摘要：目的 探究慢性腎臟疾病（CKD）循環(huán)中成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）23通過與心房組織成纖維細(xì)胞生長因子受體（FGFR）4結(jié)合促進(jìn)心房纖維化的可能機(jī)制。方法 選擇健康雄性SD大鼠22只，隨機(jī)數(shù)字表法抽取14只行5/6腎切除手術(shù)并且喂養(yǎng)15周建立CKD模型，剩余8只作為假手術(shù)（Sham）組。觀察2組體質(zhì)量、血壓、腎功能、超聲心動(dòng)圖、心外膜電標(biāo)測以及病理指標(biāo)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定2組大鼠循環(huán)中的FGF23水平，左心房組織轉(zhuǎn)錄組測序?qū)ふ也町惐磉_(dá)基因。大鼠心房成纖維細(xì)胞分為對照組、FGFR抑制劑組、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）組及TGF-β+FGFR抑制劑組，采用Western blot法檢測α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）、膠原蛋白Ⅰ（ColⅠ）以及磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）蛋白的表達(dá)。結(jié)果 CKD組大鼠收縮壓、肌酐以及血尿素氮水平升高。心臟電生理檢查顯示CKD可促進(jìn)心房顫動(dòng)及房室傳導(dǎo)阻滯的發(fā)生。心臟超聲提示CKD組左心房內(nèi)徑明顯增大，病理染色顯示CKD組左心房發(fā)生明顯纖維化，心外膜電標(biāo)測提示CKD組大鼠左心房電傳導(dǎo)速度明顯減慢并且傳導(dǎo)異質(zhì)性明顯增加。CKD大鼠循環(huán)中的FGF23水平明顯增加。Western blot檢測發(fā)現(xiàn)CKD組大鼠FGFR4表達(dá)上調(diào)。阻斷心房成纖維細(xì)胞FGF23/FGFR4信號通路后，纖維化相關(guān)蛋白α-SMA、ColⅠ及p-AKT/AKT降低。結(jié)論 CKD可能通過誘導(dǎo)心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)及電重構(gòu)促進(jìn)房顫的發(fā)生，循環(huán)中增加的FGF23可能通過與心房組織中FGFR4結(jié)合啟動(dòng)下游AKT通路，進(jìn)而促進(jìn)心房纖維化。

關(guān)鍵詞：腎疾?。恍姆款潉?dòng)；纖維化；心房重構(gòu)；成纖維細(xì)胞生長因子；受體，成纖維細(xì)胞生長因子

中圖分類號：R541.75 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A DOI：10.11958/20240171

Promoting effect of circulating FGF23 on atrial fibrosis in chronic kidney disease

GAO Pan， XIE Bingxin， ZHOU Zandong， LIU Tong△

Department of Cardiology， the Second Hospital of Tianjin Medical University， Tianjin Key Laboratory of Ionic-Molecular

Function of Cardiovascular Disease， Tianjin Institute of Cardiology， Tianjin 300211， China

△Corresponding Author E-mail： liutongdoc@126.com

Abstract： Objective To explore the possible mechanisms by which fibroblast growth factor （FGF） 23 promoted atrial fibrosis in circulation of chronic kidney disease （CKD） by binding to atrial tissue fibroblast growth factor receptor （FGFR） 4. Methods Twenty-two healthy male Sprague-Dawley （SD） rats were selected. Rats were randomly selected to undergo 5/6 nephrectomy and fed for 15 weeks to establish a CKD model （n=14）. The remaining 8 rats were used as the sham group. The sham group （n=8） underwent the same surgery without removing renal tissue. Body weight， blood pressure， renal function， cardiac ultrasound， epicardial electrocardiography and pathological indices were monitored in both groups. Enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） method was used to determine the circulating levels of FGF23 in the two groups of rats. Transcriptomic analysis of left atrial tissue was performed to search for differentially expressed genes. Rat atrial fibroblasts were divided into the control group， the FGFR inhibitor group， the transforming growth factor-β （TGF-β） group and the TGF-β+FGFR inhibitor group. The expression levels of α-smooth muscle actin （α-SMA）， collagenⅠ （Col Ⅰ） and phosphorylated protein kinase B （p-AKT） protein were detected by Western blot assay. Results Systolic blood pressure， blood urea nitrogen and creatinine were elevated in the CKD group of rats. Cardiac electrophysiological study showed that CKD could promote the occurrence of atrial fibrillation （AF） and atrioventricular block. Cardiac ultrasound suggested that the internal diameter of the left atrium was significantly increased in rats of the CKD group. Pathological findings showed that the left atrium in the CKD group underwent significant fibrosis， and epicardial electrical markers showed that left atrial electrical conduction velocity was significantly slower and conduction heterogeneity was significantly increased in the CKD group. These changes were accompanied by higher circulating FGF23. Western blot results showed that FGFR4 expression was upregulated in the CKD group. After blocking the FGF23/FGFR4 signaling pathway in atrial fibroblasts， the fibrosis-related proteins α-SMA， Col Ⅰ and p-AKT/AKT were decreased. Conclusion CKD promotes the occurrence of AF by inducing both structural and electrical remodeling. Increased circulating FGF23 promotes atrial fibrosis by activating the downstream AKT pathway binding to FGFR4 in atrial tissue.

Key words： kidney diseases; atrial fibrillation; fibrosis; atrial remodeling; fibroblast growth factors; receptors， fibroblast growth factor

成年人慢性腎臟疾?。–KD）的患病率已經(jīng)達(dá)到10.8%［1］，并且逐年升高。非透析依賴型CKD患者的心血管病死亡風(fēng)險(xiǎn)是年齡匹配普通人群的10倍，透析依賴型患者的風(fēng)險(xiǎn)則進(jìn)一步增加［2-3］。2020年，全球心房顫動(dòng)（房顫）患者數(shù)量已達(dá)3 750萬，占總?cè)丝诘?.51%［4］。CKD患者中房顫的患病率比普通人群高2～3倍［5-6］，CKD合并房顫會顯著增加腦卒中、血栓栓塞事件及抗凝治療出血的風(fēng)險(xiǎn)［7-8］。成纖維細(xì)胞生長因子23（FGF23）是一種重要的磷調(diào)節(jié)激素，其受體包括成纖維細(xì)胞生長因子受體（FGFR）1—4，在心臟和腎臟均有表達(dá)。隨著腎功能下降，血清中FGF23的水平逐漸升高，是CKD患者發(fā)生心血管事件及開始透析的獨(dú)立危險(xiǎn)因素［9］，同時(shí)也是房顫發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素［10］。最近研究表明FGF23可通過與FGFR4結(jié)合促進(jìn)心室肥厚［11］?；A(chǔ)研究顯示FGF23可促進(jìn)心房纖維化［12］，但具體作用機(jī)制尚不明確。本研究通過CKD模型大鼠觀察CKD對心房纖維化和房顫的影響，并探討其潛在機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 主要材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與細(xì)胞 6周齡SPF級雄性SD大鼠22只，體質(zhì)量200～250 g，購自北京華阜康生物科技有限公司，生產(chǎn)許可證號：SCXK（京）2019-0008。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房內(nèi)采用分籠飼養(yǎng)，環(huán)境溫度維持在23～25 ℃，濕度保持在50%～60%。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)遵循《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)和使用指南》相關(guān)要求，所有實(shí)驗(yàn)方案均經(jīng)過天津醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物管理和使用委員會審批。大鼠心房成纖維細(xì)胞購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫，培養(yǎng)于含有10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中，在37 ℃、5%CO2條件下進(jìn)行培養(yǎng)。

1.1.2 主要試劑與儀器 胎牛血清、二辛可寧酸（BCA）蛋白濃度測定試劑盒購自賽默飛世爾科技有限公司；DMEM/F12培養(yǎng)基購自北京中生奧邦生物科技有限公司；大鼠FGF23酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒購自武漢華美生物公司；FGFR抑制劑PD173074購自美國Selleck公司；轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）購自英國Abcam公司；肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）測試盒購自南京建成生物工程研究所；兔抗α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）、膠原蛋白Ⅰ（ColⅠ）抗體購自英國Abcam公司；兔抗蛋白激酶B（AKT）、磷酸化AKT（p-AKT）抗體購自美國CST公司；兔抗FGFR4、鼠抗甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）抗體、山羊抗兔IgG和山羊抗鼠IgG購自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司。

實(shí)驗(yàn)室小動(dòng)物超聲成像系統(tǒng)購自加拿大VisualSonics公司；智能無創(chuàng)血壓計(jì)購自日本Softron公司；多導(dǎo)電生理系統(tǒng)購自上海宏桐實(shí)業(yè)有限公司；MappingLab矩陣式多通道心臟電生理標(biāo)測系統(tǒng)購自美國東樂自然基因生命科學(xué)公司；多功能倒置顯微鏡IX73購自日本奧林巴斯公司；電泳儀購自美國伯樂公司；Tanon 5200系列全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光圖像分析系統(tǒng)購自上海天能科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 CKD大鼠模型構(gòu)建 大鼠在適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為CKD組14只，假手術(shù)（Sham）組8只。腹腔注射3%三溴乙醇（300 mg/kg）進(jìn)行麻醉，待大鼠完全麻醉后采取俯臥位固定。固定后進(jìn)行脫毛處理，然后鋪無菌洞巾，使用碘伏進(jìn)行消毒處理。CKD組行5/6腎切除手術(shù)。右側(cè)腎臟行全部切除，左側(cè)切除腎臟的上端和下端，明膠海綿止血充分后還納體內(nèi)，最后進(jìn)行縫合和消毒處理。Sham組只進(jìn)行腎脂肪囊的分離，不切除腎組織。手術(shù)后大鼠可以自由活動(dòng)，15周后結(jié)束造模。

1.2.2 超聲心動(dòng)圖檢查 每組取5只大鼠，于基線及造模后4周、8周及15周時(shí)進(jìn)行，通過面罩對大鼠進(jìn)行異氟醚和純氧的混合氣體（1∶49，1.5 L/min）麻醉，然后將其仰臥位固定。大鼠胸部脫毛、涂抹超聲耦合劑后，在B型超聲模式下，采用胸骨旁左室長軸切面測量左心房內(nèi)徑（LAD），測量3個(gè)心動(dòng)周期并取平均值。

1.2.3 血壓測量 每組取5只大鼠，在安靜封閉的環(huán)境中打開血壓計(jì)，將大鼠置入智能無創(chuàng)血壓儀配備的固定容器內(nèi)，將感應(yīng)器按照指示方向穿過鼠尾。待血壓波動(dòng)曲線穩(wěn)定無干擾后開始測量血壓，測量指標(biāo)包括收縮壓、舒張壓以及平均動(dòng)脈壓，重復(fù)測量3次取平均值。

1.2.4 經(jīng)食管電生理檢查及心電圖測量 大鼠麻醉后仰臥位固定，連接體表心電圖肢體導(dǎo)聯(lián)。用LabChart8 Reader軟件對50個(gè)連續(xù)心動(dòng)周期的心電圖間隔進(jìn)行計(jì)算。食管電極固定于貼近大鼠左心房位置，進(jìn)行電生理檢查及房顫誘發(fā)，竇房結(jié)恢復(fù)時(shí)間定義為最后1個(gè)起搏波至第1個(gè)恢復(fù)的竇性心房波之間的時(shí)限。采用心房Burst刺激誘發(fā)房顫，參數(shù)設(shè)置如下：刺激模式為連續(xù)單刺激，刺激電壓5 V，脈沖波寬2.5 ms，間隙20 ms。每次刺激30 s，間隔1 min行下一次刺激，共進(jìn)行5次。刺激結(jié)束后，若心電記錄中P波消失，出現(xiàn)無序活動(dòng)的“f”波，且持續(xù)時(shí)間超過1 s，則判定為房顫發(fā)生。據(jù)既往研究報(bào)道，誘發(fā)3次及以上的房顫為房顫陽性［13］。記錄每組的房顫誘發(fā)率及持續(xù)時(shí)間。

1.2.5 心外膜電標(biāo)測 每組取5只大鼠，完成氣管插管后，切開劍突下腹部皮膚，露出腹部臟器，切開橫膈膜，露出心臟。使用6×6微電極記錄左心房心外膜電標(biāo)測圖。數(shù)據(jù)由多通道系統(tǒng)記錄。激活波形經(jīng)濾波放大器放大后傳送到計(jì)算機(jī)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測和數(shù)據(jù)采集。使用EMapScope 4.0軟件數(shù)字化所有激活時(shí)間并繪制激活地圖。測量傳導(dǎo)速度、不均勻指數(shù)、絕對不均勻性等指標(biāo)。

1.2.6 腎功能及FGF23測定 每組取5只大鼠，通過尾靜脈獲取靜脈血，靜置30 min后經(jīng)高速離心機(jī)離心（3 000 r/min，15 min），取上清液用于腎功能和FGF23的測定。Cr采用肌氨酸氧化酶法進(jìn)行測定，BUN采用二乙酰肟比色法進(jìn)行測定，F(xiàn)GF23采用ELISA法進(jìn)行測定。按照試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行操作。

1.2.7 組織病理檢查 每組取5只大鼠的心臟組織，4%多聚甲醛固定左心房，常規(guī)組織脫水及石蠟包埋，包埋后的蠟塊3 μm切片，45 ℃恒溫水浴攤片，60 ℃烤片1 h，烘干機(jī)65 ℃烘干2 h。切片進(jìn)行HE及Masson染色，在400倍視野下隨機(jī)讀取5個(gè)視野拍照，利用Image J軟件計(jì)算出膠原纖維的占比。

1.2.8 左心房組織轉(zhuǎn)錄組測序及結(jié)果分析 2組大鼠各取3個(gè)凍存的左心房標(biāo)本組織，送武漢華大基因公司進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序，登錄華大基因多組學(xué)系統(tǒng)獲取分析報(bào)告。生物信息學(xué)分析方面，根據(jù)差異表達(dá)基因（DEGs）生成火山圖，并進(jìn)行京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路富集分析。以P.adjust（P.adj）代表FDR校正后P值，P.adj＜0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2.9 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)及分組 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分為對照組、TGF-β組、TGF-β+FGFR抑制劑組以及FGFR抑制劑組。復(fù)蘇大鼠心房成纖維細(xì)胞，第2天換液。正常傳代種板（6孔板），待細(xì)胞密度達(dá)到70%左右后予以2%完全培養(yǎng)基過夜。FGFR抑制劑組和TGF-β+FGFR抑制劑組加入50 μg/L FGFR抑制劑PD173074，1 h后，TGF-β組和TGF-β+FGFR抑制劑組加入10 μg/L TGF-β。8 h后收集細(xì)胞，PBS清洗3遍后放入-80 ℃超低溫冰箱內(nèi)以備后續(xù)蛋白檢測。

1.2.10 Western blot檢測 從-80 ℃超低溫冰箱內(nèi)取出組織樣品，并加入1%的RIPA裂解液后放入組織勻漿機(jī)研磨。使用高速離心機(jī)，設(shè)定為4 ℃、14 000 r/min離心15 min。離心完畢采用BCA方法測定蛋白質(zhì)濃度。加入loading buffer后95 ℃加熱15 min，室溫冷卻5 min。按照濃縮膠80 V、分離膠120 V進(jìn)行恒壓電泳，電泳結(jié)束后通過三明治濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)膜。轉(zhuǎn)膜結(jié)束后用5%脫脂奶粉封閉1 h，然后用TBST清洗3次。使用α-SMA（1∶3 000）、ColⅠ（1∶1 000）、FGFR4（1∶1 000）、AKT（1∶1 000）、p-AKT（1∶1 000）及GAPDH（1∶5 000）的一抗稀釋液在4 ℃條件下孵育過夜。次日回收相應(yīng)一抗，用TBST洗滌3次，每次10 min，室溫孵育相應(yīng)種屬的二抗（1∶5 000）1 h，再次用TBST洗滌3次，每次10 min。最后在膜上添加1∶1的超敏型化學(xué)發(fā)光劑，使蛋白條帶發(fā)光顯影，并使用Image J工具分析各組蛋白的灰度值，以目的蛋白/GAPDH灰度值比值表示目的蛋白的相對表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（[x] ±s）表示，2組間比較使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較用LSD-t法。計(jì)數(shù)資料采用百分率表示，組間比較使用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 模型動(dòng)物一般情況比較 與Sham組相比，CKD組大鼠Cr水平、BUN水平、收縮壓、心臟質(zhì)量與脛骨長度的比值升高（P＜0.05），體質(zhì)量、平均動(dòng)脈壓和舒張壓差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

2.2 電生理檢查結(jié)果比較 與Sham組相比，CKD組大鼠基線心電圖QT間期、竇房結(jié)恢復(fù)時(shí)間和房顫持續(xù)時(shí)間明顯延長（P＜0.05），見表2。電生理檢查過程中，CKD組大鼠有2只在電刺激后經(jīng)歷了竇性心動(dòng)過緩、一度房室傳導(dǎo)阻滯及高度房室傳導(dǎo)阻滯，最終心臟驟停死亡。此外CKD組大鼠中有3只間斷出現(xiàn)房室傳導(dǎo)阻滯（未死亡），房室阻滯類型包含二度Ⅱ型房室傳導(dǎo)阻滯、高度房室傳導(dǎo)阻滯以及房顫合并三度房室傳導(dǎo)阻滯，見圖1。房顫誘發(fā)結(jié)果顯示CKD組12只大鼠中共有8只誘發(fā)房顫，而Sham組8只大鼠中僅有1只誘發(fā)房顫，2組房顫誘發(fā)率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.021）。

2.3 大鼠心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)及電重構(gòu)比較 心臟超聲結(jié)果顯示，CKD組大鼠LAD大于Sham組。造模后4周起，CKD組大鼠LAD增大（P＜0.05），見圖2、表3。Masson染色顯示CKD組大鼠的左心房發(fā)生了明顯的纖維化，組織膠原容積分?jǐn)?shù)較Sham組顯著增加，α-SMA、ColⅠ蛋白表達(dá)顯著增多（P＜0.05），見圖3、4，表4。心外膜電標(biāo)測結(jié)果顯示CKD組大鼠左心房傳導(dǎo)速度較Sham組減慢，絕對不均一性和不均勻性指數(shù)顯著增加（P＜0.05），見圖5、表4。

2.4 2組差異表達(dá)基因和FGF23、FGFR4表達(dá)水平比較 與Sham組相比，CKD組共有140個(gè)上調(diào)基因，174個(gè)下調(diào)基因。KEGG富集分析發(fā)現(xiàn)上調(diào)基因主要集中在心肌收縮、心肌肥厚等方面，見圖6。與Sham組相比，CKD組循環(huán)中FGF23水平及左心房中FGFR4蛋白表達(dá)水平增高（P＜0.05），見圖7、表5。

2.5 4組細(xì)胞中ColⅠ、α-SMA、p-AKT、FGFR4蛋白表達(dá)水平比較 與對照組和FGFR抑制劑組相比，TGF-β組細(xì)胞α-SMA、ColⅠ及FGFR4蛋白表達(dá)水平升高，p-AKT/AKT升高（P＜0.05）。與TGF-β組相比，TGF-β+FGFR抑制劑組α-SMA、ColⅠ及FGFR4蛋白表達(dá)水平降低，p-AKT/AKT降低（P＜0.05），見圖8、表6。

3 討論

本研究結(jié)果表明CKD可促進(jìn)心肌肥厚、收縮壓升高，并且可誘導(dǎo)心律失常的發(fā)生。此外，CKD還可促進(jìn)心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)及電重構(gòu)，表現(xiàn)為心房擴(kuò)大、心房纖維化、心房傳導(dǎo)速度減慢及傳導(dǎo)異質(zhì)性增加。本研究進(jìn)一步對CKD誘導(dǎo)心房纖維化的下游機(jī)制進(jìn)行了探討，發(fā)現(xiàn)CKD循環(huán)中增加的FGF23可能通過與心房組織中FGFR4結(jié)合啟動(dòng)下游AKT信號通路，進(jìn)而促進(jìn)心房纖維化的發(fā)生，見圖9。

CKD相關(guān)房顫的機(jī)制是近年來的研究熱點(diǎn)。研究認(rèn)為，炎癥、氧化應(yīng)激、腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）激活以及鈣調(diào)控異常是CKD相關(guān)房顫的潛在機(jī)制［14］。既往研究提示，在CKD早期階段，炎癥標(biāo)志物的水平即開始上升，并隨疾病進(jìn)展逐漸升高［15-16］。Song等［16］通過建立5/6腎切除CKD模型發(fā)現(xiàn)CKD可通過激活心房NOD樣受體家族3（NLRP3）促進(jìn)心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)和電重構(gòu)的發(fā)生，予以白細(xì)胞介素-1β抗體可預(yù)防CKD引起的房顫。此外，激活RAAS可活化下游TGF-β1/SMADS通路［17］，誘導(dǎo)活性氧產(chǎn)生和氧化應(yīng)激，加重心房壓力負(fù)荷和心房纖維化，最終導(dǎo)致房顫發(fā)生［17-18］。既往研究提示，CKD中鈣代謝的變化導(dǎo)致心肌電生理學(xué)的改變［19］，包括竇房結(jié)自發(fā)激動(dòng)的減少、左心房動(dòng)作電位持續(xù)時(shí)間的縮短及房顫易感性增加。Chen等［20］通過用尿毒素處理兔離體的左心房、右心房、肺靜脈，發(fā)現(xiàn)尿毒素通過促進(jìn)氧化應(yīng)激增加了肺靜脈和心房起源的異位興奮灶，提示氧化應(yīng)激在CKD相關(guān)房顫中發(fā)揮一定作用。由此可見，CKD相關(guān)房顫的病理生理機(jī)制較復(fù)雜，目前仍存在較多爭議，有待進(jìn)一步的研究探討。

本研究觀察到CKD組大鼠血清中的FGF23水平顯著升高，其受體FGFR4在左心房組織中的表達(dá)亦顯著升高。給予FGFR抑制劑可顯著降低TGF-β刺激心房成纖維細(xì)胞后生成的纖維化相關(guān)蛋白α-SMA、ColⅠ的表達(dá)，并通過激活A(yù)KT信號通路促進(jìn)纖維化的發(fā)生。本研究結(jié)果提示FGF23與FGFR4結(jié)合可激活下游AKT信號通路，F(xiàn)GF23/FGFR4參與了TGF-β的促纖維化過程。FGF23在心房纖維化和房顫中的作用目前仍存在爭議。既往有研究表明FGF23與TGF-β協(xié)同促進(jìn)心室纖維化［21］。亦有研究提示RAAS激活可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞中FGF23水平增加，從而促進(jìn)心肌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞的纖維化［22］；此外，F(xiàn)GF23也可通過旁分泌作用促進(jìn)肌成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，進(jìn)而促進(jìn)纖維化的發(fā)生和發(fā)展［23］。本研究提示FGF23/FGFR4可能參與TGF-β的促纖維化過程，阻斷其受體FGFR4可逆轉(zhuǎn)TGF-β的促纖維化作用。

FGF23與其受體FGFR4在CKD相關(guān)多種病理生理過程中扮演重要角色。Grabner等［23］發(fā)現(xiàn)，心室肌細(xì)胞中的FGF23與FGFR4結(jié)合后激活PLCγ/calcineurin/NFAT通路，促進(jìn)左心室肥厚的發(fā)生，抑制CKD大鼠中的FGFR4可以顯著改善心室肥厚。Han等［24］發(fā)現(xiàn)，心臟特異性敲除FGFR4的小鼠在接受外源重組FGF23后沒有發(fā)生左室肥厚，表明FGF23/FGFR4相互作用在左室肥厚的進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。Singh等［25］發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)GF23可通過與肝細(xì)胞上的FGFR4結(jié)合，進(jìn)而激活PLCγ/calcineurin/NFAT通路，導(dǎo)致炎癥因子水平升高，在5/6腎切除大鼠模型中使用FGFR4抑制劑后炎癥因子水平顯著下降。這些研究結(jié)果提示FGF23可能通過與心房成纖維細(xì)胞的FGFR4結(jié)合，在CKD相關(guān)房顫的病理生理過程中發(fā)揮重要作用。

本研究存在一定的局限性。首先，CKD導(dǎo)致房顫的機(jī)制十分復(fù)雜，本研究僅在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)上進(jìn)行了FGF23/FGFR4通路的驗(yàn)證，缺乏條件性基因敲除動(dòng)物或過表達(dá)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。其次，本研究選用5/6腎切除動(dòng)物模型探討CKD對房顫的影響有一定的局限性，氧化應(yīng)激、炎癥、高血壓、貧血和RAAS等多種因素均會導(dǎo)致腎功能不全時(shí)房顫的發(fā)生和發(fā)展。該模型尚不能完全體現(xiàn)和模擬CKD患者的臨床特征，今后還需更多研究來探索其相關(guān)機(jī)制。

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（2024-02-02收稿 2024-04-16修回）

（本文編輯 李國琪）