摘要[目的]探究新疆巴音郭楞蒙古自治州庫(kù)爾勒市不同藥用部位和生長(zhǎng)年限的甘草中甘草苷和甘草酸含量差異,為有效控制其質(zhì)量提供依據(jù)。[方法]以《中國(guó)藥典》(2020年版)規(guī)定的甘草中有效成分甘草苷和甘草酸為檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn),采用高效液相色譜法測(cè)定并比較新疆巴音郭楞蒙古自治州庫(kù)爾勒市甘草藥材不同藥用部位和生長(zhǎng)年限中甘草苷和甘草酸含量,以化學(xué)成分角度來(lái)探討中藥的質(zhì)量。[結(jié)果]甘草各藥用部位甘草苷和甘草酸含量從高到低依次為側(cè)根gt;主根gt;全根gt;浮根gt;須根gt;蘆頭;側(cè)根、主根和全根中甘草苷含量符合《中國(guó)藥典》(2020年版)的規(guī)定(≥0.50%);側(cè)根中甘草酸含量符合《中國(guó)藥典》(2020年版)的規(guī)定(≥2.0%);3年生甘草藥材質(zhì)量最佳。[結(jié)論]傳統(tǒng)加工方式中直接除去的須根,可作為提取甘草苷的原材料。該研究可為甘草的采收、加工、規(guī)格等級(jí)劃分提供參考依據(jù)。
關(guān)鍵詞甘草;質(zhì)量研究;藥用部位;生長(zhǎng)年限;甘草苷;甘草酸
中圖分類號(hào)R282"文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A
文章編號(hào)0517-6611(2025)02-0183-04
doi:10.3969/j.issn.0517-6611.2025.02.036
開(kāi)放科學(xué)(資源服務(wù))標(biāo)識(shí)碼(OSID):
StudyontheQualityofDifferentMedicinalPartsofGlycyrrhizauralensiswithDifferentGrowthYears
WANGYong-fu"FANWei-bingMAEn-yao2etal
(1.GansuGuangyaoBaiyunshanTraditionalChineseMedicineTechnologyCo.,Ltd.,Dingxi,Gansu743000;2.GuangdongHanchaoTraditionalChineseMedicineTechnologyCo.,Ltd.,Guangzhou,Guangdong510000)
Abstract[Objective]ToexplorethecontentsofliquiritinandglycyrrhizicacidindifferentmedicinalpartsandgrowthyearsofGlycyrrhizauralensisinKorla,BayingolMongoliaAutonomousPrefecture,Xinjiang,soastoprovidebasisforeffectivequalitycontrol.[Method]TakingtheactivecomponentsliquiritinandglycyrrhizicacidinGlycyrrhizauralensisstipulatedinthe2020editionofPharmacopoeiaofthePeople’sRepublicofChinaasthedetectionstandard,thecontentsofliquiritinandglycyrrhizicacidindifferentmedicinalpartsandgrowthyearsofGlycyrrhizauralensisinKorla,BayingolMongoliaAutonomousPrefectureofXinjiangweredeterminedandcomparedbyHPLC,andthequalityoftraditionalChinesemedicinewasdiscussedfromthepointofviewofchemicalcomposition.[Result]Theorderofthecontentofliquiritinandglycyrrhizicacidinvariousmedicinalpartsoflicoricewaslateralrootgt;mainrootgt;wholerootgt;floatingrootgt;fibrousrootgt;reedhead;thecontentsofliquiritininlateralroot,mainrootandwholerootmettherequirementsoftheChinesePharmacopoeia(2020edition)(≥0.50%);thecontentofglycyrrhizicacidinlateralrootsmettherequirementsoftheChinesePharmacopoeia(2020edition)(≥2.0%);three-year-oldGlycyrrhizauralensishadthebestquality.[Conclusion]Thefibrousrootdirectlyremovedinthetraditionalprocessingmethodcanbeusedastherawmaterialfortheextractionofliquiritin.Thisstudycanprovidereferencefortheharvesting,processingandgradingoflicorice.
KeywordsGlycyrrhizauralensis;Qualitystudy;Medicinalparts;Growthyears;Liquiritin;Glycyrrhizicacid
甘草是豆科植物甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)、光果甘草(Glycyrrhiza glabra L.)或脹果甘草(Glycyrrhiza inflata Bat.)的根莖和干燥根[1],其主要成分包含甘草酸和甘草苷,具有補(bǔ)脾益氣、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛、調(diào)和諸藥等功效[2-5],主要生長(zhǎng)地在我國(guó)新疆、甘肅、內(nèi)蒙古、寧夏等地[6],其藥用來(lái)源有野生和栽培之分,生長(zhǎng)環(huán)境的差異對(duì)甘草藥材的質(zhì)量具有一定影響[7]。
從20世紀(jì)80年代開(kāi)始,庫(kù)爾勒市(85°11′45″~86°30′04″E、41°14′12″~42°16′02″N)開(kāi)始了甘草人工栽培技術(shù)的種植,地理氣候條件和生物資源均具有多樣性和特殊性,有著豐富的中藥民族藥資源,是新疆重要的中藥材生產(chǎn)基地,該地區(qū)光熱資源豐富、晝夜溫差大,有利于甘草的生長(zhǎng),在同等肥料及管理模式作用下,甘草的產(chǎn)量普遍較高,適宜甘草種植[8]。筆者以甘草主產(chǎn)區(qū)內(nèi)新疆巴音郭楞蒙古自治州庫(kù)爾勒市栽培甘草為材料,比較分析不同生長(zhǎng)年限(1年生、2年生和3年生)及不同藥用部位(側(cè)根、主根、全根、浮根、須根、蘆頭)有效成分的差異性,為栽培甘草的采收、加工、規(guī)格等級(jí)劃分提供參考依據(jù)。
1材料與方法
1.1試驗(yàn)材料
1.1.1儀器。LC-40D液相色譜儀(株式會(huì)社島津制作所);PL-S40T超聲波清洗器(東莞康士潔超聲波科技有限公司);PTY-105/124L十萬(wàn)分之一電子天平(華志電子科技有限公司);PTY-224/323L萬(wàn)分之一電子分析天平(華志電子科技有限公司);Direct-PureUPUV10純水儀(上海樂(lè)楓生物科技有限公司)。
1.1.2試劑。甘草苷對(duì)照品(含量95.2%,批號(hào)111610-202209)、甘草酸銨對(duì)照品(含量94.4%,批號(hào)110731-202122),均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。乙腈,色譜純,天津市康科德科技有限公司;乙醇,分析純,天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司;磷酸,分析純,天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。
1.1.3試材。甘草采自新疆巴音郭楞蒙古自治州庫(kù)爾勒市普慧鄉(xiāng)共8批樣品,其中1年生2批、2年生3批、3年生3批,均為人工育苗移栽,秋季采收,經(jīng)甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)陳垣教授鑒定為脹果甘草(GlycyrrhizauralensisFisch.)的干燥根,產(chǎn)地采收后,經(jīng)自然干燥方式干燥,8批樣品分別取其側(cè)根、主根、全根、浮根、須根、蘆頭6個(gè)藥用部位進(jìn)行研究。
1.2甘草中甘草苷、甘草酸含量測(cè)定
1.2.1 色譜條件。ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱(規(guī)格250 mm×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相A為乙腈,B為0~0.05%磷酸溶液,梯度洗脫詳見(jiàn)表1;柱溫30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)237 nm;流速1.0 mL/min;進(jìn)樣量10 μL[3]。
1.2.2 混合對(duì)照品溶液制備。精確稱取0.2 mg甘草苷對(duì)照品與20 mg甘草酸銨對(duì)照品,以50 mL 70%乙醇溶解制成混合對(duì)照品溶液(甘草苷濃度0.042 10 mg/mL、甘草酸銨濃度0.373 50 mg/mL)備用[ 9]。
1.2.3 供試品溶液制備。取過(guò)3號(hào)篩的甘草粉末約0.2 g,精密稱定后置具塞錐形瓶,加入70%乙醇100 mL后密封,稱重,超聲(功率250 W,頻率40 kHz)30 min,冷卻后再次稱重,用70%乙醇補(bǔ)齊減重,搖勻過(guò)濾得續(xù)濾液[2]。
1.2.4方法學(xué)考察。
1.2.4.1系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)。利用高效液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器精密吸取混合對(duì)照品和供試品溶液各10μL測(cè)定,記錄圖譜,考察系統(tǒng)適應(yīng)性。
1.2.4.2 線性關(guān)系考察。準(zhǔn)確稱取對(duì)照品甘草苷2 mg、甘草酸銨20 mg,加入70%乙醇定容至50 mL,濃度分別為0.042 10、0.373 50 mg/mL,作為對(duì)照品溶液。精密量取甘草苷、甘草酸銨對(duì)照品溶液1.0、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、5.0 mL置于5 mL容量瓶,以70%乙醇定容得系列濃度混合對(duì)照品溶液,按照“1.2.1”色譜條件測(cè)定。以對(duì)照品溶液濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算線性回歸方程[9]。
1.2.4.3 儀器精密度試驗(yàn)。精密吸取混合對(duì)照品溶液10 μL,按照“1.2.1”色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次,計(jì)算甘草酸銨、甘草苷峰面積的RSD[3]。
1.2.4.4重復(fù)性試驗(yàn)。取同一批供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次,按照“1.2.1”色譜條件測(cè)定,計(jì)算甘草苷、甘草酸的含量及其RSD。
1.2.4.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)。取同一供試品溶液,分別于0、2、4、8、12、16、20、24 h按照“1.2.1”色譜條件進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算甘草苷、甘草酸的含量及其RSD[1]。
1.2.4.6 加樣回收率試驗(yàn)。取同一批9份甘草粉末精密稱定0.2 g,分別加入濃度為0.011 788、0.016 840、0.021 050 mg/mL的甘草苷對(duì)照品溶液和濃度為0.085 905、0.126 990、0.171 810 mg/mL 的甘草酸銨對(duì)照品溶液各5 mL,按照“1.2.3”方法制備供試品溶液,3個(gè)樣品為一組,每個(gè)濃度3份,按照“1.2.1”色譜條件測(cè)定,計(jì)算平均回收率和RSD[9]。
1.2.5不同生長(zhǎng)年限甘草中甘草苷、甘草酸含量比較。取1年生、2年生、3年生不同年限的甘草粉末,按“1.2.3”方法制備供試品溶液,按“1.2.1”色譜條件測(cè)定,計(jì)算不同生長(zhǎng)年限甘草中甘草苷、甘草酸的含量。
1.2.6 不同藥用部位甘草中甘草苷、甘草酸含量比較。取側(cè)根、主根、全根、浮根、須根、蘆頭6個(gè)不同藥用部位的甘草粉末,按“1.2.3”法制備供試品溶液,按“1.2.1”色譜條件測(cè)定,計(jì)算各藥用部位甘草中甘草酸、甘草苷的含量[1]。
2結(jié)果與分析
2.1方法學(xué)考察
2.1.1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)。由圖1可見(jiàn),對(duì)照品和供試品各自的色譜峰形良好(拖尾因子在0.95~1.05),分離度均大于1.5,理論塔板數(shù)均大于5 000[3]。
2.1.2線性關(guān)系考察。按“1.2.4.2”方法操作,以對(duì)照品溶液濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖2),計(jì)算得出甘草苷、甘草酸銨的線性回歸方程分別為Y=5×107X-22593(R2=0.9956)、Y=1×107X-38570(R2=0.9961),表明甘草苷和甘草酸銨分別在0.00842~0.04210和0.07624~0.38120mg/mL與峰面積有良好的線性關(guān)系。
2.1.3 儀器精密度試驗(yàn)。按“1.2.4.3”方法操作,計(jì)算得出甘草苷、甘草酸銨峰面積的RSD分別為0.131 1%、0.024 0%,表明該儀器精密度良好[9]。
2.1.4 重復(fù)性試驗(yàn)。按“1.2.4.4”方法操作,計(jì)算得出甘草苷、甘草酸含量的RSD分別為0.612 4%、0.299 0%,表明該方法重復(fù)性良好[9]。
2.1.5穩(wěn)定性試驗(yàn)。按“1.2.4.5”方法操作,計(jì)算得出甘草苷、甘草酸含量的RSD分別為0.9820%、0.5514%,由此可見(jiàn)該方法穩(wěn)定性良好。
2.1.6加樣回收率試驗(yàn)。從表2~3可以看出,甘草苷和甘草酸的平均回收率分別為100.47%、100.59%,RSD分別為0.87%、1.59%,表明該方法可靠、準(zhǔn)確。
2.2 不同生長(zhǎng)年限甘草中甘草苷、甘草酸含量比較 按照“1.2.5”方法操作,計(jì)算不同生長(zhǎng)年限甘草中甘草苷、甘草酸的含量,發(fā)現(xiàn)3年生含量最高,2年生次之,1年生最低。從圖3和圖4可以看出,甘草生長(zhǎng)年限不同,其有效成分甘草苷和甘草酸含量具有明顯差異,人工栽培甘草中甘草苷和甘草酸的含量隨生長(zhǎng)期增長(zhǎng)而升高,即1年生﹤2年生﹤3年生;1年生所有部位中甘草酸含量均低于《中國(guó)藥典》(2020年版)的規(guī)定(≥2.0%),2年生和3年生主根和側(cè)根中甘草酸含量均符合《中國(guó)藥典》(2020年版)的規(guī)定[3];1年生甘草所有部位中甘草苷含量均低于《中國(guó)藥典》(2020年版)的規(guī)定(≥0.50%),2年生甘草全根、主根、側(cè)根中甘草苷含量均符合《中國(guó)藥典》(2020年版)的規(guī)定,而3年生甘草全根、主根、側(cè)根中甘草苷含量均超出《中國(guó)藥典》(2020年版)規(guī)定的1.38~2.16倍,確定3年生甘草藥材質(zhì)量最佳[9-11]。
2.3不同藥用部位甘草中甘草苷、甘草酸含量比較按照“1.2.6”方法操作,計(jì)算不同藥用部位甘草中甘草苷、甘草酸的含量,發(fā)現(xiàn)其含量從高到低依次為側(cè)根gt;主根gt;全根gt;浮根gt;須根gt;蘆頭(圖3和圖4)。
按照干燥品計(jì)算,甘草各藥用部位甘草苷和甘草酸含量差異明顯,側(cè)根中含量最高(甘草苷0.45%~1.34%,平均0.85%;甘草酸1.7%~2.7%,平均2.2%);其次是主根(甘草苷0.37%~1.13%,平均0.75%;甘草酸1.5%~2.3%,平均1.9%)、全根(甘草苷0.36%~1.08%,平均0.72%;甘草酸1.4%~2.2%,平均1.8%)、須根(甘草苷0.21%~0.63%,平均0.42%;甘草酸1.4%~1.9%,平均1.7%),蘆頭中含量最低(甘草苷0.22%~0.58%,平均0.40%;甘草酸0.8%~1.8%,平均1.3%)。其中側(cè)根、主根和全根中甘草苷平均含量均符合《中國(guó)藥典》(2020年版)的規(guī)定(≥0.50%),而蘆頭中僅一批樣品甘草苷含量(0.58%)符合《中國(guó)藥典》(2020年版)的規(guī)定,其余均低于《中國(guó)藥典》(2020年版)的規(guī)定,說(shuō)明蘆頭不適合作為以甘草苷為有效成分的藥用部位。
3結(jié)論與討論
3.1不同藥用部位甘草中甘草苷和甘草酸的含量該研究通過(guò)對(duì)甘草不同藥用部位甘草苷和甘草酸含量的測(cè)定,發(fā)現(xiàn)甘草藥材各藥用部位含量差異明顯,具體表現(xiàn)為側(cè)根gt;主根gt;全根gt;浮根gt;須根gt;蘆頭。側(cè)根中甘草苷和甘草酸含量最高,2年生、3年生甘草中須根和地上部位浮根含量也基本能夠滿足《中國(guó)藥典》(2020年版)的要求。在傳統(tǒng)的加工方式中,在產(chǎn)地直接將浮根和須根除去,如果只以甘草苷和甘草酸為考核指標(biāo),則應(yīng)保留浮根和須根部分,以增加甘草的供應(yīng)量,降低企業(yè)有效成分提取的原料成本。
3.2 采收時(shí)期對(duì)甘草苷和甘草酸含量的影響 來(lái)自巴音郭楞蒙古自治州庫(kù)爾勒市普慧鄉(xiāng)的樣品,分別采挖了1年生、2年生、3年生,該研究表明,隨著生長(zhǎng)年限的增加,甘草苷和甘草酸的含量隨之增加,這與葉菊等[12]的研究結(jié)果一致,3年生甘草側(cè)根、主根、全根中甘草苷含量均高于2年生和1年生,2年生、3年生甘草側(cè)根、主根、全根中甘草酸含量均高于1年生,但浮根中甘草苷和甘草酸含量低于2年生甘草含量,可以推斷,3年生樣品中甘草苷地上部分向地下部分的轉(zhuǎn)移率更高,說(shuō)明甘草采收時(shí)間以地上部分全部枯萎后進(jìn)行采收為宜。
3.3藥材品質(zhì)的優(yōu)良性此次所收集的甘草樣本來(lái)源于新疆巴音郭楞蒙古自治州庫(kù)爾勒市普慧鄉(xiāng),為甘草道地產(chǎn)區(qū)之一,按干燥品計(jì)算,2年生和3年生甘草藥材全根中甘草苷和甘草酸含量均超出《中國(guó)藥典》(2020年版)的規(guī)定(按照干燥品計(jì)算,甘草苷不得少于0.50%,甘草酸不得少于2.0%),驗(yàn)證了新疆所產(chǎn)道地甘草藥材的高品質(zhì)。
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