中圖分類號：R734.2 文獻標識碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2025.14.001

文章編號：1006-1959（2025）14-0001-12

Abstract：OjetiTofndthicatoselatedtorogresiondpgosisofUCdtoepeolotulaicto （CSF2）isaproosticfactorandtoricroenviontindexofLUSCMetodsThegeneexpresionprofiledatarelatedtoLUSCnCGA databasewereodroporfselpotsllfaticellU calculatedbyestimatiometodandCiberSortmetodGeneseteichentaalysis（SEA）aspefodoCSF2toevaluateteproportioof TCs，andsoatalssfodtofuteeeelatoseCFndelaedcalusfUCialsn vivoexpermentsthexpresfFaokedutnelloutingit8CK8）eveseorealyisodealingd formationwereusedtoproetheproiferationmigrationndinvasionofLUSCcel.ResultsTheexpressonofCSF2intmoisssas significantlyaaiasdeileU KEGnalysisodatFstetalafootas）o ledtosignfcanteeeicellpolferaoigatodaso（O）.CocsioFaotetialaptic prognostic indicator for TME in LUSC patients.

KeyWords：Lungsquamouscellcarcinoma;Tumormicroenvironment;Colonystimulatingfactor2;Clinicalpathologyandprogosis

肺鱗狀細胞癌（LUSC）占所有非小細胞肺癌（NSCLC）的 30%^[1] ，在老年男性中更為普遍，并與吸煙密切相關。LUSC常見于中央性肺癌，并傾向于在胸腔內生長，早期時常導致支氣管狹窄，生長緩慢，手術切除的機會更多，5年生存率較高，晚期轉移，對放療和化療的敏感性不如小細胞未分化癌[.4]。雖然免疫療法在治療LUSC方面取得了相當大的進展，但仍存在許多問題。由于LUSC患者腫瘤的高度異質性，患者之間免疫治療的臨床效果差異很大5。因此，詳細地闡明免疫反應的分子機制，尋找更多的免疫治療靶點和方法具有重要意義。腫瘤微環(huán)境（TME）由細胞外基質、基質細胞、多種細胞因子和免疫細胞組成，在如局部耐藥性、免疫逃逸和遠處轉移等許多腫瘤的進展中至關重要，腫瘤的發(fā)生和轉移也依賴于TME中多種因素和細胞的相互作用。因此基于TME的特殊作用，尋找相關的治療靶點對腫瘤患者的隨訪治療有很大的幫助。有越來越多的證據(jù)表明了TME在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的重要性，其改變也可導致免疫系統(tǒng)衰竭[7.8]。有證據(jù)表明[9，10]，TME的成分可以確定癌癥的免疫表型，從而影響患者的預后。免疫檢查點是免疫逃逸的關鍵調控因子，基于免疫檢查點的免疫治療已成為晚期NSCLC[1-13]患者的一種有前景的治療方法。腫瘤浸潤淋巴細胞（TIL）與NSCLC的5年生存率顯著相關，淋巴細胞豐度低[14，i5]集落刺激因子2（CSF2）是一種單體糖蛋白，通過肥大細胞、T細胞、巨噬細胞、成纖維細胞、內皮細胞和自然殺傷細胞分泌的細胞因子[。此外，CSF2還是一種廣譜肽因子，可刺激早期造血祖細胞的增殖[17-19]，主要作用于骨髓祖細胞并發(fā)揮生物學效應，通過綁定到高親和力受體，讓它們迅速進入細胞周期分化為粒細胞和巨噬細胞，最終成為成熟細胞，可以延長成熟細胞的壽命，提高成熟細胞的功能[16，17]。目前的研究表明，CSF2在肝癌[20]、肺癌[21，22]、食管癌[23，24]、腦膜瘤[25]、血液系統(tǒng)腫瘤[2]等腫瘤中發(fā)揮重要作用。然而，關于LUSC 患者CSF2表達與腫瘤免疫微環(huán)境、臨床病理特征以及預后的關系系統(tǒng)研究仍然有限。本研究利用癌癥基因組圖譜（TCGA）數(shù)據(jù)庫中的估計和cibers排序兩種計算方法，獲得LUSC樣本中的腫瘤浸潤性免疫細胞（TICs）比值以及基質和免疫成分的比值，并確定CSF2，系統(tǒng)探討CSF2的表達與LUSC預后、臨床病理特征及TME的相關性，比較從LUSC的機械成分和免疫成分中產生的差異表達基因，旨在判斷CSF2在LUSCTME中的靶點作用。

1材料與方法

1.1基本細胞實驗

1.1.1細胞培養(yǎng)人LUSC細胞系（A549和H520）購自美國型培養(yǎng)館藏（ATCC）。在獲得后將這些細胞系進行支原體檢測，以確保它們未受支原體污染。此外，本研究還獲得了這些細胞系的STR（短串聯(lián)重復序列）分析報告，確認了它們的身份和一致性。細胞在含 10% 胎牛血清（FBS，Gibco）和 1% 青霉素-鏈霉素溶液的RPMI1-1640培養(yǎng)基（Gibco）中培養(yǎng)，在含有 5% 二氧化碳的加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.1.2CSF2敲除為了敲除CSF2在LUSC細胞系中的表達，使用靶向CSF2（siCSF2）的小干擾RNA（siR-NA），序列如下： 5^′ -GCAGAGCCTGCTGCTCTTG -3^′ O采用非靶向siRNA（siNC）作為陰性對照si-NC：5^′-3^′ 。按照制造商的說明，使用脂質體3000（Invit-rogen）轉染siRNA的細胞。轉染 ^48h 后，通過實時熒光定量PCR（qRT-PCR）和Westernblot分析驗證了基因敲除效率。

1.1.3聚合酶鏈反應總RNA提?。菏褂肦NA提取試劑盒（RNA快速提取溶液，賽默飛世爾科學波羅的海UAB）溶液從LUSC細胞系（A549和H520）中提取總RNA。使用逆轉錄試劑盒（TaqManMicroRNA逆轉錄試劑盒，賽默費舍爾科學波羅的海大學UAB），隨機引物和M-MuLV逆轉錄酶。采用針對目標基因的特異性引物（CSF2：正向引物 5^′. -GAAT-GCCATCCAGGAGGCCC -3^′ ；反向引物 5^′ -CTTG-TACAGCTCCAGGCGGG-3和GAPDH（正向引物 AGAAGGCTGGGGCTCATTTG -3^′ ；反向引物 5^′- AGGGGCCATCCACAGTCTTC -3^′ ）進行PCR反應。PCR反應建立使用特定的引物針對感興趣的基因（CSF2）和GAPDHPCR擴增是在熱循環(huán)（GenepHlowTM凝膠/PCR試劑盒，基因援助）以下循環(huán)條件：初始變性 ，隨后進行35個循環(huán)擴增，每個循環(huán)包括 95^°C 變性 30s，60°C 退火 30s，72^°C 延伸 30s. 最后在 72^°C 進行 5min 延伸。PCR產物經瓊脂糖凝膠電泳觀察。對于CSF2和GAPDH的表達數(shù)據(jù)，將靶基因CSF2的Ct值與內參基因GAPDH的Ct值歸一化。比較CSF2的平均Ct值和GAPDH的平均Ct值。該計算基于 值進行。

1.1.4細胞增殖試驗根據(jù)說明書使用細胞計數(shù)試劑盒-8（CCK-8）試驗（Dojindo）測定細胞增殖率。將細胞接種到96孔板中，培養(yǎng)24、48和 ^72h 。然后，每孔加入 10μlCCK-8 溶液，在 37^°C 下再孵育 2h 用酶標儀測定 450nm 處的吸光度，以測定細胞活力。1.1.5遷移和入侵分析分別使用傷口愈合法和Transwell試驗評估細胞的遷移和侵襲情況。在傷口愈合試驗中，細胞被接種到6孔板中，培養(yǎng)直至達到90% 的融合度。使用無菌移液管尖端創(chuàng)建劃痕傷口，然后在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞。在受傷后 0h 和24h 采集傷口圖像，以確定遷移率。在Transwell侵襲試驗中，將細胞接種到無血清培養(yǎng)基中涂有基質的Matrigel（BD生物科學）的上腔室。將含有 10% 胎牛血清的培養(yǎng)基加入下腔室作為化學引誘劑。孵育24h 后，將通過基質膠包膜的細胞固定，染色，并在顯微鏡下計數(shù)。

1.1.6菌落形成試驗共計2000個細胞在12孔板中培養(yǎng)以形成集落。培養(yǎng)1周后，用 4% 多聚甲醛固定細胞，并用結晶紫染色。將培養(yǎng)血拍照并記錄。

1.2生存分析 本研究從TCGA數(shù)據(jù)庫（https：//portal.gdcgdc.cancer.gov/，level3）中下載551例LUSC患者（正常組49例和腫瘤組502例）的轉錄組RNA-seq數(shù)據(jù)和相應的臨床數(shù)據(jù)。使用R語言（ver-sion4.1.1）的ESTIMATE算法，加載ESTIMATE軟件包（version1.0.13），用于估計所有樣本腫瘤微環(huán)境（TME）中免疫成分和基質成分的百分比，這些結果以3個評分的形式分別表示：ESTIMATEScore、Stro-malScore 和ImmuneScore。ESTIMATEScoreStroma-IScore和ImmuneScore由ESTIMATE（基于表達數(shù)據(jù)評估腫瘤組織中基質的免疫細胞）算法計算得出。采用R語言進行生存分析。采用Kaplan-Meier方法繪制生存曲線，采用Log-rank進行統(tǒng)計學意義檢驗， Plt;0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

1.3KEGG和GO富集分析根據(jù)間質和中位數(shù)的比較，502個腫瘤樣本被標記為低或高評分，對差異基因表達進行分析，通過比較低評分和高評分樣本生成差異表達譜（DEGs）。使用聚類分析器（ver-sion4.4.4 ）、RichPlot（version1.18.3）和ggplot2（ver-sion3.3.6）對1616個DEGs在R中進行KEGG和

GO富集分析。從TCGA網(wǎng)站下載LUSC標本的臨床病理特征對應數(shù)據(jù)。采用R語言進行統(tǒng)計學分析，采用Kruskal-Wallis秩和檢驗或Wilcoxon秩和檢驗作為顯著性檢驗方法，并比較不同的臨床分期。然后利用Cytoscape（version3.8.2）進行重建。用R語言加載軟件包的單變量Cox回歸分析的生存率。

1.4統(tǒng)計學方法分類變量采用皮爾遜卡方檢驗。夏皮羅-威爾克檢驗用于檢驗連續(xù)變量的正態(tài)性。當連續(xù)變量符合正態(tài)分布時，采用t檢驗和單向方差分析來評價兩組或多組之間的差異。如果連續(xù)變量不符合正態(tài)分布，采用威爾coxon秩檢驗和克魯斯卡爾-沃利斯檢驗。采用Kaplan-Meier生存分析的Log-rank檢驗來估計各組間的具體差異。所有的統(tǒng)計分析均采用R軟件及其相應的軟件包進行， Plt; 0.05被認為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1基質與免疫與LUSC患者生存的關系及預后通過Kaplan-Meier生存分析研究評估評分、基質評分和免疫評分之間的相關性，以及它們對生存率和基質比的影響。若基質評分較高或免疫評分較高，表明TME中存在較大的基質或免疫成分。圖1A為免疫評分，通過Log-rank檢驗， P=0.250 ，表明兩組間生存差異無統(tǒng)計學意義，圖1B為基質蛋白評分（ P= 0.129），未能觀察到顯著的生存差異，圖1C為ES-TIMATE評分，為基質評分和免疫評分的總和，表示TME中基質評分和免疫評分的綜合比率（ P= 0.061），未能觀察到顯著的生存差異。

2.2LUSC患者的臨床病理分期和免疫評分的相關性研究由2.1可知基質蛋白評分和免疫評分與患者的生存率沒有相關性。因此進一步分析了臨床病理分期與評分之間的關系，如圖2所示，免疫評分和估計評分存在性別差異。觀察到免疫評分（圖2A）、基質蛋白評分（圖2B）和ESTIMATES評分（圖2C）與患者診斷時的年齡之間存在顯著的相關性。與男性相比，女性的免疫評分（ P=0.00049 ）和ESTI-MATES評分 P=0.0094 ）較高（圖2D、圖2F），男女基質評分無統(tǒng)計學差異（圖2E）。不僅如此，免疫評分（圖2G）基質評分（圖2H）和ESTIMATE評分（圖2I）與腫瘤的臨床T分期存在相關性。同樣，免疫評分（圖2J）基質評分（圖2K）和ESTIMATE評分（圖2L）與腫瘤的臨床N分期之間存在顯著相關性。進一步采用Kaplan-Meier方法來評估分類的LUSC患者的生存結果，雖然結果顯示出顯著性趨勢（Log-rank檢驗 P=0.061 ），但仍需要對更大的患者隊列進行進一步的調查以明確關聯(lián)，其余有顯著差異。這些發(fā)現(xiàn)表明免疫評分與性別可能有關。

圖2免疫評分與基質評分及ESTIMATE評分與臨床指標的相關性分析

注：A～C：免疫評分、基質評分與 ESTIMATE評分與腫瘤病理年齡的相關性;D-F：免疫評分、基質評分與 ESTIMATE評分與患者性別的相關性;G～I：免疫評分、基質評分與 ESTIMATE評分與腫瘤臨床T分期的相關性;J-L：免疫評分、基質評分與 ESTIMATE評分與腫瘤臨床N分期的相關性分析。

2.3免疫相關基因富集進一步對低評分樣本和高評分樣本進行比較分析，以確定TME中基質和免疫成分基因譜的確切變化。與中間基因相比，免疫評分（低評分和高評分樣本）獲得2266個DEGs，其中1924個基因升高，342個基因減少（圖3A）。在基質評分中共獲得2177個DEGs，其中1853個提高基因和324個下降基因（圖3B）。Venn圖所示的交叉點分析顯示，在免疫評分和基質評分中，總共有1458個升高基因和157個減少基因共享高得分和低得分（圖3C、圖3D），這些DEGs（1615個基因）可能是TME狀態(tài)的決定因素。GO富集分析和KEGG（圖3E、圖3F）顯示，差異表達基因幾乎與免疫相關的GO術語以及與免疫反應激活信號通路和免疫反應激活細胞表面受體信號通路相關的KEGG術語相匹配。

2.4PPI 網(wǎng)絡的構建分析和COX回歸分析為了進一步研究其潛在機制，繼續(xù)使用Cytoscape軟件（Na-tionalInstituteofGeneralMedicalSciences，NIGMS）構建了一個基于字符串數(shù)據(jù)庫的PPI網(wǎng)絡。圖4A顯示了534個基因之間的相互作用，按節(jié)點數(shù)排序的前30個基因。對551例LUSC患者進行Cox回歸分析，以了解哪些因素是LUSC患者生存的主要原因。隨后對PPI網(wǎng)絡的結果與Cox回歸中前16個因子的交集進行分析，只有CSF2重疊。

圖3熱圖、KEGG和GO的富集分析

注：A：熱圖展示了通過低免疫評分與高免疫評分比較聚類得到的DEGs。行名和列名分別代表基因名稱和樣本編號。B：對數(shù)變換后 fold-change大于1，并通過Wilcoxon秩和檢驗（ q=0.05 作為DEGs顯著性的閾值標準。C、D：使用Venn 圖展示在基質評分和免疫評分中共有的上調和下調DEGs，其中 log₂ 變換后的fold-change大于1且 q 值小于0.05被設定為適宜的篩選閾值。E、F：對551個DEGs進行了KEGG和GO富集分析， q 值小于0.05的富集被認為具有顯著差異。

2.5CSF2表達與LUSC患者生存率、年齡、性別和TNM分期的相關性進一步將LUSC樣本分為CSF2低表達組和高表達組進行比較，并與CSF2的中位表達量進行比較。生存分析顯示，正常組織中CSF2表達低于LUSC患者腫瘤組織中CSF2的表達（圖5A）。同一患者腫瘤和正常樣本配對驗證分析提示，正常組織中CSF2的表達高于相配對的腫瘤組織，結果見圖5B，CSF2高表達的LUSC患者的生存率較低（圖5C）。分析不同階段CSF2的表達情況，結果顯示I期與Ⅲ期（ P=0.035 ）存在統(tǒng)計學差異，且Ⅲ期CSF2的表達量低于I期（圖5D）。這些結果也提示了TME中CSF2的表達與LUSC患者的預后呈顯著正相關（圖5D～圖5G）。在N分期中， N₀ 與 N₁ （ P=0.011 和 N₂（ΔP=0.028） 之間存在統(tǒng)計學差異，隨著N分期的進展，CSF2的表達下降（圖5G），其余差異無統(tǒng)計學意義。

2.6CSF2的基因集合富集分析根據(jù)表達水平將樣本分為CSF2低表達和高表達組。使用GSEA（ver-sion4.1.0）進行分析。在CSF2高表達的組中，該基因主要富集于自然殺傷細胞介導的趨化因子信號通路和細胞毒性中（圖6A）。然而，在CSF2低表達的組中，該基因主要在剪接體和細胞周期中富集（圖6B）。研究結果表明，CSF2可能是TME狀態(tài)的一個潛在指標。

2.7TICs比值與CSF2的關系進一步評估LUSC樣品中22個TICs的比值。隨后進行相關性和差異分析，以進一步證實TME和CSF2之間的關聯(lián)。方差分析顯示，有10個TICs與CSF2的表達相關（圖7A）。相關分析顯示，相同的10個TICs與CSF2的表達水平相關（圖7B），通過相關性和差異性測試識別出的8種TICs與CSF2表達的關聯(lián)（圖7C）。

2.8敲除CSF2基因可抑制LUSC細胞的增殖、遷移和侵襲為了研究CSF2在LUSC中的作用，本研究進一步評估了CSF2對LUSC細胞增殖、遷移和侵襲的影響。首先，在4種LUSC細胞系（即SK-MES-1、

BEAS-2B、H226和H1703）中檢測到CSF2，其中H226和H1703細胞中CSF2高表達（ Plt;0.001 （圖8A）。接下來使用3種特異性siRNAs沉默H1703和H226細胞中CSF2的表達。轉染并孵育 ^48h 后，RT-qPCR 檢測到 siRNAs 對 H226、H1703和SKMES-1細胞的干擾效率，結果顯示siRNAC1S-3的沉默效率最高 Plt;0.05 （圖8B～圖8D）。CCK-8實驗顯示，與NC組相比，敲除CSF2基因可顯著降低H1703和H226細胞的存活率 Plt;0.05 （圖8E）。為進一步探討CSF2在LUSC細胞侵襲及遷移過程中的作用完善了創(chuàng)面愈合的實驗。即在H226和H1703細胞中敲除CSF2，抑制了LUSC細胞在培養(yǎng) 24h 后的遷移能力（圖8F）。除此之外，Transwell分析顯示，敲除CSF2基因降低了H1703和H226的侵襲和遷移能力（圖8G），并且克隆形成實驗顯示了H226和H1703細胞的增殖能力（圖8H）。

注：A：腫瘤與正常樣本中CSF2基因的差異表達;B：來自同一患者的腫瘤和正常樣本中CSF2表達的配對差異分析（通過Wilcoxon秩和檢驗， P=1.501e-11 ）;C：根據(jù)CSF2不同表達水平對LUSC患者的生存分析;D～G：CSF2表達與臨床病理分期特征之間的關聯(lián)。

圖5CSF2基因在樣本中的差異表達及其與LUSC患者臨床病理分期及生存特征的關系

注：A：CSF2高表達樣本中的富集通路；B：CSF2低表達樣本中的富集通路。

圖6CSF2基因的基因集富集分析

圖7TICs比例與CSF2表達量的關系

注：A：相對于CSF2表達中位數(shù)，高低CSF2表達的LUSC腫瘤樣本中21種免疫細胞的比例差異;B：12種TICs比例與CSF2表達之間的關聯(lián) （Plt;0.05） ；每圖中的直線代表聯(lián)合線性模型，指示免疫細胞比例與CSF2表達量的增比趨勢；C： Venn 圖8種TICs與CSF2表達的關聯(lián)的Venn圖。

注：A：相對于CSF2表達中位數(shù)，高低CSF2表達的LUSC腫瘤樣本中21種免疫細胞的比例差異;B：12種TICs比例與CSF2表達之間的關聯(lián) （Plt;0.05） ；每圖中的直線代表聯(lián)合線性模型，指示免疫細胞比例與CSF2表達量的增比趨勢；C： Venn 圖8種TICs與CSF2表達的關聯(lián)的Venn 圖。

圖8CSF2基因敲低抑制LUSC細胞的增殖、遷移及侵襲能力

注：A：細胞系中CSF2的mRNA表達水平;B、D：三種特異性siRNA在SK-MES-1、H1703和H226細胞中沉默 CSF2的表達;E：CSF2基因敲除對H1703和H226細胞存活率的影響;F：CSF2基因敲除對H1703和H226 細胞遷移能力的影響；比例尺： 10μm;G 利用劃痕愈合實驗評估CSF2基因敲除對H1703和H226細胞遷移能力的影響；比例尺： 100μm ;H： _H226 和 H1703 細胞的增殖能力;培養(yǎng)皿尺寸：直徑 100mm 樣本數(shù)量： n=3 ^*Plt;0.05 ^**Plt;0.01 ^***Plt;0.001 ^***Plt;0.0001 （204號

注：A：細胞系中CSF2的 mRNA 表達水平； ^B，D ：三種特異性siRNA在SK-MES-1、H1703和H226細胞中沉默CSF2的表達；E：CSF2基因敲除對H1703和H226細胞存活率的影響;F：CSF2基因敲除對 H1703和H226 細胞遷移能力的影響；比例尺： 10μm;G; 利用劃痕愈合實驗評估CSF2基因敲除對H1703和H226細胞遷移能力的影響;比例尺： 100μm ；H：H226和 H1703 細胞的增殖能力；培養(yǎng)皿尺寸：直徑 100mm 樣本數(shù)量： n=3 ^*Plt;0.05 ^**Plt;0.01 ^***Plt;0.001 ^***Plt;0.0001 。

圖8CSF2基因敲低抑制LUSC細胞的增殖、遷移及侵襲能力（續(xù)）

3討論

本研究嘗試從TCGA數(shù)據(jù)庫中定義幾個可能與LUSC患者的TNM分期和生存相關的TME相關基因。研究發(fā)現(xiàn)，這些基因在不同TNM階段的表達存在顯著差異（ Plt;0.05 ）。CSF2已被證明與免疫活性有關。通過更多的生物信息演示不難發(fā)現(xiàn)，CSF2可能是LUSC患者TME狀態(tài)的一個重要指標。TME在腫瘤的進展中為關鍵的環(huán)境因素，探索潛在的治療靶點將有助于重塑TME，從促進腫瘤發(fā)展到抑制腫瘤。本研究分析了在TCGA數(shù)據(jù)庫中挖掘到的LUSC數(shù)據(jù)，以及TME的免疫學成分對患者預后的影響，結果顯示TME中間充質/免疫成分的比例與LUSC進展顯著相關（ Plt;0.05） ，這些發(fā)現(xiàn)突出了免疫細胞和腫瘤細胞之間相互作用的含義，并為開發(fā)更有效的治療方案的潛力提供了新的見解。近年來，免疫治療也已應用于臨床，ICIs作為晚期NSCLC患者的首選藥物也已被認可[27.28]。然而，程序性死亡配體1（PD-L1）可能不是確定其使用的有效指標[29.30]NSCLC作為一種異質性腫瘤，長期以來一直被認為是一種非免疫原性腫瘤3]。然而，最近的研究發(fā)現(xiàn)[2-34]，NSCLC中腫瘤抗原特異性的細胞毒性和位點特異性的克隆TIL擴增，這與上述研究矛盾。此外，術前淋巴細胞計數(shù)較小提示早期NSCLC患者預后較差。雖然ICIs對治療NSCLC有顯著的療效，但其與免疫相關的各種副作用仍不容忽視。因此，ICIs的選擇將為NSCLC的免疫治療方案提供新的參考。本研究對TCGA數(shù)據(jù)庫中LUSC的轉錄進行分析，發(fā)現(xiàn)LUSC的低表達與晚期臨床病理特征（遠處轉移和臨床分期）和不良預后密切相關（ Plt;0.05） ，同時也發(fā)現(xiàn)CSF2表達的減少與不良預后和與前者相同的臨床特征密切相關（ Plt;0.01 ；進一步通過相關性和差異性測試分析，識別出多種TICs與CSF2表達的關聯(lián)（ _{（Plt;0.05）} ，最后通過體外實驗得出，在H226和H1703細胞中敲低CSF2的表達，降低了LUSC細胞在培養(yǎng) 24h 后的侵襲和遷移能力（ Plt;0.05 ；反之，克隆形成實驗卻顯現(xiàn)出對H226和H1703細胞的增殖能力的促進作用（ Plt;0.05） ，明確了CSF2對LUSC細胞增殖、遷移和侵襲的影響。因此，本研究推斷CSF2可能是一個潛在的治療靶點，并可能成為LUSC患者TME的預后指標。

CSF2是一種單體糖蛋白，由肥大細胞、T細胞、巨噬細胞、成纖維細胞、內皮細胞和自然殺傷細胞分泌的細胞因子[。CSF2在早期造血中刺激祖細胞增殖[17-19]，主要作用于骨髓祖細胞，并且發(fā)揮生物學效應；通過綁定高親和力受體，使其快速進入細胞周期分化為粒細胞和巨噬細胞，最終成為成熟細胞，可以延長成熟細胞的壽命，提高成熟細胞[16，17的功能。與特異性促進中性粒細胞增殖和成熟的粒細胞集落刺激因子不同，CSF2可以對更廣泛的細胞類型產生影響，特別是嗜酸性粒細胞和巨噬細胞[36.37]。

CSF2也稱白細胞生長因子[，促進干細胞產生單核細胞和粒細胞（嗜堿性粒細胞、嗜酸性粒細胞和中性粒細胞）的細胞。單核細胞離開血液循環(huán)，然后遷移到組織中，成熟為樹突狀細胞和巨噬細胞[16.38.39]。因此，它是炎癥/免疫級聯(lián)反應的一個組成部分，通過激活少量的巨噬細胞，可以迅速導致其數(shù)量的增加，成為對抗感染的一個關鍵過程。CSF2對免疫系統(tǒng)的成熟細胞也有一些影響。這些作用包括抑制中性粒細胞的遷移和誘導細胞表面受體[4表達的改變等。本研究利用ESTEST算法對LUSC樣本進行功能富集分析和LUSC中TME相關基因的測定。

綜上所述，CSF2是LUSC患者潛在的重要預后因素。此外，CSF2可能是TME狀態(tài)從免疫優(yōu)勢向代謝優(yōu)勢轉變的一個指標。因此，在LUSC患者使用CSF2抑制劑治療前，應進一步綜合分析CSF2的表達、腫瘤侵襲性免疫細胞亞型的數(shù)量以及突變驅動型的準確性。

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編輯/肖婷婷