宋越，蘇穎，何艷，陳江帆，郭衛(wèi)

1.溫州醫(yī)科大學(xué) 眼視光學(xué)院（生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)院） 眼視光學(xué)和視覺科學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 溫州 325027；2.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院育英兒童醫(yī)院 麻醉與圍術(shù)期醫(yī)學(xué)科 小兒麻醉學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 浙江省精準(zhǔn)麻醉學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 溫州 325027

帕金森?。≒arkinson’ disease, PD）是第二大常見的神經(jīng)退行性疾病，其病理改變主要是黑質(zhì)-紋狀體通路上的多巴胺能神經(jīng)元變性壞死，而殘存的多巴胺能神經(jīng)元內(nèi)路易小體聚集。該小體主要成分是α-突觸核蛋白（α-synuclein, α-Syn）。BRAAK等[1]認(rèn)為PD的病理改變并不局限于黑質(zhì)區(qū)，而是起始于延髓，并按照延髓-中腦-大腦皮質(zhì)（包括嗅球）的順序向上呈漸進(jìn)性發(fā)展。先前的研究表明隨著時(shí)間推移，α-Syn可擴(kuò)散到除黑質(zhì)外的廣大中腦區(qū)域[2]。

近年的研究發(fā)現(xiàn)中腦多個(gè)核團(tuán)在運(yùn)動(dòng)狀態(tài)（如啟動(dòng)、維持、終止）的切換過(guò)程中發(fā)揮重要作用[3-4]，特別是位于中腦腹側(cè)的紅核（red nucleus, RN）是調(diào)節(jié)運(yùn)動(dòng)和進(jìn)行運(yùn)動(dòng)-感覺整合的重要腦區(qū)，其功能失調(diào)可能與PD的發(fā)生有關(guān)[5-6]。利用磁共振研究發(fā)現(xiàn)，PD患者中RN體積明顯增大[7]，加之RN中富含鐵，推測(cè)PD患者RN中可能存在著鐵的過(guò)量聚集[8]。通過(guò)對(duì)PD患者RN中鐵進(jìn)行檢測(cè)和定量分析，得出的數(shù)據(jù)與上述推測(cè)完全吻合，并且發(fā)現(xiàn)在PD的早期階段，只有黑質(zhì)致密部存在鐵的聚集，而在晚期PD階段，黑質(zhì)網(wǎng)狀部、蒼白球和RN均受到影響[9]，表明鐵儲(chǔ)存和代謝改變后的氧化應(yīng)激是PD神經(jīng)元細(xì)胞死亡的重要病因之一[8]。除鐵過(guò)量聚集外，RN中α-Syn異常沉積是否與PD運(yùn)動(dòng)和感覺異常存在關(guān)聯(lián)，迄今鮮見報(bào)道。

前期我們研究了α-Syn異常沉積對(duì)運(yùn)動(dòng)程序性學(xué)習(xí)[10]和運(yùn)動(dòng)技能學(xué)習(xí)[11]的影響。本研究將利用病毒過(guò)表達(dá)α-Syn這一方法[12]研究RN處α-Syn異常沉積對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)和感覺的影響，以期對(duì)探究PD的行為學(xué)表現(xiàn)及尋找PD的治療手段提供科學(xué)價(jià)值和臨床意義[5]。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康C57BL/6J小鼠，8～10周齡，體質(zhì)量20～26 g，購(gòu)于上海杰斯捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司，動(dòng)物許可證號(hào)：SYXK（浙）2015-0009。所有小鼠安置在溫州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)，飼養(yǎng)溫度控制在（22±2）℃，相對(duì)濕度為40%±10%，室內(nèi)光照維持12 h/12 h日夜交替，自由飲食，飼養(yǎng)1周熟悉環(huán)境后用于實(shí)驗(yàn)。本研究所采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案通過(guò)溫州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審核（倫理編號(hào)：xmsq2021-0012）。

1.1.2 主要試劑 AAV-2/9-CMV-bGI-SNCA-IRESEGFP-WPRE（S1108-9，上海泰兒圖生物科技有限公司）；rAAV-hSyn-EGFP-WPRE-hGH polyA（PT-0241，武漢樞密腦科學(xué)技術(shù)有限公司）；Anti-磷酸化α-Syn（phosphorylated α-Syn, p-Syn）抗體（015-25191，日本W(wǎng)AKO公司）；TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（顯色法）（C1090，上海碧云天生物技術(shù)有限公司）； Fluoromount-G熒光封片劑（05-0100-01，美國(guó)Southern Biotech公司）；驢抗鼠IgG抗體（A31570，美國(guó)Invitrogen公司）；DAPI染色液（C1005，上海碧云天生物技術(shù)有限公司）。

1.1.3 主要儀器 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱（廈門艾德生物醫(yī)藥科技有限公司）；腦立體定位儀（美國(guó)KOPF公司）；微量注射泵（美國(guó)KD公司）；微量注射器（美國(guó) Hamilton公司）；轉(zhuǎn)棒測(cè)試儀（意大利Ugo Basile Srl公司）；小鼠肌力測(cè)量?jī)x（上海雅珩信息科技有限公司）；336爪/尾刺激痛覺測(cè)試儀（美國(guó)Life Science公司）；VonFrey針刺觸覺測(cè)量套件（美國(guó)Life Science公司）；正置熒光顯微鏡Leica DM 6B（德國(guó)萊卡公司）。

1.2 方法

1.2.1 分組 17 只C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為2 組：對(duì)照組（n=10）注射對(duì)照病毒rAAV-hSyn-EGFP-WPREhGH polyA，只表達(dá)綠色熒光蛋白，不表達(dá)α-Syn；α-Syn病毒造模組即實(shí)驗(yàn)組（n=7），注射AAV-2/9-CMV-bGI-SNCA-IRES-EGFP-WPRE，表達(dá)綠色熒光蛋白和α-Syn。

1.2.2 小鼠腦立體定位病毒注射 將小鼠按照每10 g腹腔注射阿佛丁溶液0.2 mL進(jìn)行麻醉后，用腦立體定位儀夾持器固定小鼠。對(duì)小鼠頭部皮膚進(jìn)行消毒后，充分暴露小鼠的前囟和后囟點(diǎn)。RN注射坐標(biāo)為：前囟后：-3.4 mm；旁開：±0.75 mm；深度：-3.5 mm。病毒注射（20 nL/min）結(jié)束后繼續(xù)留針 5 min，縫合傷口。小鼠置于動(dòng)物用電熱毯上復(fù)蘇，蘇醒之后將其移至鼠籠飼養(yǎng)。

1.2.3 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn) 參考既往操作[13]，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)在規(guī)格為40 cm×40 cm×40 cm的隔音試驗(yàn)箱中進(jìn)行。利用EthoVision XT分析系統(tǒng)實(shí)時(shí)追蹤記錄小鼠10 min內(nèi)的運(yùn)動(dòng)情況，前5 min作為環(huán)境適應(yīng)，后5 min用于評(píng)估運(yùn)動(dòng)狀態(tài)。瞬時(shí)運(yùn)動(dòng)速度大于 2 cm/s為運(yùn)動(dòng)狀態(tài)，瞬時(shí)運(yùn)動(dòng)速度小于1.75 cm/s為靜止?fàn)顟B(tài)，根據(jù)小鼠每秒的運(yùn)動(dòng)速度來(lái)計(jì)算小鼠的總運(yùn)動(dòng)距離、運(yùn)動(dòng)時(shí)間、不動(dòng)時(shí)間和在運(yùn)動(dòng)時(shí)間內(nèi)的平均運(yùn)動(dòng)速度等參數(shù)。

1.2.4 握力測(cè)試 參考既往操作[14]，將小鼠放在小鼠肌力測(cè)量?jī)x的網(wǎng)格上，其用前肢或四肢牢牢抓住測(cè)試網(wǎng)格后猛拉小鼠尾巴，記錄下小鼠松開網(wǎng)格的峰值力度。每只小鼠測(cè)試10次，計(jì)算握力平均值和握力平均值/體質(zhì)量。

1.2.5 轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn) 參考既往操作[14]，在對(duì)小鼠進(jìn)行連續(xù)3 d的訓(xùn)練（5 min/次，3次/d）后，在測(cè)試當(dāng)天轉(zhuǎn)棒在300 s內(nèi)從5 r/min勻加速到40 r/min，記錄小鼠從轉(zhuǎn)棒上掉落的潛伏期。分析連續(xù)3次試驗(yàn)中的平均掉落時(shí)間。

1.2.6 鐵絲懸掛實(shí)驗(yàn) 參考我們既往的操作[14]，將小鼠放在40 cm×40 cm的鐵絲網(wǎng)上，鐵絲網(wǎng)蓋在40 cm×40 cm×40 cm的箱體上。小鼠四肢牢牢抓住鐵絲網(wǎng)后，慢慢地將鐵絲網(wǎng)上下顛倒，同時(shí)記錄小鼠從鐵絲網(wǎng)上掉下來(lái)的潛伏期（上限15 min）。連續(xù)測(cè)試2 d，并取均值進(jìn)行比較。

1.2.7 爬桿測(cè)試 爬桿設(shè)備由一根直徑為10 mm、長(zhǎng)50 cm的金屬棒纏繞著繃帶制作而成，參考我們既往的操作[14]，在訓(xùn)練期間將小鼠頭部朝上放在桿子的頂部（距離頂端7.5 cm），小鼠爬到桿子頂端，然后轉(zhuǎn)身爬到桿子底部，每天3次，連續(xù)2 d。在測(cè)試當(dāng)天記錄小鼠的轉(zhuǎn)身時(shí)間和轉(zhuǎn)身到達(dá)底部的總時(shí)間（上限120 s），測(cè)試3次，每次間隔至少1 h，計(jì)算3次測(cè)試的平均值。

1.2.8 痛覺閾值測(cè)試 機(jī)械性縮足閾值 （mechanical withdrawal threshold, MWT）：參考既往操作[15]，將小鼠置于底部為金屬絲網(wǎng)格架（0.8 cm×0.8 cm）的亞克力透明罩內(nèi)（18 cm× 25 cm×18 cm），利用von Frey細(xì)絲（0.08～2.0 g）垂直觸碰小鼠的右后爪腳掌趾根區(qū)域，觀察小鼠的行為反應(yīng)（如抬起、抖足或舔舐后爪）。若小鼠無(wú)明顯反應(yīng)，間隔5 min后使用刺激力度大一級(jí)的von Frey細(xì)絲進(jìn)行刺激，直到小鼠出現(xiàn)明顯的反應(yīng)；若小鼠出現(xiàn)反應(yīng)，則用刺激力度低一級(jí)的細(xì)絲進(jìn)行刺激；重復(fù)以上步驟3次。記錄小鼠的反應(yīng)情況，測(cè)試的平均值記為MWT。熱縮足反射潛伏期（thermal withdrawal latency, TWL）：參考我們既往的操 作[15]，將小鼠放置在底部為導(dǎo)熱透明玻璃板的前述透明罩中，使用336爪/尾刺激痛覺測(cè)試儀的光源照射小鼠相同的右后爪腳掌趾根區(qū)域。儀器參數(shù)設(shè)定：加熱光源在空閑時(shí)激光發(fā)射強(qiáng)度為10%，測(cè)試工作時(shí)發(fā)射強(qiáng)度為60%，切斷時(shí)間30 s，觸發(fā)溫度30 ℃。當(dāng)動(dòng)物縮爪或者啃咬腳趾逃避熱刺激時(shí)關(guān)閉光源，儀器自動(dòng)記錄反應(yīng)時(shí)間。重復(fù)以上步驟測(cè)量3次，計(jì)算平均時(shí)間記為TWL。

1.2.9 小鼠腦組織準(zhǔn)備 麻醉小鼠后暴露心臟，依次灌流0.9%氯化鈉溶液和4%多聚甲醛。將腦組織分離后放入4%多聚甲醛液體中固定6～8 h，然后轉(zhuǎn)移浸泡于20%蔗糖組織脫水液中進(jìn)行脫水，直至腦沉到底部。根據(jù)實(shí)驗(yàn)安排，冰凍切片（30 μm）后進(jìn)行染色或保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.10 組織免疫熒光染色 挑選腦片，在磷酸鈉鹽緩沖液（0.01 mol/L PBS，pH=7.2）中漂洗10 min， 重復(fù)3次。將腦片浸入封閉液中破膜封閉0.5 h，然后加入鼠源Anti-pSyn抗體（1:2 000）在室溫下慢搖孵育過(guò)夜。一抗孵育結(jié)束后，將腦片放入PBS中漂洗3次。洗滌后加入驢抗鼠二抗（1:1 000）避光孵育2 h。再次漂洗3次后，將腦片貼附在載玻片上，并滴加DAPI顯色液染色5～10 min后，滴加抗淬滅劑封片，在Leica DM 6B正置熒光顯微鏡下仔細(xì)觀察p-Syn形態(tài)并拍攝RN部位，使用ImageJ計(jì)數(shù)紅色熒光標(biāo)記神經(jīng)元數(shù)目。

1.2.11 TUNEL染色 將TUNEL染色試劑盒里的TdT酶（5 μL）和Biotin-dUTP（45 μL）配制成50 μL的凋亡檢測(cè)液。將腦片黏附于載玻片上，使用0.4% PBST通透5 min后使用PBS浸泡漂洗3 次，再將凋亡檢測(cè)液滴加在腦片上，在37 ℃烘箱避光孵育 60 min；滴加DAPI顯色液染色5～10 min后，滴加抗淬滅劑封片，在Leica DM 6B正置熒光顯微鏡下拍攝RN部位的凋亡神經(jīng)元，使用ImageJ計(jì)數(shù)紅色熒光標(biāo)記神經(jīng)元數(shù)目。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法

使用ImageJ軟件進(jìn)行定量分析，計(jì)算每只動(dòng)物RN區(qū)域15張腦片的合計(jì)值。采用GraphPad Prism 9.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料采用±s表示，2組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 α-Syn在RN處異常沉積可損毀神經(jīng)元

在實(shí)驗(yàn)組小鼠雙側(cè)RN注射可表達(dá)α-Syn的病毒，在對(duì)照組小鼠RN注射對(duì)照病毒（圖1A）。病毒表達(dá)4周后（圖1B），將小鼠進(jìn)行灌流取材并進(jìn)行冰凍切片。p-Syn免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)，相較于對(duì)照組（圖1C），實(shí)驗(yàn)組中p-Syn陽(yáng)性數(shù)目顯著增加（圖1D），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001，圖1E）。這表明α-Syn在RN處出現(xiàn)異常沉積。而TUNEL染色發(fā)現(xiàn)，在RN區(qū)域，相較于對(duì)照組（圖1F），實(shí)驗(yàn)組中陽(yáng)性神經(jīng)元顯著增加（圖1G），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001，圖1H）。

圖1 RN區(qū)域注射α-Syn病毒后，p-Syn異常沉積并導(dǎo)致神經(jīng)元凋亡

2.2 α-Syn在RN處異常沉積可以促進(jìn)小鼠的自主活動(dòng)

在病毒表達(dá)4周后，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組小鼠在曠場(chǎng)中的總運(yùn)動(dòng)距離增加和運(yùn)動(dòng)（瞬時(shí)運(yùn)動(dòng)速度大于2 cm/s）時(shí)間明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；實(shí)驗(yàn)組小鼠在曠場(chǎng)中的不動(dòng)時(shí)間（瞬時(shí)運(yùn)動(dòng)速度小于1.75 cm/s）明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；而兩組小鼠的平均運(yùn)動(dòng)速度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；見圖2。

圖2 2組小鼠在曠場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)情況比較

2.3 α-Syn在RN處異常沉積降低小鼠的運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力，但增強(qiáng)四肢肌肉力量

在病毒表達(dá)4周后，本研究通過(guò)多種實(shí)驗(yàn)評(píng)估小鼠的運(yùn)動(dòng)控制能力和神經(jīng)肌肉力量（圖3A）。轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組小鼠相比，實(shí)驗(yàn)組小鼠掉落潛伏期縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖3B）；爬桿實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組小鼠相比，實(shí)驗(yàn)組小鼠在爬桿實(shí)驗(yàn)中轉(zhuǎn)身時(shí)間不變，但轉(zhuǎn)身到達(dá)底部的時(shí)間增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見圖3C；鐵絲懸掛實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，掉落潛伏期差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，圖3D）；握力測(cè)試結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組小鼠前肢肌力增加不明顯（P＞0.05，圖3E）；但四肢肌力增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），體質(zhì)量歸一化的四肢肌力也增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見圖3F。

圖3 2組小鼠的運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力、運(yùn)動(dòng)控制和神經(jīng)肌肉力量情況比較

2.4 α-Syn在RN處異常沉積提高小鼠對(duì)熱痛刺激的敏感性

病毒表達(dá)4周后檢測(cè)兩組小鼠右后足掌趾根部的MWT和TWL（圖4A）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，雖然兩組小鼠對(duì)機(jī)械性刺激的MWT差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，圖4B），但與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組小鼠對(duì)熱刺激的TWL顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖4C）。

圖4 2組小鼠的MWT和TWL比較

3 討論

正常小鼠具有攀爬活性，這需要適當(dāng)?shù)奈樟瓦\(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性，本研究的轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明小鼠的運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性出現(xiàn)明顯障礙，這種現(xiàn)象在爬桿實(shí)驗(yàn)中得到進(jìn)一步確認(rèn)—實(shí)驗(yàn)組小鼠轉(zhuǎn)身到達(dá)底部的時(shí)間增加，小鼠出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)遲緩的癥狀。鐵絲懸掛實(shí)驗(yàn)可以評(píng)估PD小鼠模型的握力，握力測(cè)試可以檢測(cè)小鼠的神經(jīng)肌肉力量。正常的成年小鼠會(huì)伸展四肢，在基底神經(jīng)節(jié)功能障礙中可以觀察到由脊髓引起的異常屈曲反應(yīng)，導(dǎo)致小鼠四肢屈曲[16]。本研究發(fā)現(xiàn)RN處α-Syn異常沉積導(dǎo)致四肢肌肉力量明顯增強(qiáng)，可能是由于小鼠的后爪過(guò)度屈曲導(dǎo)致的，這可能與PD患者的病理性抓握反射有關(guān)[17]。Thy1-α-Syn（L61）小鼠（L61 tg小鼠）和（Thy-1）-h[A30P]α-Syn（A30P）小鼠（A30P tg小鼠）均是SNCA轉(zhuǎn)基因小鼠，廣泛用于PD病理研究[16]。研究發(fā)現(xiàn)7月齡的L61 tg小鼠的運(yùn)動(dòng)時(shí)間、總運(yùn)動(dòng)距離和運(yùn)動(dòng)速度均有增加[18]，但14月齡的L61 tg小鼠在曠場(chǎng)中運(yùn)動(dòng)則減少[19]。而12月齡的A30P tg小鼠在曠場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)顯著增加，但4月齡的小鼠則未有運(yùn)動(dòng)異常[20]。這些觀察結(jié)果的差異提示α-Syn過(guò)表達(dá)小鼠的行為異?？赡芫哂心挲g相關(guān)性。α-Syn在RN病理性沉積促進(jìn)小鼠在曠場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)也可能是因?yàn)樘幱诓〕痰脑缙陔A段，這需要后續(xù)更長(zhǎng)時(shí)間的觀察。

疼痛是多數(shù)PD患者主訴的非運(yùn)動(dòng)癥狀之一，表型復(fù)雜且病因多樣[21]。伴隨疼痛癥狀的PD患者中，其中三分之二是慢性疼痛。PD中受神經(jīng)退行性影響的多個(gè)區(qū)域（如邊緣結(jié)構(gòu)、丘腦、中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)和脊髓）的功能異?？蓪?dǎo)致中樞傷害性疼痛。但對(duì)PD中疼痛的發(fā)生機(jī)制還缺乏深入了解。早期的研究發(fā)現(xiàn)刺激嚙齒動(dòng)物的RN會(huì)產(chǎn)生持久而強(qiáng)烈的鎮(zhèn)痛作用[22]，這可能是通過(guò)RN與鎮(zhèn)痛感受系統(tǒng)（如中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)、中縫大核和外側(cè)網(wǎng)狀核）的稀疏解剖連接來(lái)介導(dǎo)的[23]。最近的研究[24]表明RN可通過(guò)分泌炎性因子雙向調(diào)節(jié)神經(jīng)性疼痛，而在RN注射不同劑量的抗IL-6抗體可劑量依賴性地增加大鼠的MWT，并減輕坐骨神經(jīng)分支損傷引起的異常機(jī)械性疼痛。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)RN IL-33參與了神經(jīng)性疼痛的早期發(fā)展，并通過(guò)激活NF-κB、ERK、p38 MAPK和JAK2/STAT3信號(hào)通路產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用[25]。我們的研究發(fā)現(xiàn)RN處α-Syn異常沉積可敏化熱痛刺激，這也為PD神經(jīng)性疼痛的治療提供了潛在的治療靶點(diǎn)。

RN內(nèi)存在興奮性谷氨酸能神經(jīng)元和抑制性γ-氨基丁酸能神經(jīng)元混雜分布[26]，這限制了對(duì)不同類型神經(jīng)元調(diào)控運(yùn)動(dòng)的精細(xì)研究。新近的研究發(fā)現(xiàn)，光遺傳激活RN谷氨酸能神經(jīng)元或者刺激RN至腹側(cè)被蓋區(qū)谷氨酸通路可以產(chǎn)生運(yùn)動(dòng)獎(jiǎng)賞；反之，抑制該通路則減弱運(yùn)動(dòng)獎(jiǎng)賞[27]。應(yīng)激后大鼠的RN谷氨酸能神經(jīng)元活性下降；抑制RN谷氨酸能神經(jīng)元對(duì)大鼠運(yùn)動(dòng)能力無(wú)影響，但減少大鼠在中心區(qū)的停留時(shí)間；激活RN谷氨酸能神經(jīng)元對(duì)大鼠運(yùn)動(dòng)能力無(wú)影響，但會(huì)增加大鼠在中心區(qū)的停留時(shí)間[28]。這些研究提示RN內(nèi)不同類型的神經(jīng)元可能介導(dǎo)不同的功能。

綜上所述，本研究將表達(dá)α-Syn的病毒特異性注射到RN誘導(dǎo)產(chǎn)生p-Syn病理性沉積，發(fā)現(xiàn)損毀該區(qū)域神經(jīng)元可導(dǎo)致小鼠運(yùn)動(dòng)和感覺異常。這主要表現(xiàn)為：促進(jìn)小鼠的自主運(yùn)動(dòng)，降低小鼠的平衡協(xié)調(diào)能力和運(yùn)動(dòng)控制功能，增強(qiáng)小鼠的四肢肌肉力量，對(duì)機(jī)械性刺激耐受力較強(qiáng)，對(duì)熱痛刺激較敏感。這些結(jié)果為認(rèn)識(shí)RN在PD發(fā)生中的作用提供了新的認(rèn)識(shí)，也有助于為PD異常行為提供潛在的干預(yù)策略。