熊濤，李秀山

骨肉瘤是骨組織中最常見(jiàn)的原發(fā)性惡性腫瘤，好發(fā)于青少年，具有較高的局部侵襲和遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移傾向。骨肉瘤治療以新輔助化療、手術(shù)聯(lián)合化療為主，但轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)仍是患者死亡的主要原因。了解骨肉瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的機(jī)制將為開(kāi)發(fā)特異性骨肉瘤治療策略提供理論基礎(chǔ)。環(huán)狀RNA（circRNA）是由5'端和3'端連接形成的共價(jià)閉合環(huán)新型RNA，其主要功能是作為miRNA 海綿，通過(guò)抑制miRNA 來(lái)調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)[1]。多項(xiàng)研究表明，circRNA 表達(dá)失調(diào)與腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移、凋亡的化療敏感性或耐藥性之間存在聯(lián)系，靶向特定circRNA 可能是抑制腫瘤進(jìn)展的潛在方法[2-3]。研究指出環(huán)狀RNA CRK 樣原癌基因（circRNA CRK like proto-oncogene, circCRKL）在前列腺癌中表達(dá)降低，過(guò)表達(dá)circCRKL 抑制癌細(xì)胞周期進(jìn)展和侵襲，抑制腫瘤生長(zhǎng)[4]。但circCRKL在骨肉瘤中的功能未見(jiàn)報(bào)道。miR-942-5p是一種致癌因子，下調(diào)miR-942-5p表達(dá)水平對(duì)肺癌、結(jié)直腸癌細(xì)胞惡性行為均有抑制作用[5-6]。靶基因預(yù)測(cè)到miR-942-5p 是circCRKL 的潛在靶點(diǎn)，但circCRKL 靶向miR-942-5p是否調(diào)控骨肉瘤進(jìn)展仍需探討。因此，本研究重點(diǎn)分析了骨肉瘤組織中circCRKL 和miR-942-5p 的表達(dá)情況，并探討circCRKL 靶向miR-942-5p 對(duì)骨肉瘤Saos-2細(xì)胞生物行為的影響。

1 資料與方法

1.1 骨肉瘤組織和細(xì)胞

納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診為股骨遠(yuǎn)端或脛骨近端骨肉瘤；②年齡10～65歲；③生存期＞3個(gè)月；④既往無(wú)化療史；⑤功能狀態(tài)評(píng)分≥60分。排除標(biāo)準(zhǔn)：①服用止吐藥物或影響胃腸動(dòng)力藥物者；②肝腎功能不全者；③有腦部轉(zhuǎn)移者；④有嚴(yán)重免疫系統(tǒng)疾病者；⑤妊娠期或哺乳期婦女；⑥有精神疾病或認(rèn)知障礙者；⑦伴其他惡性腫瘤者。

回顧性分析2018 年1 月至2022 年12 月于荊州市第一人民醫(yī)院接受新輔助化療的41例骨肉瘤患者的臨床資料。男25 例，女16 例；年齡5～25 歲，年齡13.0（10.0，17.5）歲。所有患者在接受此次治療前均未接受任何抗腫瘤治療，手術(shù)時(shí)取骨肉瘤組織和瘤旁組織。采集組織標(biāo)本后，立即保存于液氮中。

本研究獲得荊州市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過(guò)（JZ202212013），患者豁免知情同意。

1.2 主要試劑

TRIzol 試劑、SYBR Green PCR Master mix、PrimeScript 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自大連寶生物公司；熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒、pcDNA、pcDNA-circCRKL、si-NC、si-circCRKL、anti-miR-942-5p、anti-miR-NC、miR-942-5p模擬物、miR-NC 由蘇州鴻迅生物公司提供；CCK-8試劑盒購(gòu)自南京恩晶生物公司；兔抗N 鈣黏蛋白（N-cadherin）抗體（AF0243）、兔抗E-cadherin 抗體（AF6759）、兔抗磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）抗體（AF1186）、羊抗兔IgG 二抗（A0208）購(gòu)自上海碧云天生物公司。人成骨肉瘤細(xì)胞Saos-2 購(gòu)自美國(guó)細(xì)胞培養(yǎng)物收藏中心。

1.3 研究方法

1.3.1 RT-qPCR評(píng)估circCRKL和miR-942-5p表達(dá)

TRIzol 法分離組織樣本的總RNA，按照PrimeScript 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明合成cDNA，隨后用SYBR Green PCR Master mix 進(jìn)行RT-qPCR 反應(yīng)。按照2-ΔΔCt方法計(jì)算RT-qPCR 檢測(cè)結(jié)果。circCRKL上游5′-ACCTGCTCATGCATACGCTC-3′，下游5′-AGATCCCATTGGTGGGCTTG-3′；內(nèi)參GAPDH上游5′-GTCAACGGATTTGGTCTGTATT-3′，下游5′-AGTCTTCTGGGTGGCAGTGAT-3′；miR-942-5p上游5′-CCGTCTTCTCTGTTTTGGCCATGTG-3′，下游5′-GAAGGATGACACGCAAATTCG-3′；內(nèi)參U6 上游5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′，5′-AACG CTTCACGAATTTGCGT-3′。

1.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)和分組

選擇包含10%胎牛血清、1%青霉素/鏈霉素的DMEM 培養(yǎng)基放入含5%二氧化碳、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)Saos-2細(xì)胞。將對(duì)數(shù)期Saos-2細(xì)胞以每孔5×103個(gè)細(xì)胞的密度接種24 孔板，在細(xì)胞60%匯合時(shí)，將Lipo2000 與載體或序列片段復(fù)合物加入到Saos-2 細(xì)胞中，根據(jù)轉(zhuǎn)染載體或序列不同分為pcDNA 組、pcDNA-circCRKL 組、si-NC 組、si-circCRKL 組、anti-miR-NC 組、pcDNA-circCRKL+miR-NC 組、anti-miR-942-5p 組、pcDNA-circCRKL+miR-942-5p組。收集轉(zhuǎn)染48 h細(xì)胞，RT-qPCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染結(jié)果。

1.3.3 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力

將轉(zhuǎn)染細(xì)胞以每孔5×103個(gè)細(xì)胞的密度接種96孔板，常規(guī)培養(yǎng)48 h，更換為含10%CCK-8的培養(yǎng)液，繼續(xù)孵育2 h，酶標(biāo)儀測(cè)量孔在450 nm 處的光密度（optical density, OD）值。

1.3.4 劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移

將轉(zhuǎn)染細(xì)胞以6×104/孔接種6 孔板，培養(yǎng)過(guò)夜直到細(xì)胞達(dá)到90%匯合，用100 μL移液管尖端在細(xì)胞表面劃線(xiàn)。用PBS清洗平板中損傷細(xì)胞，加入無(wú)血清培養(yǎng)基在培養(yǎng)0 h和48 h時(shí)拍照，使用Image J軟件檢測(cè)劃痕距離。劃痕愈合率（%）=［（0 h劃痕距離-24 h劃痕距離）/0 h劃痕距離］×100%

1.3.5 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲

將200 μL無(wú)血清培養(yǎng)基重懸的細(xì)胞懸液（含1×105個(gè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞）接種預(yù)涂有基質(zhì)膠的上腔，將500 μL 含有10%胎牛血清的培養(yǎng)基加入下室。在37℃孵育24 h 后，用4%多聚甲醛固定膜下表面細(xì)胞，用0.5%結(jié)晶紫染色。顯微鏡下隨機(jī)選擇3 個(gè)視野拍照和計(jì)數(shù)，以細(xì)胞平均數(shù)表示侵襲數(shù)。

1.3.6 集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞克隆能力

將轉(zhuǎn)染細(xì)胞以800/孔接種6 孔板，37℃常規(guī)培養(yǎng)14 d 直到細(xì)胞集落。用4%多聚甲醛固定菌落，0.5%結(jié)晶紫染色。計(jì)數(shù)大于50個(gè)細(xì)胞的克隆數(shù)。

1.3.7 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)N-cadherin 和E-cadherin 蛋白水平

向轉(zhuǎn)染細(xì)胞中加入RIPA 緩沖液裂解細(xì)胞，收集上清液測(cè)定濃度和純度。通過(guò)十二烷基硫酸鈉凝膠電泳分離后，在半干轉(zhuǎn)膜儀中完成轉(zhuǎn)膜。將膜置于5%脫脂牛奶中封閉，然后與抗N-cadherin 抗體、抗E-cadherin 抗體、抗GAPDH 抗體在4℃孵育10 h；隨后與二抗在37℃孵育2 h。用化學(xué)發(fā)光法顯色，用Image Lab軟件測(cè)定其相對(duì)于GAPDH的灰度值。

1.3.8 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)

基于Starbase 預(yù)測(cè)結(jié)合位點(diǎn)合成circCRKL 野生序列或突變序列，將上述序列克隆到psiCHECK-2 載體構(gòu)建circCRKL 野生型（wild type, WT）報(bào)告質(zhì)粒（WT-circCRKL）和circCRKL 突變型（mutant, MUT）報(bào)告質(zhì)粒（MUT-circCRKL）。將構(gòu)建的質(zhì)粒與miR-942-5p 模擬物、miR-NC 分別共轉(zhuǎn)染Saos-2 細(xì)胞，培養(yǎng)48 h后檢測(cè)細(xì)胞相對(duì)熒光素酶活性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，每次重復(fù)3遍，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組比較采用單因素方差分析和t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 circCRKL 和miR-942-5p 在骨肉瘤組織中的表達(dá)

骨肉瘤組織中circCRKL相對(duì)表達(dá)水平顯著低于瘤旁組織（P＜0.05），miR-942-5p 相對(duì)表達(dá)水平顯著高于瘤旁組織（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 circCRKL和miR-942-5p在骨肉瘤組織中的表達(dá)（n=41，±s）

表1 circCRKL和miR-942-5p在骨肉瘤組織中的表達(dá)（n=41，±s）

分組瘤旁組織骨肉瘤組織t值P值circCRKL相對(duì)表達(dá)水平1.00±0.08 0.36±0.04 45.817＜0.001 miR-942-5p相對(duì)表達(dá)水平1.00±0.11 4.56±0.39 56.254＜0.001

2.2 circCRKL 過(guò)表達(dá)對(duì)骨肉瘤Saos-2 細(xì)胞增殖的影響

pcDNA-circCRKL 組細(xì)胞circCRKL 相對(duì)表達(dá)水平顯著高于pcDNA 組（P＜0.05），與pcDNA 組比較，pcDNA-circCRKL 組Saos-2 細(xì)胞OD 值、克隆數(shù)顯著降低（P均＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 circCRKL過(guò)表達(dá)對(duì)骨肉瘤Saos-2細(xì)胞增殖的影響（n=9，±s）

表2 circCRKL過(guò)表達(dá)對(duì)骨肉瘤Saos-2細(xì)胞增殖的影響（n=9，±s）

分組pcDNA組pcDNA-circCRKL組t值P值circCRKL相對(duì)表達(dá)水平1.00±0.00 2.84±0.27 20.444＜0.001 OD值0.76±0.06 0.37±0.03 17.441＜0.001細(xì)胞克隆形成數(shù)（個(gè)）84.01±7.05 38.28±3.36 17.567＜0.001

2.3 circCRKL 過(guò)表達(dá)對(duì)骨肉瘤Saos-2 細(xì)胞遷移侵襲的影響

與pcDNA組比較，pcDNA-circCRKL組Saos-2細(xì)胞劃痕愈合率、侵襲數(shù)、N-cadherin蛋白相對(duì)表達(dá)水平顯著降低（P均＜0.05），E-cadherin蛋白相對(duì)表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05），見(jiàn)圖1和表3。

圖1 circCRKL過(guò)表達(dá)對(duì)骨肉瘤Saos-2細(xì)胞遷移侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

表3 circCRKL過(guò)表達(dá)對(duì)骨肉瘤Saos-2細(xì)胞遷移侵襲的影響（n=9，±s）

表3 circCRKL過(guò)表達(dá)對(duì)骨肉瘤Saos-2細(xì)胞遷移侵襲的影響（n=9，±s）

分組pcDNA組pcDNAcircCRKL組t值P值劃痕愈合率（%）64.08±5.63 24.12±2.23 19.797＜0.001侵襲細(xì)胞數(shù)（個(gè)）109.86±10.53 52.93±5.19 14.548＜0.001 E-cadherin蛋白相對(duì)表達(dá)水平0.24±0.03 0.73±0.06 21.913＜0.001 N-cadherin蛋白相對(duì)表達(dá)水平0.61±0.05 0.21±0.02 22.283＜0.001

2.4 circCRKL靶向調(diào)控miR-942-5p的表達(dá)

StarBase 預(yù)測(cè)得到circCRKL 的序列中含有與miR-942-5p存在互補(bǔ)序列（圖2）。同與WT-circCRKL共轉(zhuǎn)染時(shí)，轉(zhuǎn)染miR-942-5p模擬物與轉(zhuǎn)染miR-NC 相比導(dǎo)致細(xì)胞相對(duì)熒光素酶活性降低（P＜0.05，表4）。pcDNA-circCRKL組與pcDNA組比較細(xì)胞miR-942-5p相對(duì)表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05），si-circCRKL 組與si-NC組比較細(xì)胞miR-942-5p相對(duì)表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05），見(jiàn)表5。

圖2 circCRKL序列中含有與miR-942-5p互補(bǔ)的核苷酸序列

表4 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)（n=9，±s）

表4 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)（n=9，±s）

分組miR-NC miR-942-5p t值P值WT-circCRKL相對(duì)表達(dá)水平1.01±0.05 0.52±0.05 20.789＜0.001 MUT-circCRK相對(duì)表達(dá)水平1.03±0.05 1.00±0.06 1.152 0.266

表5 circCRKL調(diào)控miR-942-5p的表達(dá)（n=9，±s）

表5 circCRKL調(diào)控miR-942-5p的表達(dá)（n=9，±s）

注：①與pcDNA組比較，P＜0.05；②與si-NC組比較，P＜0.05。

分組pcDNA組pcDNA-circCRKL組si-NC組si-circCRKL組F值P值miR-942-5p相對(duì)表達(dá)水平1.00±0.00 0.34±0.03①0.98±0.06 2.71±0.23②647.012＜0.001

2.5 干擾miR-942-5p 表達(dá)對(duì)骨肉瘤Saos-2 細(xì)胞增殖、遷移侵襲的影響

與anti-miR-NC組比較，anti-miR-942-5p組Saos-2細(xì)胞OD 值、克隆數(shù)、miR-942-5p 相對(duì)表達(dá)水平、劃痕愈合率、侵襲數(shù)、N-cadherin 蛋白相對(duì)表達(dá)水平顯著降低（P均＜0.05），E-cadherin 蛋白相對(duì)表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05），見(jiàn)圖3和表6。

圖3 干擾miR-942-5p表達(dá)對(duì)骨肉瘤Saos-2細(xì)胞遷移侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

表6 干擾miR-942-5p表達(dá)對(duì)骨肉瘤Saos-2細(xì)胞增殖、遷移侵襲的影響（n=9，±s）

表6 干擾miR-942-5p表達(dá)對(duì)骨肉瘤Saos-2細(xì)胞增殖、遷移侵襲的影響（n=9，±s）

分組anti-miR-NC組anti-miR-942-5p組t值P值miR-942-5p相對(duì)表達(dá)水平1.00±0.00 0.24±0.03 76.000＜0.001 OD值0.78±0.06 0.42±0.04 14.977＜0.001細(xì)胞克隆形成數(shù)（個(gè)）87.21±6.37 42.94±4.12 17.507＜0.001劃痕愈合率（%）67.03±4.92 28.65±3.37 19.307＜0.001侵襲細(xì)胞數(shù)（個(gè)）107.37±12.19 58.71±4.23 11.314＜0.001 E-cadherin蛋白相對(duì)表達(dá)水平0.23±0.02 0.68±0.04 30.187＜0.001 N-cadherin蛋白相對(duì)表達(dá)水平0.63±0.05 0.28±0.02 19.498＜0.001

2.6 上調(diào)miR-942-5p 表達(dá)逆轉(zhuǎn)了circCRKL 過(guò)表達(dá)對(duì)骨肉瘤Saos-2細(xì)胞增殖、遷移侵襲的作用

與pcDNA-circCRKL+miR-NC 組比較，pcDNAcircCRKL+miR-942-5p組Saos-2細(xì)胞OD值、克隆數(shù)、miR-942-5p 相對(duì)表達(dá)水平、劃痕愈合率、侵襲數(shù)、N-cadherin蛋白相對(duì)表達(dá)水平顯著升高（P均＜0.05），E-cadherin 蛋白相對(duì)表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05），見(jiàn)圖4和表7。

圖4 上調(diào)miR-942-5p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了circCRKL過(guò)表達(dá)對(duì)骨肉瘤Saos-2細(xì)胞遷移侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)的作用

表7 上調(diào)miR-942-5p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了circCRKL過(guò)表達(dá)對(duì)骨肉瘤Saos-2細(xì)胞增殖、遷移侵襲的作用（n=9，±s）

表7 上調(diào)miR-942-5p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了circCRKL過(guò)表達(dá)對(duì)骨肉瘤Saos-2細(xì)胞增殖、遷移侵襲的作用（n=9，±s）

分組pcDNA-circCRKL+miR-NC組pcDNA-circCRKL+miR-942-5p組t值P值miR-942-5p相對(duì)表達(dá)水平1.00±0.00 2.96±0.24 24.500＜0.001 OD值0.35±0.03 0.67±0.05 16.464＜0.001細(xì)胞克隆形成數(shù)（個(gè)）36.91±3.13 73.12±6.42 15.209＜0.001劃痕愈合率（%）23.15±2.26 54.68±4.81 17.799＜0.001侵襲細(xì)胞數(shù)（個(gè)）50.85±4.05 89.97±7.05 14.435＜0.001 E-cadherin蛋白相對(duì)表達(dá)水平0.75±0.05 0.35±0.03 20.580＜0.001 N-cadherin蛋白相對(duì)表達(dá)水平0.20±0.02 0.53±0.04 22.137＜0.001

3 討論

circRNA 可能在骨肉瘤中起到抑癌或致癌作用，并已用于調(diào)節(jié)癌細(xì)胞惡性行為和化療耐藥。研究發(fā)現(xiàn)，骨肉瘤中circ_0021347 低表達(dá)與較高的TNM 分期、較短的總生存期有關(guān)[7]。circ_0000190 過(guò)表達(dá)可抑制骨肉瘤細(xì)胞侵襲行為[8]。環(huán)狀RNA la 相關(guān)RNA結(jié)合蛋白4（circular RNA La-related RNA-binding protein 4，circ-LARP4）高表達(dá)與骨肉瘤患者無(wú)病生存期延長(zhǎng)相關(guān)，并可增強(qiáng)其對(duì)阿霉素和順鉑的敏感性[9]。然而，circ_001621、circ_0000285、circ_0001658等circRNA 在骨肉瘤中上調(diào)并促進(jìn)其惡性增殖和遷移行為[10-12]。本研究結(jié)果顯示，骨肉瘤組織中circCRKL 相對(duì)表達(dá)水平降低，提示circCRKL 下調(diào)可能促進(jìn)骨肉瘤進(jìn)展。為揭示circCRKL 生物學(xué)功能，本研究轉(zhuǎn)染si-circCRKL 至Saos-2 細(xì)胞，結(jié)果表明，circCRKL 過(guò)表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞活力和克隆能力下降，這與circCRKL 在白血病中的抗增殖作用相同[13]，表明circCRKL 是骨肉瘤的抑癌因子。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）可促進(jìn)腫瘤侵襲性表型，并通過(guò)淋巴和血液循環(huán)導(dǎo)致局部侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[14]。研究報(bào)道在骨肉瘤中circ_03955、circ_0001721 均通過(guò)調(diào)節(jié)EMT 來(lái)加速腫瘤進(jìn)展[15-16]。上皮表型喪失和間質(zhì)特性獲得是EMT 的基本特征，本研究發(fā)現(xiàn)circCRKL過(guò)表達(dá)導(dǎo)致Saos-2細(xì)胞遷移和侵襲能力降低，并伴隨上皮表型分子E-cadherin 上調(diào)和間質(zhì)表型分子N-cadherin 下調(diào)，這提示circCRKL通過(guò)阻礙EMT進(jìn)而抑制骨肉瘤侵襲轉(zhuǎn)移。

目前已在前列腺癌、白血病中報(bào)道circCRKL 的致癌作用，其作用機(jī)制均與調(diào)控miRNA 表達(dá)有關(guān)[4,13]，但circCRKL是否通過(guò)吸附miRNA發(fā)揮骨肉瘤調(diào)控作用尚不清楚。miR-942-5p 在黑色素瘤中表達(dá)上調(diào)，miR-942-5p 高表達(dá)預(yù)示黑色素瘤患者預(yù)后不良，下調(diào)miR-942-5p可有效抑制黑色素瘤細(xì)胞惡性行為[17]。miR-942-5p高表達(dá)還參與肝癌的EMT、糖酵解和侵襲過(guò)程[18]。在宮頸癌和口腔鱗癌中miR-942-5p可作為circ-EPSTI1、circ-AKT1的靶miRNA來(lái)抑制腫瘤進(jìn)展[19-20]。本研究證實(shí)，骨肉瘤組織中miR-942-5p相對(duì)表達(dá)水平升高，干擾miR-942-5p表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞活力和克隆能力下降，E-cadherin 蛋白相對(duì)表達(dá)水平升高，N-cadherin蛋白相對(duì)表達(dá)水平降低，細(xì)胞遷移和侵襲能力下降。同時(shí)，本研究證實(shí)miR-942-5p 是circCRKL 的直接靶點(diǎn)，且circCRKL 靶向負(fù)性調(diào)控miR-942-5p 表達(dá)，且干擾miR-942-5p 表達(dá)和circCRKL過(guò)表達(dá)的抗骨肉瘤活性一致，提示骨肉瘤中可能存在circCRKL/miR-942-5p調(diào)控途徑。本研究在Saos-2細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染anti-miR-942-5p和si-circCRKL，結(jié)果表明，上調(diào)miR-942-5p表達(dá)顯著減弱了circCRKL過(guò)表達(dá)對(duì)骨肉瘤Saos-2 細(xì)胞增殖、E-cadherin 和N-cadherin 表達(dá)以及遷移、侵襲的作用，進(jìn)一步證實(shí)circCRKL 通過(guò)靶向下調(diào)miR-942-5p 抑制骨肉瘤Saos-2細(xì)胞惡性行為。

4 結(jié)論

骨肉瘤中circCRKL 表達(dá)降低，miR-942-5p 表達(dá)升高。circCRKL通過(guò)靶向下調(diào)miR-942-5p表達(dá)來(lái)抑制骨肉瘤Saos-2 的增殖、遷移和侵襲，這可能為改善骨肉瘤治療提供新的分子靶點(diǎn)。

【利益沖突】所有作者均聲明不存在利益沖突