advantages, including simplicity, rapidity, excellent reproducibility, and high sensitivity, thereby providing reliable technical support for the quantitative analysis of ethrel in rubber trees. The study preliminarily revealed the absorption, distribution and transport patterns of externally stimulated ethrel on rubber tree tapping cuts. It was found that the diffusion and transport of ethrel were limited, with the compound primarily concentrated at the stimulation site. The findings would provide a theoretical basis for further elucidating the dose-dependent effects of ethrel on yield stimulation and guiding its safe and efficient application.
Keywords: rubber tree; ethrel; UPLC-MS/MS; distribution patterns
DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2025.08.009
巴西橡膠樹(Hevea brasiliensis)為大戟科橡膠樹屬的落葉喬木,是全球商用天然橡膠最主要的來源[1]。割膠是天然橡膠生產中的關鍵技術環(huán)節(jié),也是目前從橡膠樹乳管組織中獲取膠乳產品的唯一直接手段[2]。乙烯利(ethrel或ethephon,ETH,乙烯釋放劑)作為各植膠國生產上廣泛應用的橡膠樹產量刺激劑,在提高膠乳產量、提升割膠勞動效率以及減少割膠用工需求方面發(fā)揮了重要作用[3-5]。然而,乙烯利刺激橡膠樹的增產效果具有顯著的劑量效應[6-8],在適當的乙烯利刺激濃度范圍內與干膠產量呈正相關[9-10],但過度施用會導致膠乳長流、干含急劇下降甚至引發(fā)橡膠樹死皮等副作用[11-13]。隨著膠工短缺現象日益加劇,割膠技術低頻化的推進以及乙烯利施用濃度的增加,這些負面效應更加凸顯[2]。本課題組通過初步研究發(fā)現,外施乙烯利后劑量效應的產生可能與乙烯利在橡膠樹體內的時空分布有關(未發(fā)表資料)。因此,研究乙烯利在橡膠樹體內的吸收、分布及運輸規(guī)律,對解析其劑量效應產生機制,指導乙烯利的合理施用以及實現橡膠樹的安全高效生產具有重要意義。
建立乙烯利痕量檢測方法是研究乙烯利在植株體內吸收、分布及運輸規(guī)律的基礎。然而,乙烯利作為一種強極性小分子化合物,具有易溶于水、揮發(fā)性低、無生色和熒光基團、對紫外光敏感且易分解的特性,直接進入常規(guī)儀器時響應值較低,因此需要超高靈敏度的檢測方法[14-16]。目前,常用的乙烯利檢測方法主要有離子色譜法、氣相色譜法、氣相色譜-質譜法以及液相色譜-質譜法[17-18]。其中,離子色譜法操作簡單,但抗干擾能力差且靈敏度較低[19];氣相色譜法易產生假陽性結果[20];氣相色譜-質譜法需要通過衍生化處理,樣品前處理步驟繁瑣,定量準確性受衍生化產物穩(wěn)定性及乙烯釋放量的限制[21]。相比之下,超高效液相色譜-質譜聯用法(UPLC-MS/MS)結合了高效液相色譜和質譜技術的優(yōu)勢,具有樣品前處理簡便快捷、特異性強、靈敏度高以及定性能力好等優(yōu)勢,已成為乙烯利定量分析的首選方法[22-23],并在棉花、堅果、中藥材、水果以及蔬菜等領域得到廣泛應用[24-28]。在橡膠樹中,尚無采用UPLC-MS/MS法直接測定橡膠樹中乙烯利含量的研究報道,目前僅見楊少瓊[29]、許聞獻等[30]、曹建華等[31]、鄧軍等[32-33]采用氣相色譜法間接測定橡膠樹離體樹皮及割膠后膠乳中乙烯的釋放速率來推測乙烯利含量。該方法基于乙烯利在pHgt;4條件下分解釋放乙烯的特性[34],樣品前處理復雜,且假設橡膠樹產生的乙烯完全來源于外施乙烯利,忽略了割膠傷害和施用外源乙烯利誘導產生的內源乙烯,可能導致假陽性結果。此外,關于外施乙烯利在植株體內的運轉分配,早期研究曾采用14C同位素示蹤技術在小麥[35]、茶樹[36]、棉花[37]及瓠瓜[38]等植物中進行探索,發(fā)現不同植物對乙烯利的吸收分布存在顯著差異,且同一植株中各器官的積累量也不均勻。關于乙烯利在橡膠樹中的吸收分布研究,已有AUDLEY等[39]采用14C同位素示蹤技術,PARANJOTHY等[40]、楊少瓊[29]、許聞獻等[30]通過間接測定乙烯釋放速率推測其吸收分布的報道。但上述方法由于放射性風險、高成本和操作復雜性限制了其在乙烯利吸收分布研究中的廣泛應用。
本研究建立了基于直接提取法結合UPLC- MS/MS技術的橡膠樹乙烯利痕量檢測方法,并利用該方法測定了割線外施不同濃度乙烯利后的殘留量及其吸收分布狀況,進一步明確了乙烯利刺激的高效作用部位和高效刺激時間。研究結果可為生產中指導乙烯利的高效安全施用提供理論依據。
1.1" 材料
1.1.1 "大田試驗材料 "選取中國熱帶農業(yè)科學院試驗場十二隊(19°31′10″N, 109°29′41″E)開割3"a未涂乙烯利刺激的橡膠樹熱研73397為試驗材料,試驗以單株為處理對象,每個處理重復3次。
1.1.2" 儀器與試劑" 超高效液相色譜系統(tǒng)(美國Waters公司),AB SCIEX API4000-質譜系統(tǒng)(美國AB SCIEX公司),研磨機、高速勻漿機(德國IKA公司)。
乙烯利標準品(純度96%,AccuStandard公司);C18色譜柱(Waters CORTECS,Waters公司);甲醇、乙腈(色譜純,Fisher試劑公司);甲酸、氨水(色譜純,上海凌峰化學試劑有限公司);有機相針式過濾器(13 mm×0.22 μm,上海安譜實驗科技有限公司);40%乙烯利水劑(紹興東湖高科股份有限公司);實驗用水均為超純水。
1.2" 方法
1.2.1 "采樣" 于2023年5月開割前用割膠刀割除供試橡膠樹割線上回枯部分樹皮,待新割線干后,分別于采樣前0(割膠前刺激,刺激后馬上割膠)、6、12、24、48、96 h在割線處每株次涂施2 g不同濃度乙烯利水劑(0.5%、2.0%、4.0%),選取樹干不同部位(施藥區(qū)上方10 cm、施藥區(qū)上方5"cm、施藥區(qū)下方5 cm、施藥區(qū)下方10 cm)為縱直分布的采樣點。由同一膠工在每株膠樹的5個縱直分布采樣點分別用膠刀切割下樹皮,同時選取同林段相鄰的無乙烯利處理的3株膠樹割線處的樹皮為空白樣,切下的樹皮裝袋密封后放入冰盒中立即帶回實驗室置于–80"℃冰箱保存,備用。
1.2.2" 提取液配制 "配制1 L甲醇∶1%甲酸(9∶1, V/V)溶液作為提取液,即:900 mL甲醇,99 mL水及1 mL甲酸。
1.2.3 "標準溶液配制" 精確稱取乙烯利標準品10 mg,用甲醇溶解并定容至100 mL容量瓶中,配制成100 μg/mL乙烯利標準儲備液,置于冰箱中冷藏保存。用甲醇逐級稀釋標準儲備液至濃度分別為0.20、1.00、2.50、5.00、10.00 μg/mL乙烯利標準溶液。準確吸取各濃度的乙烯利標準溶液1 mL于10 mL的容量瓶中,用提取液定容至刻度,搖勻,配制成質量濃度分別為0.02、0.10、0.25、0.50、1.00 μg/mL的乙烯利系列標準曲線溶液。
1.2.4" 樣品前處理" 精確稱取樹皮樣品5.0 g置于研磨機在液氮中研磨30 s至粉末狀,加入提取液10 mL,高速勻漿1 min后轉移至15 mL離心管,于4"℃浸提過夜,用注射器吸取2 mL上清液經0.22 μm過濾器后置于樣品瓶中待分析測定。
1.2.5" 色譜和質譜檢測條件" 液相色譜條件:Waters CORTECS HILIC C18色譜柱(2.1 mm × 100 mm, 1.6 μm),柱溫為40"℃,進樣體積為10.0"μL,流速為0.2 mL/min,流動相A為0.01%氨水溶液,流動相B為乙腈∶水(80∶20, V/V),采用梯度洗脫。洗脫程序:0~2.0 min,90% A;2.0~4.5 min, 90% A~20% A;4.5~5.0 min,20% A~90% A。
質譜條件:電噴霧負離子(ESI–)掃描,多反應監(jiān)測(MRM)模式,噴霧電壓(IS)為-4500"V,離子源溫度(TEM)為600"℃。采用外標法,以乙烯利保留時間定性,以峰面積定量。采用負離子全掃描模式進行掃描,確定其母離子,并對其已確定的母離子進行二級質譜Product Ion掃描,得到子離子。根據響應強度高、基線噪聲低、抗干擾能力強的原則,最終選擇1個母離子和2個子離子。并在MRM模式下對所分析物離子對的碰撞能量、去簇電壓等質譜參數進行優(yōu)化,相關質譜參數見表1。
1.3" 數據處理
采用Excel 2019軟件處理試驗數據,采用SPSS 18.0軟件進行數據分析,采用Origin 2021軟件作圖。
2.1" 橡膠樹樹皮中乙烯利痕量檢測
乙烯利是一種強極性的二元酸,在極性溶劑中具有較高的溶解度,因此常采用水、甲醇或酸化甲醇等作為乙烯利的提取溶劑[16]。本研究選用甲醇∶1%甲酸(9∶1, V/V)混合溶劑作為提取液,樣品加入提取液研磨后高速勻漿、浸提過夜,過濾后直接采用超高效液相色譜-串聯三重四級桿質譜儀進行乙烯利檢測,定量離子m/z為106.7(圖1)。其提取離子流色譜圖如圖2所示,乙烯利的分離效果良好,峰形尖銳且對稱,乙烯利的保留時間為0.95 min。
2.2 "檢測方法的線性范圍
將配制的乙烯利標準工作液按照上述色譜-質譜條件,濃度從低到高分別進樣測定。以乙烯利濃度(μg/mL)為橫坐標,定量離子的峰面積為縱坐標,繪制標準曲線,得到其標準工作曲線方程:y=5.033×106x–1.132×104,乙烯利在0.02~ 1.00 μg/mL濃度范圍內呈良好的線性關系,相關系數(R2)為0.9997。在上述條件下,按照信噪比(S/N)≥3計算出方法的檢出限(LOD)為0.1"μg/kg,S/N≥10計算出定量限為(LOQ)為0.3 μg/kg。
2.3" 檢測方法精密度和回收試驗
在無乙烯利刺激的空白樹皮樣品中,進行乙烯利標準溶液的加標回收試驗。加標水平分別為0.1、0.5、1.0 μg/kg,采用相應處理方法對樣品進行處理,每個添加水平重復測定6次,乙烯利在橡膠樹樹皮中的加標回收率及相對標準偏差見表2。由表2可知,乙烯利在橡膠樹樹皮樣品中的平均回收率為85.3%~101.2%,相對標準偏差為1.14%~7.28%。上述數據表明,所建立的檢測方法精密度和準確度較好,可以滿足后續(xù)定量檢測分析的要求。
2.4" 外施乙烯利在橡膠樹樹皮中的分布
2.4.1" 橡膠樹不同部位樹皮中的乙烯利分布" 利用上述乙烯利痕量檢測方法,分析不同乙烯利濃度(0.5%、1.0%、4.0%)刺激后,橡膠樹不同部位樹皮中乙烯利含量的變化(圖3)。乙烯利不同濃度或不同處理時間,施藥區(qū)域樹皮的乙烯利含量均明顯高于其他部位;距離施藥區(qū)域5 cm處的樹皮乙烯利含量均高于10 cm處的樹皮;此外,無論距離施藥區(qū)域5 cm還是10 cm,施藥區(qū)域下方樹皮的乙烯利含量均高于上方。結果表明,外施乙烯利在橡膠樹皮中的分布呈現不均勻性,主要殘留集中在施藥區(qū)域的割線處,其余部分通過擴散或蒸騰作用在施藥區(qū)域上、下10 cm范圍內分布,且距離施藥區(qū)域越近乙烯利含量越高,施藥區(qū)域下方的含量高于上方。
2.4.2" 不同刺激時間下橡膠樹樹皮中乙烯利含量變化" 不同刺激時間下樹皮中乙烯利含量的變化因乙烯利濃度和采樣部位的不同而有所差異(圖3)。施藥區(qū)域上方樹皮中乙烯利含量均較低,除0.5%乙烯利處理,施藥區(qū)域上方5 cm樹皮中的乙烯利含量隨刺激時間的延長呈先升后降趨勢外,其他濃度處理的變化趨勢不明顯。在乙烯利富集的施藥區(qū)域,乙烯利含量隨刺激時間的延長整體呈先升后降的倒“V”型趨勢。而在施藥區(qū)域下部的樹皮中,0.5%乙烯利處理的施藥區(qū)域下部5"cm樹皮和4.0%乙烯利處理的下部10 cm樹皮中的乙烯利含量呈先降后升的“V”型趨勢;而在其他條件下乙烯利含量則呈先升后降再升的“N”型趨勢;且施藥后96 h施藥區(qū)域下方5"cm和10"cm樹皮中乙烯利含量均高于初始值(0 h)。表明乙烯利在橡膠樹皮中的動態(tài)分布具有明顯的濃度依賴性和空間特異性。
2.4.3" 不同刺激濃度下橡膠樹樹皮中乙烯利含量 "橡膠樹不同部位樹皮中的乙烯利含量隨外施乙烯利濃度增加而增加的趨勢,其中施藥區(qū)域乙烯利含量的動態(tài)變化對刺激濃度和刺激時間的響應尤為顯著(圖4)。刺激后0 h,由于乙烯利在樹皮表面停留時間較短,樹體吸收和擴散尚不充分,檢測到的乙烯利含量較低,從6 h開始隨刺激時間的延長乙烯利含量逐漸升高。在0.5%乙烯利刺激下,樹皮中的乙烯利含量在施藥后24 h達到峰值;而2.0%和4.0%乙烯利處理的峰值則提前至施藥后12 h;此外,3種濃度處理后96 h的乙烯利含量均高于初始值(0 h),而4.0%乙烯利處理后96 h的乙烯利含量高于處理后48 h。
相關性分析表明,乙烯利處理后0~96 h樹皮中的乙烯利含量與外施乙烯利濃度均呈極顯著正相關(Plt;0.01),線性回歸方程見表3。然而,刺激時間與乙烯利含量的相關性未達顯著水平。結果表明,施藥部位樹皮中的乙烯利含量隨刺激時間的延長呈現明顯的峰值,乙烯利濃度越高,峰值出現的越早,而且乙烯利在樹皮中具有一定的持久性。
3.1" 橡膠樹中乙烯利的痕量檢測
乙烯利的痕量分析檢測中,檢測方法的選擇和樣品前處理是2個關鍵環(huán)節(jié),其中樣品前處理的效率直接影響分析方法的可靠性、準確性和分析通量[41]。本研究根據乙烯利的強極性特性,選用極性溶劑甲醇∶1%甲酸(9∶1, V/V)作為提取溶劑,通過勻漿浸提過夜后直接提取,乙烯利的回收率達85.3%~101.2%。該方法樣品前處理操作簡便,對待測組分提取較為完全,單個樣品的檢測時間縮短至5 min,顯著提高了檢測效率。與鄧軍等[33]報道的1.12 μL/L的檢出限相比,本研究中的檢出限為0.1 μg/kg,不僅提高了檢測的準確性,還避免了氣相色譜法易出現的假陽性問題。此外,本研究中的檢測方法具有較高的精密度和準確度,能夠更好地滿足橡膠樹中乙烯利含量的定量分析需求。
3.2" 外源乙烯利在橡膠樹皮中的運轉及分布
早期14C乙烯利示蹤研究表明,乙烯利在植株體內的運轉可分為三部分:一部分長時間保留在處理部位;一部分快速進入植株體內,逐步分解釋放乙烯發(fā)揮其生理功能或通過擴散轉移至其他部位;另一部分則直接從處理部位通過輸導組織運輸至其他器官再分解釋放或代謝為其他物質[34]。楊少瓊[29]發(fā)現橡膠樹涂施乙烯利后,其擴散范圍可達施藥區(qū)上下2 m。許聞獻等[30]則認為乙烯利在橡膠樹體內主要通過擴散轉移,擴散分布范圍為90 cm,擴散分布的不均勻性造成了刺激產量效應的動態(tài)范圍。本研究發(fā)現,在橡膠樹割線處涂施不同濃度的乙烯利后其大部分殘留在施藥部位,其余部分進入橡膠樹體后在施藥部位上、下10 cm范圍內均有分布,且距離施藥部位越近,乙烯利含量越高。
關于乙烯利在橡膠樹體內的運轉方向一直以來存在爭議。PARANJOTHY等[40]認為乙烯利的向下運動不明顯;而AUDLEY等[39]、楊少瓊[29]發(fā)現乙烯利向上擴散的速度快于向下擴散,認為乙烯利主要是通過蒸騰液流向上運輸;許聞獻等[30]發(fā)現外源乙烯利在上、下方向的擴散范圍與擴散速度基本相同,而且施藥后樹干不同部位的乙烯利分布與產量分布一致;SETHURAL等發(fā)現乙烯利的藥效范圍主要集中在施藥部位的下方[30],與本研究結果相對一致,即施藥部位下方的乙烯利含量高于上方。這種差異可能與所選取的試驗材料、檢測方法的精確度及靈敏度有關。本研究和PARANJOTHY等[40]采用的是離體樹皮作為樣品,而楊少瓊[29]采用的是割膠后的膠乳樣品,AUDLEY等[39]則采用橡膠樹幼苗樹皮。此外,乙烯利在橡膠樹體內的運轉分布及原位分解釋放受溫度、橡膠樹物候、pH等多因素影響,樣品采集時段、采樣方法等的差異也可能導致結果不一致。
本研究還發(fā)現橡膠樹對外源乙烯利的吸收呈明顯的時間差異,乙烯利含量隨刺激時間的延長呈先增后降的趨勢,乙烯利吸收高峰期出現在刺激后12~24 h。這表明橡膠樹對外源乙烯利的生理響應具有一定滯后性[42],與魏芳等[43]、仇鍵等[44]研究認為橡膠樹響應外源乙烯利產生排膠相關生理反應的高峰期在刺激后24~96 h的結果相吻合。此外,乙烯利含量與乙烯利施用濃度之間呈顯著線性正相關。
本研究發(fā)現外施乙烯利在橡膠樹樹皮中的分布具有廣泛性、局域性和不均勻性等特點,通過系統(tǒng)分析施藥區(qū)域乙烯利的時空動態(tài)變化規(guī)律,為指導橡膠生產中乙烯利的高效安全施用提供理論依據。然而,由于乙烯利在植物體內的不穩(wěn)定性,未來研究還需進一步開發(fā)高效、無損的原位實時檢測技術,以建立乙烯利釋放動態(tài)的同步監(jiān)測體系,這將有助于深入解析乙烯利刺激橡膠樹增產的分子機制和開發(fā)橡膠樹精準高效的乙烯利施用技術。
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