【摘 要】 目的：研究尖尾芋炮制前后（尖尾芋生品和米炒尖尾芋）顯微結(jié)構(gòu)、薄層色譜、指紋圖譜的變化。方法：觀察尖尾芋生品及其炮制品藥材粉末的顯微鑒別特征，采用TLC對(duì)尖尾芋生品及其炮制品進(jìn)行鑒別，采用HPLC法建立尖尾芋生品及其炮制品指紋圖譜。結(jié)果：尖尾芋經(jīng)米炒炮制后草酸鈣針晶形態(tài)、TLC及HPLC指紋圖譜均發(fā)生明顯改變，指紋圖譜相似度均大于0.9，歸納出尖尾芋藥材10個(gè)共有峰，米炒尖尾芋8個(gè)共有峰。結(jié)論：比較了尖尾芋藥材與其制品之間顯微、TLC及指紋圖譜的差異，為尖尾芋及米炒尖尾宇質(zhì)量控制提供方法依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 尖尾芋；炮制品；高效液相色譜；指紋圖譜；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

【中圖分類號(hào)】Ｒ927.1

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A""" 【文章編號(hào)】1007-8517（2024）14-0022-06

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.14.zgmzmjyyzz202414005

Comparative Study on Quality of Alocasia cucullata before and after Processing

MO Dandan1 ZHANG Yingting2 OU Chunli1 GONG Xiaomei1

ZHOU Xiaolei1 WAND Shuo1 TANG Binglan1*

1.Guangxi Key Laboratory of Medicinal Resources Protection and Genetic Improvement，

National Center for TCM Inheritance and Innovation，Guangxi Botanical Garden of

Medicinal Plants， Nanning 530023，China；

2.Guangxi Zhuang Autonomous Region Food and Drug Inspection Institute，Nanning 530022，China

Abstract：Objective To study the changes of microstructures， thin layer chromatography （TLC） and fingerprint spectra of Alocasia cucullata before and after processing. Methods To observe the microscopic identification characteristics of taro and its processed products，the raw products and its products were identified by TLC， and the fingerprints of the raw products and its products were established by HPLC.Results After processing， the morphology of calcium oxalate needle crystals， TLC and HPLC fingerprints were significantly changed.The similar degree of 10 batch samplesbuiding sharing mode of crude drnug and processed product was above 0.9，10 common peaks in chromatograms were separated from 10 batches of Alocasia cucullata samples and 8common peaks in chromalograms were separated from 10 batches of the processed.Conclusion In this study， the differences of microstructure， TLC and fingerprint before and after processing were compared， which provided the method basis for quality control of Alocasia cucullata and Alocasia cucullata cooked with rice.

Key words：Alocasia cucullata;Processedproduct;HPLC;Fingerprint;Quality Standard

尖尾芋為天南星科植物尖尾芋Alocasia cucullata（Lour.）Schott的根莖，尖尾芋又名卜芥、老虎芋、假海芋、狼毒，最早記載于《廣西實(shí)用中草藥新選》，《中藥大辭典》《全國(guó)中草藥匯編》《中華本草》等均有收載，其味辛，味苦，性寒，具有清熱解毒、散結(jié)止痛的功效，主治流感、肺結(jié)核、支氣管炎、鉤端螺旋體病、瘡瘍癰毒初起、瘰疬，蜂窩組織炎、慢性骨髓炎、毒蛇咬傷、毒蜂蟄傷［1-3］?，F(xiàn)代藥理研究具有抗炎、抗腫瘤等作用。尖尾芋是廣西臨床常用的草藥［4］，但其生品有大毒，內(nèi)服需經(jīng)炮制減毒，文獻(xiàn)記載其炮制法有浸漂、鹽制、米炒，炮制作用為減少毒性和副作用［5］，廣西地區(qū)傳統(tǒng)多沿用米炒法，米炮制具有增強(qiáng)藥物健脾益氣功效的作用，還具有緩和藥性、降低毒性、減少刺激的作用［6］。但尚未見米炒尖尾芋質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的相關(guān)報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)對(duì)尖尾芋生品和米炒尖尾芋的粉末顯微鑒別、薄層色譜鑒別及指紋圖譜的構(gòu)建進(jìn)行了初步研究，為尖尾芋生品和米炒尖尾芋的鑒別提供了依據(jù)，為進(jìn)一步開展尖尾芋炮制品炮制減毒機(jī)理的相關(guān)性研究及質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 LC20303D島津高效液相色譜儀（上海愛朗儀器有限公司）；色譜柱（Diamonsil Plus5μmC18，150 mm×4.6 mm）；DM2000 LEICA生物顯微（德國(guó)徠卡公司）；DZKW-S-6電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）；FA2004電子天平（上海浦春計(jì)量?jī)x器有限公司）；超純水儀（美國(guó)Millipore Milli-Q Academic）；DZTW調(diào)溫電熱套（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）；101A-2ET電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海實(shí)驗(yàn)儀器廠有限公司）；CY-50炒藥機(jī)（山東青州市精誠(chéng)醫(yī)藥裝備制造有限公司）；ZF-8暗箱式四用紫外分析儀（上海嘉鵬科技有限公司）；電熱板（常州國(guó)華儀器制造有限公司）；可控調(diào)溫節(jié)能電爐（成都市森旺電爐廠）；KQ5200超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；0.45 μm有機(jī)微孔濾膜（天津市科億隆實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

1.2 試藥 硅膠GF254薄層板（青島海洋化工有限公司）；甲醇、磷酸、乙腈均為色譜純，乙醇、石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇為分析純。尖尾芋采自廣西扶綏、荔浦、蒙山等地，經(jīng)廣西藥用資源保護(hù)與遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室趙以民高級(jí)工程師鑒定為天南星科植物尖尾芋［Alocasia cucullata（Lour.）Schott］的根莖，共10批（見表1）。米炒尖尾芋為將尖尾芋根莖鮮品刮凈外表的毛和黑皮，切成絲條，晾至表面無(wú)水分，取等量大米同炒至米焦后，取出晾干，篩去米屑，得米炒尖尾芋飲片。實(shí)驗(yàn)中以尖尾芋（JWY1）對(duì)應(yīng)的制品（JWY-Z1）為對(duì)照藥材。

2 方法與結(jié)果

2.1 顯微特征

2.1.1 方法 將尖尾芋生品及其對(duì)應(yīng)米炒炮制品進(jìn)行粉碎，過(guò)3號(hào)藥篩備用，取藥材粉末按粉末制片法制作粉末片，在顯微鏡下觀察拍照，并進(jìn)行草酸鈣針晶形態(tài)變化研究［7-8］，生品和炮制品藥材樣品各制10張片，每張制片在顯微鏡下觀察10個(gè)針晶束，共100個(gè)針晶束，分別統(tǒng)計(jì)變化的針晶束數(shù)目占觀察總針晶束的百分率。觀察針晶變化的標(biāo)準(zhǔn)為針晶的尖端碎斷或溶解。

2.1.2 結(jié)果 采用光學(xué)顯微鏡對(duì)炮制前后草酸鈣針晶形態(tài)進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)生品中的草酸鈣針晶絕大多數(shù)尖端明顯，米炒制品中不只有尖端明顯的針晶束，同時(shí)也有兩端鈍圓的針晶束，還可見斷裂狀針晶散在的，如圖1。尖尾芋生品針晶形態(tài)變化百分率平均數(shù)為15.56（n=10），標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.97，尖尾芋米炒制品針晶形態(tài)變化百分率平均數(shù)為46.67（n=10），標(biāo)準(zhǔn)偏差為 6.67。

2.2 薄層鑒別

2.2.1 供試品溶液的制備 稱取尖尾芋生品及米炒炮制品藥材各5 g，置具塞錐形瓶中，分別加入95%乙醇50 mL，超聲2 h后過(guò)濾，濾液蒸干，提取物浸膏加水30 mL使溶解，依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，各提取2次，每次30 mL，棄去石油醚提取液，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状?5 mL使溶解，作為供試品溶液。另取尖尾芋生品對(duì)照藥材（JWY1）和米炒尖尾芋對(duì)照藥材（JWY-Z1）各5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。

2.2.2 薄層色譜條件及結(jié)果 按照《中國(guó)藥典》（2020年版四部附錄）薄層色譜法［9］試驗(yàn)，吸取10批尖尾芋生品供試品溶液及米炒供試品溶液各10 μL，生品和炮制品分別點(diǎn)于同一塊硅膠薄層板上，10批尖尾芋生品以石油醚-乙酸乙酯（5∶[KG-*3/5]1）為展開劑，展開，取出，晾干，在紫外燈光（365 nm）下檢視，10批供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，均顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，TLC圖譜如圖2所示。10批米炒尖尾芋以石油醚-乙酸乙酯（3∶[KG-*3/5]1）為展開劑，展開，取出，晾干，在紫外燈光（365 nm）下檢視，10批供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，均顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，TLC圖譜如圖3所示。尖尾芋生品和米炒尖尾芋重復(fù)性實(shí)驗(yàn)供試品薄層色譜圖如圖4所示。結(jié)果顯示尖尾芋生品薄層色譜圖中均顯有明顯熒光斑點(diǎn)S1，而各批尖尾芋米炒炮制品斑點(diǎn)S1不明顯，但增加了1個(gè)黃色斑點(diǎn)S2和1個(gè)藍(lán)色斑點(diǎn)S3。

2.3 尖尾芋炮制前后的指紋圖譜研究［9-10］

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil Plus C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脫（0～20 min時(shí)為5%A→15%A，20～40 min時(shí)為15%A→40%A，40～60 min時(shí)為40％A→95%A，60～65 min時(shí)為95％A→5％A）；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；柱溫：30 ℃；流速：1 mL·min-1；進(jìn)樣量：20 μL。尖尾芋生品及米炒尖尾芋的HPLC色譜圖如圖5、圖6所示。

2.3.2 供試品溶液的制備 稱取尖尾芋生品及其炮制品粉末10.0 g（過(guò)3號(hào)藥篩）置于廣口瓶中，分別加入甲醇100 mL，超聲提取120 min后靜置22 h，過(guò)濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)蒙V級(jí)甲醇溶解并轉(zhuǎn)移到10 mL容量瓶中，并定容至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，所得續(xù)濾液即為供試品溶液。

2.3.3 方法學(xué)考察 以編號(hào)為JWY10的尖尾芋藥材為樣品，進(jìn)行精密度、穩(wěn)定性及重復(fù)性考察。稱取編號(hào)為JWY10的尖尾芋藥材粉末10.0 g，按照2.3.2項(xiàng)下的方法制備成供試品溶液，隨后按2.3.1項(xiàng)下的色譜條件重復(fù)進(jìn)樣檢測(cè)6次，記錄各次主要共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，計(jì)算其RSD值。主要共有峰相對(duì)保留時(shí)間與相對(duì)峰面積的 RSD 值分別為 0.02%、0.02%、0.01%、0.01%、0.01%、0.01%與0.76%、0.22%、0.14%、0.44%、0.67%、0.32%，表明該高效液相色譜儀精密度良好。

精密吸取同一份尖尾芋（編號(hào)JWY10）供試品溶液，每次20.0 μL，按2.3.1項(xiàng)下的色譜條件分別于不同的時(shí)間點(diǎn)（0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h）進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算主要色譜峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD值，考察方法的穩(wěn)定性，主要共有峰相對(duì)保留時(shí)間與相對(duì)峰面積的 RSD 值分別為0.03%、0.37%、0.18%、0.14%、0.05%、0.04%與0.30%、0.37%、0.89%、0.49%、1.13%、1.36%，說(shuō)明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

取編號(hào)為JWY10的尖尾芋藥材粉末，按照2.3.2的方法制備6份供試品溶液，各精密吸取20 μL按2.3.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算主要色譜峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD值，主要共有峰相對(duì)保留時(shí)間與相對(duì)峰面積的RSD值分別0.25%、0.50%、0.74%、0.18%、0.25%、0.27%與0.97%、0.84%、1.17%、1.81%、1.42%、0.45%，表明該測(cè)定方法重復(fù)性良好。

2.3.4 指紋圖譜的建立 稱取10批不同產(chǎn)地的尖尾芋藥材生品以及對(duì)應(yīng)產(chǎn)地米炒炮制品各10.0 g，按照2.3.2項(xiàng)下方法制成供試品溶液，各精密吸取20 μL按2.3.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，記錄同一色譜條件下該藥材生品和炮制品的HPLC譜圖。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》（2012版），以S5號(hào)樣品（編號(hào)：JWY5）作為參照?qǐng)D譜，設(shè)置“時(shí)間窗寬度”為0.1 min，進(jìn)行多點(diǎn)校正和色譜峰匹配。在對(duì)比多個(gè)批次樣品HPLC圖譜的基礎(chǔ)上，選取10個(gè)主要色譜峰作為尖尾芋生品藥材指紋圖譜的共有峰，如圖7所示；選取8個(gè)主要色譜峰作為尖尾芋米炒炮制品藥材指紋圖譜的共有峰，如圖8所示。

2.3.5 指紋圖譜分析［11-12］

2.3.5.1 尖尾芋指紋圖譜的相似度評(píng)價(jià) 采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》（2012版）軟件對(duì)10批尖尾芋藥材生品和其米炒炮制品的HPLC譜圖進(jìn)行處理，圖譜中S5號(hào)峰（編號(hào)：JWY5）分離度良好，峰面積穩(wěn)定，保留時(shí)間合適，故以其作為參照?qǐng)D譜進(jìn)行指紋匹配。這10批尖尾芋生品與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照指紋圖譜的相似度分別為0.974、0.975、0.985、0.988、0.969、0.983、0.990、0.974、0.979、0.984，10批樣品的相似度均大于0.90， 10批尖尾芋米炒炮制品與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照指紋圖譜的相似度為分別0.982、0.969、0.940、0.949、0.970、0.970、0.978、0.980、0.930、0.954，10批樣品相似度均大于0.90。

2.3.5.2 生品尖尾芋及其炮制品米炒尖尾芋指紋圖譜比較 尖尾芋生品指紋圖譜如圖7所示，其炮制品米炒尖尾芋指紋圖譜如圖8。從圖7和圖8可發(fā)現(xiàn)米炒尖尾芋和其生品尖尾芋的指紋圖譜有明顯區(qū)別。炮制后，生品中2號(hào)峰、3號(hào)峰的含量明顯降低，7號(hào)峰的含量則升高，8號(hào)、9號(hào)和10號(hào)峰消失，結(jié)果見表2。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用光學(xué)顯微鏡對(duì)針晶的形態(tài)特征進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)尖尾芋生品中的草酸鈣針晶絕大多數(shù)尖端明顯，而米炒制品中不只有尖端明顯的針晶束，同時(shí)也有兩端鈍圓的針晶束，還可見斷裂狀針晶散在，說(shuō)明米炒炮制過(guò)程改變了針晶的形態(tài)。針晶的形態(tài)變化是否為米炒炮制過(guò)程發(fā)生和該變化是否為降低尖尾芋刺激性和毒性的機(jī)制之一有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。

在尖尾芋的TLC鑒別實(shí)驗(yàn)中，以TLC譜圖的斑點(diǎn)數(shù)、斑點(diǎn)比移植、斑點(diǎn)分離度等作為考察指標(biāo)，分別取尖尾芋及其炮制品米炒尖尾芋95%乙醇提取物、石油醚萃取物、三氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇等萃取物的溶液進(jìn)行點(diǎn)樣，分別以石油醚-氯仿（5∶[KG-*3/5]1）、石油醚-氯仿（1∶[KG-*3/5]1）、石油醚-乙酸乙酯（10∶[KG-*3/5]1）、石油醚-乙酸乙酯（8∶[KG-*3/5]1）、石油醚-乙酸乙酯（5∶[KG-*3/5]1）、石油醚-乙酸乙酯（1∶[KG-*3/5]1）等不同展開劑進(jìn)行多次試驗(yàn)和篩選，結(jié)果顯示以石油醚-乙酸乙酯（3∶[KG-*3/5]1）為展開劑，斑點(diǎn)比較清晰，分離度較好，在該展開條件下，可發(fā)現(xiàn)米炒尖尾芋和其生品尖尾芋的TLC圖譜有明顯區(qū)別，尖尾芋生品薄層色譜圖中均顯有明顯熒光斑點(diǎn)S1，而各批尖尾芋米炒炮制品斑點(diǎn)S1不明顯，但增加了一個(gè)黃色斑點(diǎn)S2和一個(gè)藍(lán)色斑點(diǎn)S3，可為米炒尖尾芋和其生品尖尾芋的TLC鑒別提供參考依據(jù)。

在尖尾芋的指紋圖譜研究實(shí)驗(yàn)中，以HPLC譜圖中相鄰色譜峰的分離度、峰形、基線平整度等作為考察指標(biāo)，分別對(duì)甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸水不同的流動(dòng)相進(jìn)行了考察，同時(shí)對(duì)尖尾芋樣品提取液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，比較波長(zhǎng)210 nm、254 nm、280 nm、290 nm處的色譜圖，發(fā)現(xiàn)280 nm處各峰峰高適宜，峰數(shù)目較多，故選取280 nm處為指紋圖譜檢測(cè)波長(zhǎng)，在選定色譜條件實(shí)驗(yàn)中10批尖尾芋生品和米炒尖尾芋的相似度均達(dá)0.90以上，米炒尖尾芋和其生品尖尾芋的指紋圖譜有明顯區(qū)別。炮制后，生品中2號(hào)峰、3號(hào)峰的含量明顯降低，7號(hào)峰的含量則升高，8號(hào)、9號(hào)和10號(hào)峰消失，米炒后毒性降低可能與這些成分的減少和消失有關(guān)，發(fā)生變化的各成分的確認(rèn)有待進(jìn)一步研究。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)米炒尖尾芋及其生品的顯微特征、薄層鑒別、 HPLC指紋圖譜的構(gòu)建進(jìn)行了初步研究，分析尖尾芋炮制前后的變化規(guī)律，米炒炮制過(guò)程改變了草酸鈣針晶的形態(tài)，以石油醚-乙酸乙酯（3∶[KG-*3/5]1）為展開劑，斑點(diǎn)比較清晰，分離度較好，在該展開條件下，可發(fā)現(xiàn)米炒尖尾芋和其生品尖尾芋的TLC圖譜有明顯區(qū)別， HPLC指紋圖譜研究實(shí)驗(yàn)中10批尖尾芋生品和米炒尖尾芋的相似度均達(dá)0.90以上，尖尾芋經(jīng)米炒炮制后部分成分含量減少或消失，為尖尾芋生品、米炒尖尾芋飲片的鑒別提供了新的方法，也為米炒尖尾芋減毒炮制機(jī)理提供參考。為進(jìn)一步開展尖尾芋炮制前后毒性、功效改變的相關(guān)性研究及尖尾芋炮制品的質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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（收稿日期：2023-10-18 編輯：劉 斌）