中圖分類號：Q819 文獻標志碼：A DOI：10.19907/j.0490-6756.250019

Construction of an IL-10 delivery platform based on Norovirus-like particles and the SpyCatcher/SpyTag system

BAI Jing，MA Yan-Bing （Institute of Medical Biology，Chinese Academy of Medical Sciences/Beijing Union Medical Colge， Kunming ，China）

Abstract： IL-1O was an immunomodulatory cytokine with dual functions that plays a crucial role in tumor immunity. In this study，a delivery platform for IL-1O based on norovirus-like particles（NoV-VLP） and SpyCatcher/SpyTag system was developmented，and its anti-tumor eficacy was evaluated.The results showed that VLP-IL1O significantly suppressed tumor growth and enhanced IFN- γ response in a mouse tumor model，showing superior antitumor activity compared with free IL-1O.In vio imaging further confirmed that VLP-IL10O had enhanced lymph nodes targeting and retention capabilities relative to free IL-1O.Through the analysis of dendritic cells in lymph nodes，it was found that VLP-IL1O could better activate the maturation of dendriticcells compared with free IL-1O，and betterachieve theactivationof effector Tcells，thereby facilitating tumors immunotherapy.To address the technical bottleneck of the low expression eficiency of the SpytagIL10 fusion protein，a Trigger Factor（TF） tag was introduced，which markedly improved IL-1O expression level. Overall，the stabilityand targeting of IL-1O delivery was improved by this platform，demonstrating the potential application of virus-like particle-based IL-1O delivery in tumor immunotherapy. Keywords： IL-1O; VLP; SpyCatcher/SpyTag; Tumor immunotherapy; Cytokine delivery

1引言

IL-10是一種具有免疫調節(jié)功能的細胞因子，其在腫瘤免疫中的作用具有雙重性[1].一方面，IL-10通過抑制促炎因子的產生和抗原提呈細胞的功能，導致免疫抑制狀態(tài)，促進腫瘤的免疫逃逸和生長2.另一方面，IL-1O也顯示出免疫刺激作用，能夠增強 CD8+T 細胞和自然殺傷細胞的活性，促進抗腫瘤免疫反應[24].近年來，研究人員嘗試利用IL-1O的免疫調節(jié)特性開發(fā)新的腫瘤治療策略.例如，通過基因工程改造，設計表達IL-1O的嵌合抗原受體T細胞（CAR-T細胞），以增強其在腫瘤微環(huán)境中的功能.這些IL-1O表達的CAR-T細胞在多種腫瘤模型中顯示出增強的抗腫瘤活性，提供持久的抗腫瘤免疫力5.同時在某些情況下，低水平的IL-10有助于維持免疫穩(wěn)態(tài)，防止過度炎癥對機體的損傷.更值得關注的是，IL-10的免疫調節(jié)特性已成為腫瘤免疫治療的新切入點[6.通過基因工程改造，科學家成功開發(fā)出具有免疫激活功能的IL-10突變體[47]，這些突變體能夠增強抗腫瘤免疫反應，展現(xiàn)出作為腫瘤治療手段的潛力.但是由于單獨的IL-10分子在體內半衰期短，沒有良好的靶向性，探索一個良好的IL-10細胞因子的遞送平臺具有一定的意義.

牛津大學的MarkHowarth團隊在2012年的PNAS上發(fā)表了一種新型的體外共價鍵組裝方法，被稱為SpyCatcher/SpyTag系統(tǒng)[8].SpyCatcher和SpyTag之間通過側鏈氨基形成共價異肽鍵，從而實現(xiàn)分子間的穩(wěn)定連接．研究表明，SpyCatcher/SpyTag系統(tǒng)是一種經過驗證的高效平臺，利用分子間共價鍵實現(xiàn)抗原或靶向分子的遞送[8-10].病毒樣顆粒（VLP）因其獨特的結構和優(yōu)異的安全性，已被證明是癌癥疫苗開發(fā)的理想平臺.在癌癥疫苗設計中，高效呈遞腫瘤相關抗原至關重要，而VLP憑借其高靶向性和穩(wěn)定性，在抗原遞送方面展現(xiàn)出顯著優(yōu)勢[11-13].VLP這種結構不僅保留了與傳染性病毒相似的抗原特性，還因不含病毒核酸而完全無傳染性[14]，目前諾如病毒樣顆粒結合SpyCatcher/SpyTag系統(tǒng)呈遞細胞因子的研究還暫未有人報道.

本研究利用諾如病毒樣顆粒（NoV-VLP）作為細胞因子的遞送平臺，結合SpyCatcher/SpyTag系統(tǒng)，探究IL-1O的高效、穩(wěn)定遞送.該研究將為細胞因子療法提供新思路，展現(xiàn)IL-10在腫瘤免疫治療中的應用潛力.

2 材料與方法

2.1 實驗材料

2.1.1質粒pThioHisA質粒，購買于Invitrogen公司；pColdTMTF質粒，購買于Takara公司；pThioHisA-4S-Spycatcher 質 粒：簡稱Nov-S-catcher，由本實驗室先前構建，是將諾如病毒的S蛋白融合SpyCatcher以NdeI和EcoRI雙酶切插入pThioHisA表達載體.

2.1.2實驗動物SPF級6～8wk的雌性C57BL/6小鼠（北京斯貝福），動物許可證編號：SCXK（京）K2024-0001.實驗程序均經過醫(yī)學生物學研究所（IMBCAMS）動物使用和倫理委員會授權，倫理備案號為（DWSP202107010）.

2.1.3細胞小鼠TC-1細胞，保存于中國醫(yī)學科學院腫瘤細胞庫．

2.1.4主要試劑質粒提取試劑盒、膠回收試劑盒購于北京天根生華科技有限公司；蛋白濃度測定試劑盒購于碧云天生物技術有限公司；感受態(tài)、PCR引物、序列合成及測序均由上海生工生物工程股份有限公司合成測定；胎牛血清（FBS）1640培養(yǎng)基、胰酶均購于美國Gibco公司；IL-1O一抗購于英國Abcam公司；二抗購于成都正能公司；小鼠IFN- ?γ 的ELISPOT檢測試劑盒購于瑞典Mabtech公司．

2.2方法

2.2.1 重組IL-1O質粒的構建 合成IL-1O蛋白、連接臂及SpyTag的編碼基因.本研究選用的連接臂（Linker）氨基酸序列為：GGGGS或GSGSG.G（Gly）為甘氨酸，S為（Ser）絲氨酸.為了進行鎳柱純化，在末端添加6個組氨酸（HHHHHH）標簽.設計引物用PCR從載體上克隆出目的片段基因和載體，通過同源重組將自的片段與載體進行重組.將重組質粒轉入DH5α感受態(tài)細胞中進行轉化.2.2.2誘導表達及純化目的蛋白將重組質粒轉化至BL21（DE3）感受態(tài)細胞，接種于含氨芐青霉素的LB平板上，篩選單克隆.將測序正確的單克隆菌株進行擴大培養(yǎng)，在 37°C.220r/min 條件下培養(yǎng).當 OD₆₀₀ 達到 0.5～0.6 時，加入適量的異丙基 β -D-1-硫代半乳糖苷（IPTG），并在恒溫搖床上于特定溫度下過夜誘導蛋白表達.誘導表達結束后，收集菌液，并在 4000r/min 下離心 10min ，收集細菌沉淀.用冰冷的PBS重懸細菌沉淀，然后進行超聲破碎.收集上清液，并用 0.45μm 濾器過濾得到純凈的蛋白上清液.使用NiSepharose6FastFlow填料對蛋白上清液進行鎳親和層析純化，并通過梯度洗脫（使用 0.01mmol/L PBS， 500mmol/L 氯化鈉， 500mmol/L 咪唑， pH6.8 的洗脫緩沖液）洗脫目標蛋白.通過鎳柱純化后的目標蛋白，使用PBS進行透析，去除背景溶液，最終獲得純化后的目標蛋白.為純化得到組裝成病毒樣顆粒的VLP-catcher，使用Sepharose6FastFlow填料進行凝膠過濾層析（使用 50mmol/L Tris， 200mmol/L 氯化鈉 ，pH7.6 的組裝緩沖液），獲得均一的病毒樣顆粒，即帶有SpyCatcher的諾如病毒樣顆粒（VLP-catcher）.

2.2.3純化后蛋白及VLP的相關鑒定及驗證使用 12% 的免染SDS-PAGE蛋白凝膠分離蛋白樣品，用ImageLab拍照記錄目的條帶的圖片．再將凝膠印跡到PVDF膜上，一抗采用小鼠抗IL-10的單克隆抗體（1：100O），二抗采用HRP標記的抗小鼠IgG抗體（1：5OOO）.WesternBlotting（WB）檢測：采用標準化的流程和方法，最后用ECL顯影蛋白條帶.使用透射電子顯微鏡觀察VLP-catcher病毒樣顆粒的形態(tài).

2.2.4荷瘤小鼠模型的構建將 1×10⁵ 個/100μL的TC-1細胞對小鼠右側進行皮下接種，并隨機將小鼠平均分為3組，待腫瘤體積至 30～50mm³ 時進行干預.皮下注射VLP-IL1O（VLP-catcher為20μg ，TF-Spytag-IL10為 10μg 到小鼠體內，同時分別以注射PBS和IL-1O作為對照組，每隔1wk注射1次，共進行3次注射.監(jiān)測小鼠腫瘤生長，每隔1d測量小鼠腫瘤體積，體積計算公式為：腫瘤體積 （mm³）= 長 x （寬） ²×0.5 于第31d麻醉后處死小鼠，收集腫瘤樣本以進行進一步分析.

2.2.5酶聯(lián)免疫斑點檢測（ELISPOT）提取腫瘤浸潤的淋巴細胞.按照標準的ELISPOT檢測試劑盒中的方法進行實驗并拍照記錄分析，實驗中用的刺激肽為 E7_49-57

2.2.6流式細胞術檢測樹突狀細胞成熟的標記分離得到小鼠淋巴結中的細胞對不同的細胞標志物分別進行流式抗體染色.細胞表面分子染色步驟參考Biolegend官網，最后進行流式細胞分群的上機分析.

2.2.7統(tǒng)計分析使用GraphPadPrismlO.O軟件進行數據統(tǒng)計分析.誤差線表示平均值士標準差（SD）.腫瘤生長曲線使用Two-wayANOVA進行分析；多組比較使用One-wayANOVA進行分析； ns 表示無顯著性差異； ^*Plt;0.05 ^**Plt;0.01 ：^***Plt;0.001 ****Plt;0.0001

3 結果與分析

3.1Spytag-IL10與Trx-Spytag-IL10重組質粒 的構建及表達

通過同源重組將Spytag-IL1O融合蛋白構建在載體pThioHisA上（圖1a），通過同源重組將Trx-Spytag-IL1O融合蛋白構建在載體pThioHisA上（圖1b）.將構建好的重組質粒通過生工測序后，用1mmol/L 的異丙基 β -D-1-硫代半乳糖苷（IPTG），在恒溫搖床上 30^°C 誘導蛋白表達 16h ，發(fā)現(xiàn)誘導后IL-10融合蛋白的表達量并沒有明顯提高，并且還不足以達到純化的標準（圖1c）.

3.2TF-Spytag-IL10重組質粒的構建及表達純化

通過同源重組將Spytag-ILO融合蛋白構建在載體pColdTMTF上，載體為低溫表達載體，并同時帶有促溶標簽TriggerFactor（TF）.將構建好的重組質粒通過生工測序后，用 0.5mmol/L 的異丙基 β -D-1-硫代半乳糖苷（IPTG），在恒溫搖床上16°C 誘導蛋白表達 16h .SDS-PAGE結果顯示（圖2a），TF-Spytag-IL1O有很好的表達效果，說明加入TF標簽后對于融合蛋白Spytag-IL10的表達量有明顯的提高.將誘導后的菌體進行重懸破碎，發(fā)現(xiàn)TF-Spytag-IL1O融合蛋白主要表達在于上清中（圖2a）.通過鎳柱梯度洗脫，純化得到TF-SpytagIL10融合蛋白（圖2b），純化得到的融合蛋白純度在90% 以上，濃度經Braforad測定為 3～5mg/mL

3.3VLP-catcher的純化及與TF-Spytag-IL10共 孵育

VLP-catcher（Nov-S-catcher）的質粒由科室前期構建，按照1mmol/L的IPTG，恒溫搖床上 30^°C 誘導蛋白表達 16h ，將誘導后的菌體進行重懸破碎，通過鎳柱梯度洗脫及超濾濃縮，純化得到VLP-catcher（圖3a），純化得到的融合蛋白純度在（a）IPTG誘導TF-Spytag-IL10表達的結果（M：Proteinmarker;1：TF-Spytag-IL1O工程菌未加IPTG誘導的結果;2：TF-Spytag-IL10工程菌加IPTG誘導后的結果;3：TF-Spytag-IL10工程菌破碎后的上清;4：TF-Spytag-IL10工程菌破碎后的沉淀）；（b）鎳柱梯度洗脫純化得到TF-Spytag-IL1O重組蛋白（M：Protein marker;1：TF-Spytag-IL1O工程菌未加IPTG誘導的結果;2：TF-Spytag-IL10工程菌加IPTG誘導后的結果;3：TF-Spytag-IL10工程菌破碎后的上清;4：TF-Spytag-IL10工程菌破碎后的沉淀;5：鎳柱純化的穿流液;6-12：鎳柱梯度洗脫純化得到的蛋白）.

（a）重組質粒Spytag-IL10構建的示意圖；（b）重組質粒Trx-Spytag-IL10構建的示意圖；（c）IPTG誘導Spytag-IL1O和Trx-Spytag-IL10表達的結果（M：Protein marker;1：Spytag-IL1O工程菌未加IPTG誘導的結果;2：Spytag-IL10工程菌加IPTG誘導后的結果;3：Trx-Spytag-IL10工程菌未加IPTG誘導的結果;4：Trx-Spytag-IL10工程菌加IPTG誘導后的結果）.

Fig.1Construction and expresson of Spytag-IL1O and Trx-Spytag-IL1O recombinant plasmids.

（a）SchematicdagramofrecombinantplasmidSpytag-ILOconstruct;（b）SchematicdiagramofrecombinantplasmidTrx-Spytag-Icon struction；（c）ResuofGduedexresioofSpyg-andT-Syag-：Proemarker;1：ResultsofSyta-ei neredacteriaioutIiductio；2ResultsofpytaegiedbcteraithIiductio；3Resultsorx-Spy gineredbacteriawithoutIPTGinduction；4：ResultsofTrx-Spytag-IL1OengineredbacteriawithITGResultsafterinduction）.

（a）Resultsof1.Ommol/LITGinducedTF-Spyag-IL1Oexpression（M：Proteinmarker;1：ResultsofTF-Spyag-IL1Oengieingbac teriinducedwitoutIG；：ResultsofSytag-ngieerigbacteriinducedwithIG；3：SupeatantofTFSpyae neringbacterfrgetatioPreiiateofSpg-icteergmeatio）；）ickeodi tiopurifiaaiSagombtproterotearkesulsfaingctucd withoutPG；lsoSpag-ecterucedit；pataofSpa-ec terfragmentatio；4preciiateofSpagneacteraferfrmetatio；5ickelolpuredpriplas teins obtainedby nickel column gradient elution purification）.

85% 以上.再經分子篩二次純化得到組裝成顆粒的VLP-catcher，得到的顆粒純度在 95% 以上（圖3b）.通過透射電鏡拍攝，確認純化后的VLP-catcher已經組裝成顆粒形態(tài)，大小約在 20～30nm ，結果如圖3c.將組裝成顆粒形態(tài)的Nov-S-catcher與TF-Spytag-IL10在 4^°C 下孵育過夜，通過WB檢測，確定TF-Spytag-IL1O被展示在VLP-catcher表面，結果如圖3d.但是通過孵育結果也可以發(fā)現(xiàn)并不是所有的TF-Spytag-IL1O都被展示在VLP-catcher表面，推測可能是因為TF促融標簽的分子量過大，造成了一定的空間位阻效應，使得融合蛋白與病毒樣顆粒的結合效率大大降低.

（a）鎳柱梯度洗脫純化得到VLP-catcher（M：Protein marker;1：VLP-catcher工程菌未加IPTG誘導的結果;2：VLP-catcher工程菌加 IPTG誘導后的結果;3：VLP-catcher工程菌破碎后的上清；4：VLP-catcher工程菌破碎后的沉淀；5：鎳柱純化的穿流液；6～11：鎳柱梯度洗脫 純化得到的蛋白；12：超濾濃縮下層濾液；13：超濾濃縮得到的VLP-catcher）；（b）分子篩純化得到VLP-catcher（1＼～12：均為分子篩純化連續(xù) 收集到的蛋白樣品）；（c）電鏡觀察純化后得到的VLP-catcher;（d）VLP-catcher和TF-Spytag-IL1O共孵育后，TF-Spytag-IL10被呈遞在 VLP-catcher表面，左為WB結果，右為SDS-PAGE結果（1：VLP-catcher和TF-Spytag-IL10共孵育后的結果;2：VLP-catcher未加TF-SpytagIL10的對照）.

（a）VLP-catcherwasobtaiedbypurificationwithgradientelutiononanickelcolumn（M：Proteinmarker；l：resultsofVLP-catcherengi neringbacteriaiotGuctio；2esultsfcatchgineiacteritIGductioupeatantofVca ginerigbacteriftecushg；4Vcatcratchreginedacteriafecushg；5oufoolutioofcelfi tion;6＼～1l：rotedbcelogadtpuatio；ulrafiratoceflatea obtainedyulrafitratioconetratio）；）atchasoaidpuriioitoleulasieallfaroe tivelylletedrotepesyoleaeurifi））Eomosoeatoabdf; （d）Aftercoubatioofachenytag-FSpyg-aspreseedohatcersufaceleftistesult rightistheSD-PAGEresult（1：VP-catcherand-Spytag-10afterc-icubation;2：ontrolofV-catcherwithoutT-Sptag-）.

3.4VLP-IL10有較強的腫瘤殺傷能力

為了評價VLP-IL1O的抗腫瘤效果，將TC-1腫瘤細胞接種于C57BL/6雌鼠右側進行皮下接種，構建荷瘤小鼠模型.每7d皮下注射1次VLP-IL10，共3次，監(jiān)測腫瘤的生長情況（圖4a）.對照組分別為PBS和單獨IL1O，腫瘤生長曲線顯示，病毒樣顆粒呈遞的IL1O比游離的IL1O有更好地抑制腫瘤生長的能力.在第31d收集并稱取腫瘤塊的重量（圖4b）進行分析也支持上述結果.分離得到腫瘤塊中的淋巴細胞，通過ELISPOT檢測到，病毒樣顆粒呈遞的IL1O組表達IFN-γ的應答要強于IL10組和PBS組（圖4c）.證明了VLP-IL10有較強的抑制腫瘤生長和腫瘤殺傷的能力.

3.5VLP-IL10可以靶向淋巴結并激活樹突狀細胞的成熟

淋巴結（LNs）是免疫系統(tǒng)的基本組織，在腫瘤免疫中許多關鍵步驟都是在其中進行的，實體瘤中高度免疫抑制的微環(huán)境（TME）可能會嚴重阻礙激活LNs內抗腫瘤免疫.在TME中，樹突狀細胞（DC）等APC通常表現(xiàn)出未成熟的表型.因此，效應T細胞在實體瘤中往往存在活化不足以及募集不良的問題.病毒樣顆粒因其納米結構可以很好地靶向LNs并激活樹突狀細胞，為了探究VLP-IL1O抑制腫瘤生長的作用機制，我們對TC-1荷瘤小鼠模型進行了靶向LNs及激活DC的實驗.對荷瘤小鼠用CY7-SE染料分別對IL-1O及VLP-IL10進行標記后進行皮下給藥，分別在給藥 24h和48h后取小鼠LNs進行熒光拍照.結果顯示，病毒樣顆粒呈遞的IL1O比游離的IL1O有更好地靶向LNs及駐留的能力（圖5a），在 48h 后仍可以觀察到駐留的結果．同時，我們對 48h 后分離得到的LNs進行流式分析，結果發(fā)現(xiàn)，VLP-IL1O組可以更好地激活DC的成熟（圖5b），以達到啟動效應T細胞，最終實現(xiàn)腫瘤免疫的激活.

（a）各組腫瘤生長曲線 （n=3） ；（b）各組腫瘤的重量統(tǒng)計 （n=3. ；（c）抗原肽刺激 36h 后，腫瘤組織中的淋巴細胞分泌的 IFN-γ 通過ELISPOT檢測并定量 （n=3） .誤差線代表平均值 ± 標準差（SD）.腫瘤生長曲線使用Two-wayANOVA進行分析；多組組間比較使用one-way ANOVA進行分析； ns ，不顯著； ^*Plt;0.05 ^**Plt;0.01 ^***Plt;0.001 ^{****Plt;0.0001}

（a）Tumor growth curves of each group （n=3） ；（b）Weight statistics of tumors ineach group （n=3） ；（c）After 36hof antigenpeptide stimulation，IFN- γ secreted by lymphocytesin tumor tissueswasdetected and quantified by ELISPOT n=3 .Theerror line represents the mean ± standard deviation（SD）.Tumor growthcurves wereanalyzedbyTwo-wayANOVA；multi-groupcomparisons wereanalyzed byoneway ANOVA; ns ，not significant; ^*Plt;0.05 ^**Plt;0.01 ^{***Plt;0.001 ****Plt;0.0001}

4討論

IL-10因其在腫瘤免疫中的作用具有雙重性，一直以來是研究的熱點.本研究利用諾如病毒樣顆粒（NoV-VLP）作為遞送平臺，通過SpyCatcher/SpyTag系統(tǒng)高效呈遞IL-1O，探索其在腫瘤免疫治療中的應用潛力.SpyCatcher/SpyTag系統(tǒng)實現(xiàn)了IL-10與VLP的穩(wěn)定共價連接，有效提升了IL-10的穩(wěn)定性和遞送效率，解決了傳統(tǒng)細胞因子在靶向性和穩(wěn)定性方面的局限.

針對IL-1O與SpyTag融合后表達效率較低的技術瓶頸，本研究系統(tǒng)評估了不同促溶標簽Trx和標簽TF（TriggerFactor）的作用，發(fā)現(xiàn)TF標簽顯著提高了SpyTag-IL1O的表達水平和可溶性.TF作為分子伴侶標簽，通過減少錯誤折疊和蛋白聚集，優(yōu)化了IL-1O的折疊過程，增強了融合蛋白的穩(wěn)定性.這一結果與既往文獻報道一致，進一步驗證了TF標簽在復雜融合蛋白表達中的普適性和優(yōu)勢[15-17].此外，實驗表明，低溫表達（ 16^°C） 進一步提升了TF-SpyTag-IL1O的溶解性和純化效率，表明降低表達溫度能夠有效緩解蛋白聚集問題[18.19]，為高效生產功能性細胞因子提供了新的思路.在抗腫瘤實驗中，VLP-IL1O顯著抑制了腫瘤生長，相比游離IL-1O表現(xiàn)出更強的抗腫瘤活性和IFN-γ應答.這一結果表明，通過VLP遞送IL-10能夠顯著改善細胞因子的穩(wěn)定性和遞送效率，并在腫瘤微環(huán)境中發(fā)揮更強的免疫調節(jié)作用.值得注意的是，這一策略不僅提升了IL-10的生物活性，也進一步驗證了IL-1O在腫瘤免疫治療中的潛在價值.同時通過皮下注射熒光染料標記的VLP-IL10和游離IL-1O，發(fā)現(xiàn)病毒樣顆粒呈遞的IL-10

（a）活體成像分別拍攝皮下給藥 24h（ 左）和48h（右）后小鼠腋窩淋巴結和腹股溝淋巴結不同疫苗的靶向及駐留情況；（b）取給藥后小鼠的淋巴結進行流式分析，檢測多種DC成熟指標 （n=3） .誤差線代表平均值士標準差（SD）.流式結果比較使用one-wayANOVA進行分析；ns ，不顯著； ^*Plt;0.05 **Plt;0.01 ^***Plt;0.001

（a）Invioimagingaspefoedtoapturetetargeingandresidencofdiferentvaccnesinxllaylyphodesandinguinallyph nodesof mice after subcutaneousadministration of the vaccines for 24h （left）and 48h （right），respectively；（b）Lymph nodes of mice afteradministrationof thevaccines were taken for flow-through analysis to detectavarietyofDC maturation indices（ ?n=3） .Error linesrepresent mean ± standard deviation（SD）.The error line represents the mean ± standard deviation（SD）.Multi-group comparisons were analyzed by one-way ANOVA; ns ，not significant; ^*Plt;0.05 ^**Plt;0.01 ***Plt;0.001 ：

可以更好地靶向并駐留在淋巴結中.流式細胞術分析給藥后淋巴結中DC，發(fā)現(xiàn)VLP-IL1O可以激活DC的成熟，從而更好地實現(xiàn)效應T細胞的活化，實現(xiàn)腫瘤的免疫治療.

自基于VLP的乙肝疫苗首次開發(fā)以來，該平臺的應用不斷拓展，目前已有針對HPV和HEV等多種疾病的VLP疫苗成功上市.此外，VLP在癌癥疫苗開發(fā)中的研究也取得了重要突破[20]，通過化學連接和基因重組融合等方式[21.22]，可將異源腫瘤抗原高效引入VLP載體，進一步增強了癌癥免疫治療的效果.通過該平臺，IL-10得以精準遞送至腫瘤部位，進一步增強了遞送系統(tǒng)的穩(wěn)定性和功能性，展現(xiàn)了IL-1O在腫瘤免疫治療中的應用潛力，并為細胞因子療法與納米疫苗技術的結合提供了新思路．未來，這一遞送系統(tǒng)有望在腫瘤疫苗開發(fā)和多功能細胞因子治療中得到廣泛應用，為解決腫瘤免疫治療中的遞送效率、抗原穩(wěn)定性及精準性問題提供了重要啟示，同時，該平臺還可進一步拓展至其他治療性蛋白或抗原遞送領域，為生物醫(yī)學研究與臨床轉化提供更多可能性.

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（責任編輯：白林含）